定量分析方法性能确认

1、学习和讨论内容学习和讨论内容Page 2方法确认的支持性文件方法确认的支持性文件ALBALB试剂说明书试剂说明书ALBALB试剂说明书试剂说明书管理机构的要求管理机构的要求 20032003年年1 1月月2424日日, ,美国医医疗服务中心美国医医疗服务中心 (CMS(CMS、 the the Final CLIA Rule) Final CLIA Rule) 公布公布. . 陈述：陈述： “ “实验室的分析方法（实验室的分析方法（non-waivednon-waived）必须要确认其性能）必须要确认其性能.”.” 管理机构的要求管理机构的要求 使用美国食品及药物管理局认可的但未更改的方法，使

2、用美国食品及药物管理局认可的但未更改的方法，实验室要证实其方法的性能与生产厂家所建立方法的性能实验室要证实其方法的性能与生产厂家所建立方法的性能进行比较。进行比较。管理机构的要求管理机构的要求CLIA 是根据分析方法的复杂性，方法分为三大类是根据分析方法的复杂性，方法分为三大类: 1. Waived tests (豁免试验豁免试验) 2. Non-waived unmodified tests moderate and high complexity tests (中度或高度试验中度或高度试验) 3. Non-waived, modified (or in-house developed) t

3、ests. (更更改中度或高度试验或开发的试验改中度或高度试验或开发的试验)管理机构的要求管理机构的要求 Non-waived,未更改的中等和高度复杂性未更改的中等和高度复杂性 化学、血液学化学、血液学etc.要求进行四个方面的方法确认要求进行四个方面的方法确认1.重复性实验重复性实验 Replication experiment (estimate imprecision)2.方法学的比较方法学的比较Comparison of methods (estimate inaccuracy)3.线性实验线性实验Linearity experiment (reportable range) 4.参考

4、值的确认参考值的确认Establish reference intervals. 管理机构的要求管理机构的要求 Non-waived tests更改的中等和高度复杂性或实验室开发的试更改的中等和高度复杂性或实验室开发的试验，要求进行六个方面的方法确认验，要求进行六个方面的方法确认1.Precision 精密度精密度 2.Accuracy 准确度准确度 3.Reportable range 可报告范围可报告范围 4.Reference Intervals 参考值范围参考值范围 5.Analytical sensitivity (detection limit) 分析灵敏度（最低检测值）分析灵敏度

5、（最低检测值）6. Analytical specificity (interfering substances) 分析的特异性（干扰物质）分析的特异性（干扰物质） 管理机构的要求管理机构的要求 医疗机构临床实验室管理办法医疗机构临床实验室管理办法检查细则检查细则（通用要求）（通用要求） 医疗机构临床实验室应当保证检测系统的完整性医疗机构临床实验室应当保证检测系统的完整性和有效性，对需要校准的检验仪器、检验项目和对和有效性，对需要校准的检验仪器、检验项目和对临床检验结果有影响的辅助设备定期进行校准。临床检验结果有影响的辅助设备定期进行校准。 CAP-LAP的要求的要求COM.40300 Ana

6、lytic Accuracy/Precision Phase IIThe laboratory verifies or establishes analytic accuracy and precision for each test.COM.40400 Analytic Sensitivity Phase IIThe laboratory verifies or establishes the analytic sensitivity (lower detection limit) of each assay, as applicable.COM.40500 Analytic Interfe

7、rences Phase II The laboratory verifies or establishes analytic interferences for each test COM.40600 Reportable Range Phase IIThe reportable range (analytic measurement range) is verified/established for each analytic procedure before implementationCOM.50000 Reference Intervals Phase IIThe laborato

8、ry establishes or verifies its reference intervals (normal values).方法确认的支持性文件方法确认的支持性文件定量实验室方法的初步评价定量实验室方法的初步评价 （CLSI EP10）临床化学设备操作精密度评价临床化学设备操作精密度评价 （ CLSI EP5）用患者标本进行方法学比较和偏倚评估用患者标本进行方法学比较和偏倚评估 （ CLSI EP9）定量分析方法的线性（定量分析方法的线性（ CLSI EP6）临床化学干扰试验临床化学干扰试验 （ CLSI EP7）基质效应的评价基质效应的评价 （ CLSI EP14）精密度和准确度性

9、能的用户证实精密度和准确度性能的用户证实 (EP15-A)CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute 方法的评价的主要内容方法的评价的主要内容方法确认方法确认= 评价误差评价误差 总误差总误差 = 系统误差系统误差 +随机误差随机误差 . 方法确认的基本内容方法确认的基本内容: 评价不精密度评价不精密度 (随机误差随机误差) 评价不准确度评价不准确度 (系统误差系统误差) 可报告范围的确认可报告范围的确认 (线性线性) 参考值的确认参考值的确认 (正常值范围正常值范围) 方法的评价的主要内容方法的评价的主要内容 对于更改的中等和高度复杂性或

