铁包金提取物抗肝损伤作用的研究

1、铁包金提取物抗肝损伤作用的研究                    作者：吴玉强 邓家刚 钟正贤 杨兴 【摘要】  目的观察铁包金4种提取物的抗肝损伤药效作用。方法采用CCl4和异硫氰酸-萘酯所致小鼠急性肝损伤模型等方法进行实验。结果高剂量组铁包金提取物样品14能明显降低CCl4 致急性肝损伤小鼠血清中的ALT，AST活性，并能明显升高血清中总蛋白和白蛋白含量；样品1，2，4能显着降低 T-BI

2、L含量。结论铁包金提取物对CCl4 和异硫氰酸-萘酯所致的急性肝损伤具有保肝降酶退黄作用。 【关键词】  铁包金 抗肝损伤   Abstract：ObjectiveTo study the protective effect of the extracts of Berchemia lineate(L.)DC. on liver iujury induced by carbon tetrachloride (CCl4) or -Naphthyl isothiocyanate(ANIT). MethodsThe animal models with hepatic

3、injury were established by CCl4 and ANIT. The activities of ALT，ALB，T-BIL，TP and AST in serum were measured. ResultsIn high dose group, the sample 1 4 could reduce ALT and AST activities in serum of acute liver damage mice induced by CCl4 or ANIT, and elevate the contents of total protein and the al

4、bumin in serum obviously; the sample 1，2，4 could obviously reduce the content of T-BIL.ConclusionThe extracts of Berchemia lineate(L.)DC can protecte liver from injury induced by CCl4 or ANIT.   Key words：Berchemia lineate(L.)DC.；  Prevent liver injury   铁包金Berchemia lineate

5、(L.)DC. 为鼠李科植物老鼠耳的干燥根，为广西民间常用中草药，收载于1990年版广西中药材标准，具有消肿解毒、止血镇痛，祛风除湿功效。民间常用于治疗肺结核、吐血、腹痛、头痛、跌打损伤、疔疮肿毒等1。本课题组曾对铁包金药材的抗炎、镇痛作用进行研究2，结果表明铁包金提取物具有显着的抗炎、镇痛作用。为验证铁包金在抗肝损伤方面的作用，实验将铁包金药材用不同溶剂提取并对提取物进行了抗肝损伤的研究。   1  材料   1.1  药物与试剂   铁包金14号提取物共4个样品，样品1为氯仿层提取物，样品2为石油醚层提取物，样

6、品3为醋酸乙酯层提取物，样品4为正丁醇层提取物，由广西中医学院制药厂提供。联苯双酯，广州星群（药业）股份有限公司生产，批号 DF40037。地塞米松天津药业集团新郑股份有限公司，批号050720。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒，批号 2006017；天冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒，批号2006016；总蛋白（TP）试剂盒，批号2005032；白蛋白（ALB）试剂盒，批号 2005041，均为长春汇力生物技术有限公司产品。四氯化碳(CCl4)，由广东西陇化工厂生产。异硫氰酸-萘酯，美国Sigma公司产品。   1.2  动物KM种小鼠，1822 g，雌雄兼

7、用，清洁级动物，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2003-0003。小鼠分性别饲养于空调室内，室温（22±2），湿度（60±5）%，喂标准颗粒饲料，自由饮水和摄食。   1.3  仪器棱光-722型可见分光光度计，FA1004型万分之一电子天平，由上海精密科学仪器有限公司生产。   1.4  统计学分析采用SPSS 10统计软件分析数据。所得实验数据以±s表示，采用t检验作组间比较差异显着性，P0.05认为有显着差异，具有统计学意义。   2  方法与结果

8、   2.1  对四氯化碳（CCl4）所致肝损伤模型的影响3取小鼠110只，雌雄各半，随机分为正常对照组（蒸馏水，20 ml/kg），模型组（蒸馏水，20 ml/kg），高剂量铁包金样品14（0.4 g/kg）组，低剂量铁包金样品14（0.2 g/kg）组，以及阳性对照药联苯双酯（0.2 g/kg）组，每组10只小鼠。动物每天灌胃给药1次，连续用药7 d。末次给药1 h后除正常对照组外，各组小鼠腹腔注射1%CCl4花生油溶液10 ml/kg体重。20 h后从小鼠眼眶静脉丛取血，分离血清。然后取血清按临床试剂盒方法，测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基

