Roche-LightCycler-480-中文操作说明

1、Roche-LightCycler-480-中文操作说明LightCycler?480中文操作说明罗氏医学仪器公司/应用科学部门February2008目录启动机器与软件:.软件设定一开启新实验5:.样品编辑94 .结果分析125 .报告186 .数据转移至其它计算机（数据输出与输入）197 .使用者管理19启动机器与软件*启动机器1 .机器主开关位于机器右后方。2 .机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯（右）由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯，警示灯（左）由橘色转变成绿色（约三分半钟），表示机器已经启动完成。左警示灯右警示灯机器状态橘*闪烁*橘*闪烁*正在初始化绿橘机器启动完成96/384孔盘

2、还未放入绿橘*闪烁*96/384孔盘正在放入中绿绿机器启动完成96/384孔盘已经放入绿*闪烁*绿*闪烁*实验进行中3 .按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之96或384孔盘。放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。启动软件1 .开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入WindowsoUsername:OPERATORPassword:LC4802 .开启LightCycler480软件，并输入正确的使用者与密码。User name:Password:Log on to:二.软件设定一开启新实验设定新实验1 .软件开启后，会进入主画面。点选“NewExperiment”。JLt?htty

3、derbottwarerelease1.Z.U.U6Z32 .出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的按钮。LFUtMCvcKpftMse1.2.0.(M2)11Hl严片AJIOoW2n|.；，/sxMaxSymmAxknmRsMotePlusIDJRvttdnLlmltla9aunr.阿PioqtaanNam.Z&f).；f；?*-l-2：iAcquitMonHoldpitcriiBttlRafvpRate(X，WAcuhitl(m|pe*QSec1，”fQ5(，pSue(X)StepDeUyKycl1,CE；glRsH。昌/设定实验若要套用设定好的实验步骤（Templat

4、e）,请跳至6.。1 .在实验设定画面上方，先选择适当的DetectionFormat。选项包含:CombinationExcitationFilterEmissionFikerSYBRGreen1SYBRGreen1483533SimplePrabeSiniplePtabe483533MonoColorHydrolysisProbeEM483533MultiColorHydrolysisProbeCyan500450500483533Hex523568Red610558610Cy5615670MonoColorHybProbeRed640483640MultiColorHybProbeFlu

5、os483533Red610A83610Red640483640Cy5口83670另外可再点选aCustomize勾选所需的滤片组合。2 .输入反应体积：96wellplate范围为10-100ul,而384wellplate范围为5-20uL3.设定实验步骤(Program)点选各个program即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说 明书来设定，利用十与 增加或删除步骤。需要设定的参数包含 Target (C)目标温度，Acquisition Mode或光侦测 模式)，Hold (hh:mm:ss)停留时间。Ramp Rate (C/s)为升降温 速度，范围如下：Ramp Rate (C

6、/s)Heating upCooling downrProgiunriNam.BWJ.二UiqCJZVEIk勺Liacr设定program,包含有Pre-incubation,Amplification(PCR),Meltingcurve(optional)与Cooling。利用十与一增力口或删除步骤。设定循环数目(Cycle)与分析模式。通常Amplification(PCR)program设定成Quantification，而MeltingCurveprogram设定成MeltingCurve。96-wellBlock1.04.4C/s1.02.2C/s384-wellBlock1.04.

7、8C/s1.02.5C/s若设定温度低于50c,请把RampRate调整成1.5C/s(96well)或2.0C/s(384well)5 .将实验步骤储存成Template以便下次进行套用。点选左下角，Apply 1Template ; Save As 、Template ,SaveAsTemplate即可把此步骤储存起来。6 .若要进行套用时，请直接点选窗口左下角ApplyTemplate，选择欲套用之实验步骤即可。7 .设定完成后点选StartRun”开始进行实验8 .跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。实验进行中会进入另一个 Data窗口，窗口下方按键功能如下:EndProgram

8、:结束此Program,进入下一个Program。+10Cycles:实时增加循环数目。AbortRun:马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结果将不储存。三.样品编辑将样品分群1 .点选窗口左边的SubsetEdit。，。2 .点选New”新增新的群组，并将其命名。3 .利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角Apply，此时被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。4 .以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。样品必须分群才能够独立分析，但是样品是否分群并不影响样品的Cp值。编辑样品名称1 .点选窗口左边的Sample Editor”。Pfigr4ri N加M2 .输入每个位置之

9、样品名称（Name）与重复lYindw：al|Naw Fjfppirtffwnrrnal-iag ucks! esollag(Repl. Of)。A*pinGnMypki电Subi tWFFilKn CoraWnadarii 岫沔:D齿法裔嗝lui aEKit#Sim,|n i?岫rs CuamFHAinas-Mi.1Id1占山R_口工EEWIodoWR | .-一Swnptea 51.r/1孰L dirtorColor 匚。!HQl QuAnETm LallingLot ianpl. UIColor Comp ID!iiinipl h.nmV/induw： NeA/ ExperimentLo

10、t ID3.若要更快速输入，可直接在左边的图上点选欲编辑之样品:SelectedFilterCombinations433-533GeneralAbsQuantColorC(-Sewo.TestIDPo$SampleNameAlSample1k2Repl.ofSairfile1A3Repl.ofSairfle1若A1,A2与A3为三重复，在A2与A3Repl.Of字段上都填上A1即为三重复。在编辑过程中，可利用Ctrl+C复制文字，Ctrl+V贴上文字。4.根据实验分析模式，编辑AbsQuant(绝对定量)，RelQuant(相对定量)，或Genotyping分页，设定SampleType绝对