10、实验室开发的试对于更改的中等和高度复杂性或实验室开发的试验，要增加二项内容：验，要增加二项内容： 分析方法的灵敏度分析方法的灵敏度Analytical sensitivity (limit of detection) 分析方法的特异性分析方法的特异性Analytical specificity (interfering substance)不精密度不精密度 指同一样本在一定条件下多次重复测定得到的一系指同一样本在一定条件下多次重复测定得到的一系列单次测定值之间的接近程度，是表示测定结果中随机误列单次测定值之间的接近程度，是表示测定结果中随机误差大小程度的指标。差大小程度的指标。 用标准差和变异

11、系数描述不精密度的大小用标准差和变异系数描述不精密度的大小不精密度不精密度 1.计算批内（间）不精密度计算批内（间）不精密度(CV或或SD), 并将与厂家批内并将与厂家批内（间）不精密度比较（间）不精密度比较 2.计算总不精密度计算总不精密度(CV或或SD)，并将与厂家总不精密度比，并将与厂家总不精密度比较较 3.不精密度分析目标进行比较不精密度分析目标进行比较不精密度不精密度CLIA88CLIA88推荐最大测量不精密度推荐最大测量不精密度不正确度不正确度 大批检测结果的均大批检测结果的均值与真值的一致程度值与真值的一致程度与系统误差有关，常与系统误差有关，常用用偏倚偏倚表示不正确度表示不正确

12、度Page 20测量不正确度与检测系统的关系测量不正确度与检测系统的关系 检测系统检测系统校 准校 准品品试剂试剂分 析分 析仪仪不正确度不正确度 评价准确度的常用试验评价准确度的常用试验 方法比较试验方法比较试验 回收试验回收试验 干扰试验干扰试验不正确度不正确度方法比较试验（方法比较试验（comparison of methods experiment） 将试验方法（待评价或待验证的方法）与比较方法（参考将试验方法（待评价或待验证的方法）与比较方法（参考方法或准确度已知的方法）进行比较方法或准确度已知的方法）进行比较 用于评价试验方法的恒定和比例系统误差。用于评价试验方法的恒定和比例系统误

13、差。不正确度不正确度 方法要点：方法要点： 比较方法比较方法 理想的比较方法理想的比较方法= reference method 样本个数：样本个数： 40 份患者样本份患者样本 1/3低浓度低浓度 1/3中浓度中浓度 1/3高浓度高浓度 （可报告范围）（可报告范围）不正确度不正确度统计学包括：统计学包括： 图形分析图形分析Graph analysis 回归分析回归分析Regression analysis 偏差分析偏差分析Bias analysis 可接受的标准可接受的标准Acceptable criterion不正确度不正确度图形分析图形分析 差异图差异图: Y轴轴:试验方法与比较方法之差试

14、验方法与比较方法之差 X轴轴:比较方法的测定值比较方法的测定值 不正确度不正确度 对比图对比图: Y轴轴:试验方法测定值试验方法测定值 X轴轴:比较方法的测定值比较方法的测定值 回归分析回归分析 回归方程回归方程Y=a +bX a为回归线截矩，反映恒定系统误差的大小为回归线截矩，反映恒定系统误差的大小, a=0时，表示无恒定系统误差时，表示无恒定系统误差 b为回归线斜率，反应比例系统误差的大小，为回归线斜率，反应比例系统误差的大小， b=1时，表示无比例系统误差时，表示无比例系统误差不正确度不正确度 相关系数（相关系数（r） 可帮助判断测定的浓度范围对于斜率和截矩的评估可帮助判断测定的浓度范围

15、对于斜率和截矩的评估是否合适，而不能用于判断方法是否可受。是否合适，而不能用于判断方法是否可受。 r 0.99, 应用线性回归统计应用线性回归统计 r 0.99, 应用配对应用配对t-test不正确度不正确度 判断差异能否被接受，应在医学决定水平与总可允许误差判断差异能否被接受，应在医学决定水平与总可允许误差比较。比较。 应用方法比较的回归方程应用方法比较的回归方程,计算医学决定水平的预期偏差计算医学决定水平的预期偏差. 丨丨a+bXc）-Xc丨丨1/2TEa （CLIA88）不正确度不正确度Page 30衡量质量的两个重要指衡量质量的两个重要指标标测量的固有不精密度测量的固有不精密度测量的不

