免疫组化稳定表达(1)

1、免疫组化稳定表达与精细操作公安县人民医院病理科雷玉免疫组化 是应用免疫学基本原理抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。免疫组化 免疫组化染色是一项综合性的操作技术，其影响因素复杂，加强质量管理和提高可信性尤为重要。在具体操作过程中要进行精细有效的全程质控，要求操作人员要有高度的责任心，严格遵循操作规范，才能为诊断提供表达准确、染色清晰的高质量的免疫组化染色。 现将质控事项综述如下：一、标本固定 固定液：4%中性缓冲

2、甲醛 离体后固定时间：及时固定，不超过30分钟 取材后固定时间：小标本固定时间应至少6小时，肿瘤标本最好大于24小时。一般不超过48小时。 固定液的量：为标本的5-10倍一、标本固定 影响： 固定不当、固定时间不够、固定时间过长，都可以引起抗原丢失，尤其是一些较脆弱的膜抗原（如CD20等），故固定及时并充分至关重要。二、切片、烤片、脱蜡 1、切片 切片厚度一般为3-5m，淋巴组织可切2m。切片应平整。 影响： 切片褶皱、边缘卷曲可造成试剂难以冲洗干净，这在手工染色时尤为重要。否则显色时这些区域就有可能出现背景着色，影响整张切片的染色质量。二、切片、烤片、脱蜡 注意 展片时要求用水和容器均保证干

3、净，避免污染，干扰阅片。二、切片、烤片、脱蜡 2、烤片 温度不宜高过，65- 75 烤片1-2小时即可。 影响： 烤片时间短易造成脱片，温度高或过长易导致抗原丢失。二、切片、烤片、脱蜡 3、脱蜡 我科采用三级二甲苯脱蜡，每级45分钟，并采用200左右切片更换第一缸二甲苯，保证脱蜡彻底。 影响： 脱蜡不彻底，蜡膜会阻碍抗体渗入从而阻止抗体与抗原的结合。三、减少非特异性染色可在滴加一抗前用3%双氧水作用10-15分钟，以便阻断组织中的内源性过氧化物酶。四、对照 对照的设立在免疫组化操作中极为重要。 因为阑尾组织中含有多种组织成分，如上皮组织、淋巴组织、平滑肌组织、间质、神经组织、血管、间皮等，所以

4、日常工作中常选用阑尾作为阳性组织对照。五、抗原修复 修复方法：高压锅修复、水浴修复、微波修复等。其中高压锅修复具有稳定，受热均匀，背景着色浅等优点。 在修复液选择上，核染色阳性的抗原用PH9.0的EDTA修复液效果好；胞质、胞膜染色阳性的抗原用PH8.0的EDTA修复液效果好。六、显色 一般阳性部分广泛或阳性定位在胞质的组织，显色非常迅速，1-3分钟即可见明显得棕色，应及时终止染色； 阳性部分稀少且定位在胞核的组织，则需要显微镜下观察，时间不宜过长，以免造成背景染色。 注意：配制好的DAB显色液中出现棕色沉淀，则可能失效，建议重新配制。七、复染 复染是为了衬托免疫组化的阳性染色，所以苏木素颜色不宜太深。 由于操作中使用了吸附玻片，所以建议复染的苏木素应勤于过滤，减少人为的背景染色。八、染色中的一些细节 在整个染色过程中，切片始终保持湿润，不能干片； 滴加一抗时应将切片上的水甩干，以免抗体被稀释； 滴