原核蛋白包涵体表达案例

1、Zoonbio Biotechnology原核蛋白（包涵体）表达案例技术服务咨询025-85454BO0-查号拨0,（分机）分子8Q2/蛋白803/免疫806/检测811025-8563400 产品错看专线 025-8444B440 公司名称；南京神鼎生物技术有限公司技术支持热线：400-0660086公司网址1ww, 邮箱：or de rzoonbk）. com 税号: 91320H656723S52XA联系地址；江苏省南京鲤济开发区红枫科技园*6株2楼神鼎生物（邮编210033 ）原核蛋白(包涵体)表达案例1 .实验目的以客户提供的目的蛋白基因构建表达载体， 通

2、过原核蛋白表达体系获得目的蛋白Ao2 .实验设计(1)分析客户提供的目的蛋白序列，设计蛋白表达方案；(2)选择钟鼎特色载体pCznl,构建表达质粒pCzn1-A;(3) IPTG诱导进行目的蛋白表达，并且优化表达条件，将诱导条件调整至37 C, 经分析目标蛋白主要呈包涵体形式，通过 Western Blot检测蛋白A是否表达；(4)通过Ni柱纯化获得目的蛋白A, SDS-PAGE检测纯化蛋白纯度，BSA方法 测定蛋白浓度。3.蛋白分析(1)经 EditSeq 翻译目的蛋白 A 序列：m.w.=23.25kd, pI=5.22(2)经UniProt匹配，蛋白A物种来源：人类(3)蛋白性质分析蛋白

3、亲疏水分析5Q100150200也iLk15" £1.510.500.5-L-1.5耳-2.S蛋白跨膜结构域分析T助 siTiLnibfaiE out sid e；蛋白信号肽预测1.00SC-iicdre Swore Yscors0 2 -I-Ofl jwiwmwiwiliiTnAlhnwmTiKJl UWk UhjktMK Ph£DDI DMrB LIU FIT KPL RAIET iE LMf MF HKDr AGIM ftl 工"片 R KHCK IU FI L F Ero703040：!tiilrjnMue7EgEE4ZE AltalBDl K0

4、113 IHcUEEiflQ .45G Hegw-fkEffSAgMllF*lizTfei分析结果：目的蛋白整体呈亲水性、无跨膜结构域、无信号肽序列，可尝试全长表达。结论：将目的基因构建在钟鼎特色载体 pCznl上，利用载体自带信号肽分泌表 达。4 .表达载体构建4.1 pCzn1-A质粒酶切验证:1212Mbp钟鼎特色载体pCznl酶切鉴定Marker: 200,500,800,1200,2000,3000,4500Linel:酶切前质粒Line2:酶切后质粒基因名称：A (OD260/OD280:1.82)酶切位点：NdeI /XhoI4.2 pCzn1-A质粒测序验证:部分序列比对结果图5 .蛋白表达及纯化KD M 1 2 3 4116.066.245.035.025.018.414.4蛋白表达鉴定SDS-PAGE分析M:蛋白质分子质量标准1:未诱导2:诱导后3:诱导破碎后上清4:诱导破碎后沉淀KD M 123116.066,245.035,025.018.414.4蛋白纯化 SDS-PAGE分析M:蛋白质分子质量标准1:破碎后处理样品2:流出3:洗脱KD M 140 .一30 一2