16、正确度测量的不正确度允许总误差允许总误差TEA 总误差（总误差（TETE） 总误差（总误差（TE）的估计）的估计 TE =SE+RE TE= bias + nSD TE TEa（CLIA88）(n = 2、3、4)Page 32允许总误差指标与其他国家总误差指标允许总误差指标与其他国家总误差指标检验项目检验项目本标准本标准TE (%)TE (%)美国美国TETE丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶16.016.0 20% 20%天门冬氨酸氨基转移酶天门冬氨酸氨基转移酶15.015.0 20% 20%-谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶11.011.0 20% 20%碱性磷酸酶碱性磷酸酶18.018.0

17、30% 30%肌酸激酶肌酸激酶15.015.0 30% 30%淀粉酶淀粉酶15.015.0 30% 30%乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶11.011.0 20% 20%总蛋白总蛋白5.05.0 10% 10%白蛋白白蛋白6.06.0 10% 10%总胆红素总胆红素15.015.0 20% 20% 6.84 mmol/L 6.84 mmol/L血糖血糖7.07.0 10% 10% 0.33 mmol/L 0.33 mmol/L肌酐肌酐12.012.0 15% 15% 26.5 mol/L 26.5 mol/L尿酸尿酸12.012.0 17% 17%尿素尿素8.08.0 9% 9% 0.71 mmol/L

18、0.71 mmol/L 总胆固醇总胆固醇9.09.0 10% 10%甘油三酯甘油三酯14.014.0 25% 25%氯离子氯离子4.04.0 5% 5% 测量不精密度和不正确度对质量的影响测量不精密度和不正确度对质量的影响可报告范围可报告范围可报告范围（可报告范围（reportable range ）指可以报告的所有结）指可以报告的所有结果范围，包含两种类型的范围果范围，包含两种类型的范围分析测量范围（分析测量范围（analytical measurement range，AMR）临床可报告范围（临床可报告范围（clinical reportable range，CRR）。）。评价分析方法能报

19、告的可信的最低、评价分析方法能报告的可信的最低、最高的浓度范围值。最高的浓度范围值。确认厂家所提供该分析确认厂家所提供该分析系统的可报告范围是否一致。系统的可报告范围是否一致。目的目的:可报告范围可报告范围目测线性法目测线性法最小二剩法线性评价最小二剩法线性评价NCCLS制订并推出的评价方案（制订并推出的评价方案（EP-6）多项式线性评价方案多项式线性评价方案 （2002）可报告范围可报告范围红色：红色：S S形形兰色：抛物线兰色：抛物线黑色：直线黑色：直线可报告范围可报告范围可报告范围可报告范围样本数量：样本数量：验证线性：验证线性：5-7个浓度水平，重复个浓度水平，重复2次测定。次测定。建

20、立线性：建立线性：7-11个浓度水平，测定个浓度水平，测定2-4次次目测线性法目测线性法可报告范围可报告范围可报告范围可报告范围最小二剩法线性评价方案最小二剩法线性评价方案拟合的直线方程拟合的直线方程 Y=Ax+B 可报告范围可报告范围1、b （在（在1.00 0.03范围内范围内)，a近于近于0，则可直接判断该测定方，则可直接判断该测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。法可报告范围在实验已涉及浓度。2、 若若b不接近不接近1，a较大；若较大；若b 0.97，或，或 1.03，已有可能，已有可能b和和1之间有统计上显著性差异。之间有统计上显著性差异。 试着舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范

21、围后，回试着舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范围后，回归式有明显改善，归式有明显改善，b近于近于1，a趋于趋于0。此时，缩小的分析范围是。此时，缩小的分析范围是真实的可报告范围。真实的可报告范围。 进行统计学判断和评价进行统计学判断和评价: :可报告范围可报告范围 干扰试验是通过定量检测样本中的物质所引起试验干扰试验是通过定量检测样本中的物质所引起试验方法的系统误差，以评价方法的准确度。由干扰物质引方法的系统误差，以评价方法的准确度。由干扰物质引起的误差通常是恒定系统误差，与分析物的浓度无关系。起的误差通常是恒定系统误差，与分析物的浓度无关系。干扰试验干扰试验 检测限（检测限（limit of detection） 指检测系统可检测出的最低分析物浓度。指检测系统可检测出的最低分析物浓度。 包括检测低限、生物监测限和功能灵敏度。包括检测低限、生物监测限和功能灵敏度。检测限检测限检测限检测限 检测低限、生物监测限和功能灵敏度检测低限、生物监测限和功能灵敏度1.检测低限检测低限(lower limit of detection, LLD) 空白样本测定均值加空白样本测定均值加2（或（或3）倍标准差（空白样本）倍标准差（空白样本） 2.生物检测限（