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文档简介
1、实验项目实验项目 血糖的测定(血糖的测定(72-1)3学时学时 【临床意义】【临床意义】 正常成人空腹静脉血糖含量正常成人空腹静脉血糖含量为为3.896.11mmol/L。空腹血糖。空腹血糖高于高于6.11 mmol/L称为临界高血糖,称为临界高血糖,高于高于7.57.5mmol/L称为高血糖,称为高血糖,高于高于8.8910.0mmol/L出现糖尿出现糖尿现象。空腹血糖低于现象。空腹血糖低于3.0mmol/L称称为低血糖。为低血糖。【实验目的】【实验目的】 掌握血糖测定的原理、操掌握血糖测定的原理、操作方法和临床意义。作方法和临床意义。 【实验原理】【实验原理】(1 1)葡萄糖)葡萄糖+ +
2、H2O + + O2 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸葡萄糖酸+ + H2O2 (2 2)H2O2 + + 氨基安替比林氨基安替比林 + + 酚酚 过氧化物酶过氧化物酶 红色醌类化合物红色醌类化合物 + + H2O (3 3)用)用72-1型分光光度计测出红色化合物的吸光度,型分光光度计测出红色化合物的吸光度, 再用公式求出葡萄糖含量。再用公式求出葡萄糖含量。 【实验器材】【实验器材】 试管、水浴箱、洗耳球、试管、水浴箱、洗耳球、五档微量移液器、五档微量移液器、刻度吸量刻度吸量管管(5ml)、)、72-1型分光光型分光光度计度计。【实验器材】【实验器材】五档微量移液器五档微量移液器NoIma
3、ge使用方法:使用方法:1.1.将将吸嘴套在移液器头上吸嘴套在移液器头上轻轻转动,以保证密封。轻轻转动,以保证密封。2.2.使用前应先将移液器使用前应先将移液器吸液和排液几次吸液和排液几次,润洗吸嘴润洗吸嘴和保持和保持 腔内外气压一致。腔内外气压一致。3.3.选择量程选择量程。4.4.垂直地握住移液器,将按钮按到第一停止点,然后把垂直地握住移液器,将按钮按到第一停止点,然后把吸吸嘴浸入到嘴浸入到液液面下面下2 23mm3mm,再缓慢放松按钮,使之复位,等,再缓慢放松按钮,使之复位,等待待1 12 2秒后,从液体中取出,并避免碰撞任何物体。秒后,从液体中取出,并避免碰撞任何物体。5.5.将吸液嘴
4、移至加样容器壁上,缓慢地把按钮按到第一停将吸液嘴移至加样容器壁上,缓慢地把按钮按到第一停止点,等待止点,等待1 12 2秒,再把按钮全部按下去,秒,再把按钮全部按下去,排排尽尽液液体后,吸液体后,吸液嘴应沿容器壁上滑动取出,再放松按钮,使之复位,即完成。嘴应沿容器壁上滑动取出,再放松按钮,使之复位,即完成。6.6.最后,最后,打掉用过的吸液嘴,调回最大量程打掉用过的吸液嘴,调回最大量程,仪器放置好保存。,仪器放置好保存。【实验器材】【实验器材】72-172-1型分光光度计型分光光度计工作原理工作原理物质对光的吸收具有选择性,不同的物质都有物质对光的吸收具有选择性,不同的物质都有各自的吸收波长。
5、在一定波长下,某物质的溶各自的吸收波长。在一定波长下,某物质的溶液对光的吸收强弱(液对光的吸收强弱(吸光度吸光度A)与)与溶液的浓度溶液的浓度C和和液层的厚度液层的厚度L的乘积成正比,即遵循朗伯的乘积成正比,即遵循朗伯-比比尔定律:尔定律: A=KCL (K为吸收系数,对同一物质来说为一常数为吸收系数,对同一物质来说为一常数)使用方法:使用方法:1.检查检查 :指针位于:指针位于“0”。 2.打开电源,打开比色皿暗箱盖,打开电源,打开比色皿暗箱盖,预热预热20分钟分钟。3.加样:加样:夹毛面,擦干夹毛面,擦干。 4.放置好比色皿放置好比色皿,选择波长、调灵敏度。,选择波长、调灵敏度。5.反复反
6、复调调0、调、调100至稳定至稳定。 6.合盖,合盖,读数,记录,取样,清洗,关闭仪器读数,记录,取样,清洗,关闭仪器。(1 1)血清)血清(2 2)G标准液:标准液:5.55 mmol/L(3 3)酶试剂)酶试剂 (4)酚试剂酚试剂 【实验试剂】【实验试剂】【实验内容和操作过程】【实验内容和操作过程】 1. 加样【取加样【取2支干净试管,分别支干净试管,分别标明标明测定测定(T)、标准()、标准(S)】,然后按表加入试剂:)】,然后按表加入试剂: 加入物加入物 测定管测定管T 标准管标准管S 血清血清(m ml l) 10 G标准应用液标准应用液(m ml l) 10酶试剂酶试剂(ml) 0
7、.75 0.75 酚试剂酚试剂(ml) 0.75 0.75 2. 2.将样品混匀后,置于将样品混匀后,置于37水浴箱水浴箱中水浴中水浴15min。 3.3.用分光光度计在波长用分光光度计在波长505nm(光(光径径1cm),), 以空白管调零以空白管调零O100,分,分别读取其余两管吸光度值,即记录测定别读取其余两管吸光度值,即记录测定管管T、标准管标准管S的吸光度值(的吸光度值(AT、AS ) 。 1.1.记录测定管记录测定管T、标准管标准管S的的吸光度值。吸光度值。AT、AS【实验结果】【实验结果】 CG标准液标准液 5.55 mmol/L AT ASCT血糖血糖 = = CG标准液标准液
8、. .计算公式:计算公式:(浓度(浓度C单位单位mmol/L) 【结果分析】【结果分析】 经过计算得到的血糖浓度为经过计算得到的血糖浓度为多多少少,是否在人体血糖浓度的正常范,是否在人体血糖浓度的正常范围内(围内(空腹血糖浓度为空腹血糖浓度为3.893.896.11mmol/L6.11mmol/L),),若在说明什么,若若在说明什么,若不在有说明什么。不在有说明什么。血糖测定有哪些临床意义。血糖测定有哪些临床意义。【作业】【作业】 1. 1.加样时,看准试管标示(加样时,看准试管标示(T、S)再加再加试剂。试剂。 2.2.加试剂时,看准用量(加试剂时,看准用量(l、ml)再取。)再取。 3.3.分光光度计测定吸光度值(分光光度计测定吸光度值(AT、AS)时,要做记录时
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