兔肝脱氧核糖核酸的提取_第1页
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文档简介

1、现在学习的是第一页，共13页w掌握从动物组织中提取DNA的原理和方法。现在学习的是第二页，共13页现在学习的是第三页，共13页(一)脱氧核糖核蛋白的制备w10ml刻度离心管取8ml兔肝匀浆，3000转10分钟；（取试管标号，加试剂）w 弃上清后，沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠8ml ，搅匀后3000转10分钟。弃上清所得即脱氧核糖核蛋白。（加DNA标准液和蒸馏水，二苯胺试剂，加二苯胺试剂的试管不能放在试管架上）现在学习的是第四页，共13页w 沉淀 + 0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠（终体积为4ml）；w 搅匀后 ，逐滴 + 0.5ml 15SDS，搅拌3-5m

2、in ，溶液粘稠略带透明。（DNA与蛋白分离）w + 1.0ml5M NaCl（终浓度1M），轻搅3-5min；w + 等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min， 3000转10分钟； （实验二的试管放沸水浴）现在学习的是第五页，共13页w 吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+ 等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min，3500转15分钟；（取出实验二的试管室温放冷并595nm比色，注意添水到水浴锅中）w 吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+ 两倍体积的95的乙醇抽提；w DNA析出，弃乙醇后则得到白色DNA粗制品。*进行实验二的第二步现在学习的是第六页，共13

3、页现在学习的是第七页，共13页w熟悉751型分光光度计的使用。w掌握DNA纯度测定的原理和方法现在学习的是第八页，共13页w DNA在的-脱氧核糖在酸性条件下转变成-羟基-r酮基戊醛，与二苯胺共热后形成蓝色化合物，该化合物在595nm处最大吸收。w 每ml含2040ug范围内光密度与DNA的浓度成正比。反应液中加入少量乙醛，可提高反应的灵敏度。现在学习的是第九页，共13页w 一、 DNA标准曲线的制定 0号管调0，以A为纵坐标，DNA含量（ug/ml)为横坐标，绘制标准曲线。w 二、样品含量测定 沸水浴10min，冷却后595nm比色，并从标准曲线上读数。 U B所提DNA 1ml + 1ml NaOH H2O 2ml 二苯胺4ml二苯胺4ml现在学习的是第十页，共13页w 原理：核酸在220-320nm处呈特征性吸收，260nm处有最大吸收，测260/280可得知核酸的大致纯度。 260/280 1.6 1.8 表示纯 1.8 含RNA 1.6 蛋白含量高现在学习的是第十一页，共13页w 有两个光源：紫外和可见光w 使用石

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