9、转移酶（AST）活性，以及血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量。比较各给药组与模型组的显着性差异,评价药物的保肝降酶作用。结果见表1。结果表明，与对照组比较，模型组血清的ALT，AST活性都比对照组明显升高，表明造模成功（P0.01）。高剂量组样品14和阳性药联苯双酯能明显降低CCl4 致急性肝损伤小鼠血清中的ALT，AST活性(P0.05或P0.01)，并能明显升高血清中总蛋白和白蛋白含量(P0.05或P0.01)，样品4、样品3低剂量组对ALT作用不明显（P0.05），但对AST活性有抑制作用（P0.05或P0.01）。表1  铁包金提取物对CCl4 致急性肝损伤小鼠的保护作

10、用与模型组比较，*P0.05，*P0.01；与正常对照组比较，#P0.05,#P0.01；n=10   2.2  铁包金各提取物对异硫氰酸-萘酯（ANIT）致小鼠黄疸的保护作用4黄疸造型剂配制：称取225 mg异硫氰酸-萘酯（ANIT）用花生油溶解并配成0.6%ANIT花生油溶液37.5 ml，按0.15 ml/10 g体重一次灌胃给药（90 mg/kg），投毒造型。            取小鼠110只，随机分为空白对照组、模型组、阳性药联苯双酯（0.2 g/kg

11、）组，低剂量铁包金样品14（0.2 g/kg）组，高剂量铁包金样品14（0.4 g/kg）组。空白对照组和模型组给予等体积蒸馏水（20 ml/kg），其他各组每天给药1次，连续5 d。第6天除对照组外，其余各组灌胃给予0.6%ANIT花生油溶液中毒，造成黄疸型肝损伤。中毒后继续给药2 d，各组中毒48 h后摘除小鼠眼球取血分离血清，按试剂盒方法测定血清T-BIL含量和ALT活性。比较各给药组与模型组的显着性差异,评价药物的退黄降酶作用。结果见表2。结果表明，与对照组比较，模型组血清中T-BIL含量和ALT活性都比对照组明显升高，表明造模成功。与模型组比较，除样品3降胆红素作用无明显差异外（P0

12、.05），样品1，2，4组的T-BIL含量均明显降低(P0.05)，各样品及阳性药联苯双酯组均可降低ALT活性（P0.01或P0.05），提示铁包金提取物具有明显的退黄降酶作用。表2  铁包金提取物对ANIT致小鼠黄疸的保护作用与模型组比较，*P0.05，*P0.01，*P0.001；与空白对照组比较，P0.05，P0.01，#P0.001；n=10   3  讨论    CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型制备毒剂,被广泛用于肝坏死或肝损伤的在体和离体研究。一般认为，它通过细胞色素P450将CCl4分解为CCl3自由基团，能选择性地

13、损伤小叶中央区的肝细胞，引起脂质过氧化反应，破坏细胞膜结构，使肝细胞变性坏死，细胞内转氨酶、自由基渗入血液而活性增高，肝细胞受损后肝内合成蛋白能力降低，TP，ALB含量会减少。抗肝损实验数据表明，与模型组比较，高剂量组样品14和阳性药联苯双酯能明显降低CCl4 致急性肝损伤小鼠血清中的ALT，AST活性，并能明显升高血清中TP和ALB含量(P0.05)，低剂量组样品3、4对AST活性有抑制作用(P0.05)，对ALT活性抑制作用不明显(P0.05)。提示铁包金各提取物具有一定的保肝降酶作用。   异硫氰酸-萘酯（ANIT）是一种间接肝毒剂，它主要损害肝内胆管上皮细胞，引起毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆汁郁积，并伴随以点状坏死为主的肝实质细胞损害，产生胆汁郁积性黄疸，出现高胆红素血症和胆汁分泌减少。抗ANIT所致的肝损伤实验数据表明，与模型组比较，样品1，2，4组的T-BIL含量均明显降低(P0.05)，样品14及阳性药联苯双酯组均可降低ALT活性（P0.05或P0.01)。提示铁包金提取物具有明显的退黄降酶作用。   综上所述，铁包金各提取物具有一定的保肝降酶退黄作用，其药理作用与所含有效成分相关,提示铁包金的提取物在保肝方面具有较好的开发应用前