11、定量(Abs Quant):相对定量(Rel Quant):Sample Type 1Unknown /UnknounStandardUnknown：未知浓度样品Standard:已知浓度标准品Cone.Sample Type et Unknown工 5 匚 HJ wTrrcnoTarget：目标基因Referenced :参考基因Calibrator：Control 样品Standard:已知浓度的样品 Unknown：未知浓度样品其它分析模式之分页在此不赘述，请自行参考LightCycler 480Instrument Operator s Manua5 .若设定成 Standard之样品

12、请输入浓度。6 .若想要将此样品编辑储存成 Template,可点选窗口左下角SaveAs Template”即可，下次实验时可点选Apply Template”进行套rr-rrr-nasf=ii!-rrr-raHB-m,s,:ApplyiTemplatej.kbniaJisiJ.BHI*ajjajj.barSaveAsTemplate四.结果分析点选左边的AnalysiS,选取分析模式，并选择所需分析之群组，如下图：Iii5lriiniint: Na .Ktwe FnHiuinEnrtDjri.ib.i5H： k*v Cinp-iibe-i iTii-ncQ-khllJAll4ilVM5 I

13、 :vwu*L*-亡r-1ia nw谶山印|心口 gaiaT：F3Hjd5t遐工沁 HtecAbuant/F Lt. Pa 3 nuCdIdf CcfiijenjEiT IcrlaLlVC QiJAJfiLlf iCALUQ Trt Cali3.分析模式说明Abs Quant / 2nd Derivative MaxAbs Quant / Fit PointsColor CompensationGene ScanningGenotypingRelative QuantificationTm Calling绝对定量（自动法）绝对定量（手动法）色差校正（多色实验校正用）基因扫描（适用于HighRe

14、solution Melting Curve, HRM分析）基因分型（适用于HybProbe之基因分型实验）相对定量Tm分析绝对定定(AbsoluteQuantification)1 .点选下方的Calculate”即可得到样品之Cp与标准曲线LivMErclw?40SvIlwdrErehdrMfL2.0.D625InElrumerit; Virtual LigklC那版 190 394 / Mol ConneclBd制“mW：Qunl with STQR Grsvn I (IfDalal加联 My Contpuler (TM)c4ablB)UK 由 r:Syslem AdininAiialy

15、sjel粒 Qu事n匚/上 nd Dcr ivttlw naie 工01 5r.口口口胃日9.nd unKnovn?际 Posidve O P hleyallwenforin-atiDnSubsehI Illi rrrrri rrrrrr rrrrrrrrrrrr F Uncertain P SlandairdlSainpesInclude Qi lor Pos Nam0 y Al 3awle 1-Resulls-上CP Comc4ritiraEian Soand.16,131.01E5_|EmQQI%EllKiency. 1.3CalculstBALj All f JL1 电Apptjr1O

16、2E5-STH CQiliCFiller ConiH 4.B35330mln(匚mp 归附D 24Loq ChI QuuiilH Lter:号网om Admlnii6.数值和图形输出与绝对定量相同。(请参考绝对定量)基因分型(Genotyping)1 .进入基因分型的窗口中。My Cumpuln-r Pr3i：EAblc|Eysl?m Admin1_晒怔仃匕打8(|专面岬aruresi*七L,2-rc = Auto Group 2 I In* ST I L faj LJ 14D|0F|HjihmI Tin MeHi4IHn CaLLlhQ lor J)u匚口qr口upinqgPW Fhiii.

17、iI/Jiiidow:帆赢金福京:，-DisfkyF 5fcHMIm F Tm F 4ieo附理m第嗡ftasdm同fafliin of p 典藤八S-MiphxNetting PtdhlucWe匚Hh Pds HmkIMTm2 M anpJe 1MrK回. 加 K-pl. Cd1造-口回 W Eepl. of Xiplu 1以5T回| M*&,将y|DE 朋pl. oi三到亚 Z通7D回 附加mEa即加2&5rM回.IT Sui-ple 31.73回| Ifl Jitpl. otJ注.咕回 M现PL at共用同 3&M3kiilm*ppir2115Melting CTHHEJbJi iHl2

18、 .确认波峰数目；Max Peaks 网蝮t J3 .选择检测模式HyfcProbe._Fo.nrriait_ii_iiSYBRGreenIFormatSirnplePrahe4 .点选Calculate即可得到每个样品之Tm值五.报告(Report)1 .将分析后结果储存后即可点选报告键。数据储存2 .勾选想要呈现的报告内容。3 .点选Generate”即可产生报告。4 .点选PDF”即可将此报告储存成.pdf档案格式加声LurigM； Nn 鼻口Mg i即川rMiitD科ah邨*MyQmpi阿fTwfb|时力憧mdmin即产沁Hinqs31)期：|111EaiiplBSjFffrrflirrnFfi,rrrrrnriiTrBFFF7：GtiicidlDalajltdW回击高1HEjperimtriHPruliKal回S岬屉mirumgM0R而*onH察叫-QAb?Qunrt卧dDqeM岫HStrings匚口一加 Biei刖曲 AmplrftitanCireiI中grarHDr!aii|E5*tlinqc一中也Ripnrl-昌昌日网1驰*|匠)MMIH，句2SO8013O-1EKptlH