两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响

1、两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响作者：罗伟琼李沈容邹翠贤罗小珍朱美玲【关键词】脐血【摘要】目的探讨不同离心条件下对脐血造血细胞回收率的影响。方法运用6婿乙基淀粉（HES沉降，二次离心法可离心脐血浓缩单个核细胞（MNC），此法具有不受标本体积大小的影响、无细菌污染的优点。结果通过分析两种离心方法发现制备MNC寸，离心力与MNC0收率有密切关系。结论加大离心力可增加MNC勺回收率。【关键词】脐血;造血细胞/单个核细胞;离心法;回收率【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofdifferentcentrifugalmethodsonreturn

2、s-ratioofMononuclearcell（MNC）inumbilicalcordblood.MethodsAftersedimentatedwith6%hydroxyethylstarch（HES）,twocentrifugatingprocesseswasemployedtoseparateandconcentrateMNC,whichwasnotaffectedbyspecimenvolumeandnotpollutedbybacterium.ResultsTherewassignificantrelationshipbetweendifferentcentrifugalforce

3、andrecoveryrateofMNC.ConclusionRecoveryrateofMNCwillincreasebyincreasingcentrifugalforce.【Keywords】fetalblood;mononuclearcell;centrifugation;retrievingrate造血干细胞移植（HSCT已经成为迄今为止医治各种恶性血液病、肿瘤、遗传性疾病、重度放射病及重症联合免疫缺陷等顽症的最有效方法之一1,2,而采用脐血替代骨髓及外周血进行HSCTE成为近10年来HSC撷域的最重大进展之一2,3。最初的脐血HSCT使用的均为未经分离的全血，这种全脐血移植虽然能减

4、少造血干/祖细胞的损耗，但因含有大量的红细胞等成熟血细胞，不但给冷冻保存带来困难，同时还可能会给移植病人造成严重的不良后果。因此，对脐血库来讲，高效快速分离脐血造血细胞，对单个核细胞（MNC进行分离浓缩,最大限度地降低其终体积显得尤为重要。这不仅涉及到尽量减低造血细胞的丢失问题，而且还牵涉到降低脐血库库容的成本问题。所以，探索出一种行之有效理想的分离方法就成了该领域研究的热点。为此，笔者做了一些探索，现报告如下。1 材料与方法1.1 材料与仪器6%羟乙基淀粉（HES）购自美国Dupontpharma公司；无菌、无热源，含有ACD呆养液三联采血袋（长春泰尔茂医用器具公司）;落地式低温离心机（SO

5、RVALL-PC3pClus）;血细胞计数仪：2%冰醋酸结晶紫染色，计数有核细胞数。1.2 MNC的制备方法1.2.1 脐血来源40份脐血均无菌，采自深圳市宝安区西乡人民医院妇产科，均为足月产，胎儿无窒息。供者均为身体健康、发育良好的非高龄产妇。1.2.2 分离提取将采集的脐血留样1ml用计数仪将MNCT数。参照纽约脐血库操作规程4按6%HES脐血=1：5的比例加入，并充分混匀10min,两次离心法。第一种方法以10430r/min离心6min做第一次离心；第二种方法以10c460r/min离心6min做第一次离心；利用三联袋将上层富含MNC勺血浆及少许RB*入转移袋内，去除剩余的RBC再次以

6、10c1300r/min离心12min。去除上层血浆获得脐血有核细胞悬液1822ml,留样1ml计数MNC2 结果3 种离心转速与离心时间见表1;两种离心方法制备MNO得率的比较见表2。4 1表2(略)5 讨论脐血与骨髓及外周血相比有诸多优点57：富含更原始的造血细胞，增殖能力强；可进行HLA13个抗原不合的同胞或无关者的移植；单份脐血中的造血细胞量可满足65%的儿童(<35kg)、25%体重较轻(<50kg)成人患者的移植需要；来源丰富，采集过程简单，新生儿及产妇均无任何痛苦及不良反应。从脐血中分离造血细胞是脐血库进行库存脐血干细胞的必备程序，鉴于每份脐血采集的容

7、量有限，它所含的MNC勺数量也是有限的，况且新的资料研究显示脐血移植的成功率与TNCMNC勺数量呈正相关8，因此脐血细胞分离的方法是建立高品质脐血库的关键技术之一；目前主要采用6%HE航降离心法分离。根据脐血中各种成分密度不同，经不同离心力作用后可将血浆成分和血细胞成分中的红细胞、粒细胞、淋巴细胞及血小板分层、分离，提取所需要的成分9。MNC的密度为1.060,小于红细胞的密度，脐血在HESM降后通过轻离心，使红细胞团向下沉降而推动白细胞向上运动，达到分离的目的。本试验利用白细胞和红细胞在沉降过程中的速度差异来实现分离。在离心时间不变的情况下加大离心力，红细胞因快速沉降而导致周围液体的向上运动

8、，带动白细胞的向上运动，产生对流现象10，更有利于提高白细胞的回收率，增加MNC勺获得率。【参考文献】1 奚永志，唐佩弦.深入展开脐血干细胞的基础与临床研究.中华血液学杂志，1999，20（8）：397.2 RubinsteinP,CarrierC,ScaradavouA,etal.Outcomesamong562recipientsofplacental-bloodtransplantsfromunrelateddonors.NewEnglJMed,1998,339（22）:1565.3 奚永志，吴祖泽.积极稳妥地建立和健全我国的脐血造血干细胞库.中华医学杂志，1999，79（11）：885

9、.4 RubinsteinP,DobrilaL,RosenfieldRE,etal.Processingandcryopreservationofplacental/umbilicalbordbloodforunrelatedbonemarrowreconstitution.ProcNatlAcadSciUSA,1995,92（22）:10119.5 SusanFL,EhzabethJR.Hematopoieticprogenitorcells.SeminarinHematology,1996,33:341-358.6 KoglerG,CallejasJ,SorgRV,etal.Theeffectofdifferentthawingmethods,growthfactorcombinationsandmediaontheexvivoexpansionofumbilicalcordbloodprimitiveandcommittedprogenitors.BoneMarrowTransplantation,1998,21:233-241.7 刘爽，奚永志.端粒/端粒酶系统与人类造血细胞.中国实验血液学杂志，1999，7：171-174.8 朱美玲，