食品中苯甲酸的测定

1、 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定6 / 6 高效液相色谱法2.1原理 不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。2.2试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。2.2.1 甲醇：色谱纯。2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜过滤。2.2.3 亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾K4Fe()6·3H2O加水至1000mL。2.2.4 乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌Zn(CH3COO)2·2H2O溶于少量水中，加入30mL冰醋酸，加水稀

2、释至1000mL。2.2.5 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。2.2.6 正己烷。2.2.7 pH4.4乙酸盐缓冲溶液：a）乙酸钠溶液：称取6.80g乙酸钠（CH3COONa·3H2O）,用水溶解后定容至1000mL。b）乙酸溶液：称取4.3mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。将上述两种溶液按体积比37:63混合，即得pH4.4乙酸盐缓冲溶液。2.2.8 pH7.2磷酸盐缓冲溶液： a）称取23.88g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）,用水溶解后定容至1000mL。 b）称取9.07g磷酸二氢钾（KH2PO4），用水溶解后定容至1000mL。将上述两种磷酸盐溶液

3、按体积比7:3混合，即得pH7.2磷酸盐缓冲液。2.2.9 标准溶液的配制： a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.2360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1.00mg。 b）山梨酸标准储备液：准确称取0.2680g山梨酸钾，加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含山梨酸1.00mg。 c）糖精钠标准储备液：准确称取0.1702g糖精钠（C6H4CONNaSO2）(120烘干4h)，加水溶解并定容至200mL。此溶液中糖精钠的含量为1.00g/mL。 d）混合标准使用液：分别准确吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成苯甲酸、山梨酸和糖精

4、钠含量分别为0.000mg/mL、0.020mg/mL、0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.160mg/mL、0.320mg/mL的混合标准使用液。2.2.10 微孔滤膜：0.45m，水相。2.3仪器与设备2.3.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。2.3.2 离心机：转速不低于4000r/min2.3.3 超声波水浴振荡器。2.3.4 食品粉碎机。2.3.5 旋涡混合器。2.3.6 pH计。2.3.7 天平：分度值为0.01g和0.1mg。2.4分析步骤2.4.1样品处理2.4.1.1液体样品碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品：称取10g样品（精确至0.001g）（如含有乙醇需水浴

5、加热除去乙醇后再用水定容至原体积）于25mL容量瓶中，用氨水（1+1）调节pH至近中性，用水定容至刻度，混匀，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。乳饮料、植物蛋白饮料等含蛋白质较多的样品：称取10g样品（精确至0.001g）于25mL容量瓶中，加入2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液摇匀，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，4000r/min离心10min，取上清液，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。2.4.1.2半固体样品含有胶基的果冻样品：称取0.5g1g样品（精确至0.001g），加水适量，转移至25mL容量瓶中，再加水至约20mL，置6070水浴中加热片刻，加塞，剧烈振摇使其分散均匀

6、后，加氨水（1+1）调节pH至近中性，加塞，剧烈振摇，使样品在水中分散均匀，置6070水浴锅中加热30min，取出后趁热超声5min，冷却后用水定容至刻度，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。油脂、奶油类样品：称取2g3g样品（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加入10mL正己烷，用旋涡混合器使其充分溶解，4000r/min离心3min，吸出正己烷提取液转移至250mL分液漏斗中，再向50mL具塞离心管中加入10mL正己烷重复上述步骤，合并正己烷提取液于250mL分液漏斗中。于分液漏斗中加入20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液加塞后剧烈振摇分液漏斗约30s，静置分层后，将水层转移至50mL容

7、量瓶中，再加入20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液，重复上述步骤，合并水层并用乙酸盐缓冲溶液定容至刻度，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。2.4.1.3固体样品肉制品、饼干、糕点：称取粉碎均匀样品2g3g（精确至0.001g）于小烧杯中，用20mL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中，超声振荡提取5min，取出后加2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀，用水定容至刻度，移入离心管中，4000r/min离心5min，吸出上清液，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。油脂含量高的火锅底料、调料等样品：称取样品2g3g（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加入10mL磷酸盐缓冲

8、液，用旋涡混合器充分混合，然后于4000r/min离心5min，小心吸出水层转移到25mL容量瓶中，再加入10mL磷酸盐缓冲液于具塞离心管中，重复上述步骤，合并两次水层液，用磷酸盐缓冲液定容至刻度，混匀，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。凝胶糖果、胶基糖果：按半固体样品2.4.1.2含有胶基的果冻样品处理。2.4.2色谱条件a）色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5m，或性能相当者；b）流动相：甲醇（2.2.1）+乙酸铵溶液（2.2.2）（5+95）；c）流速：1mL/min；d）检测波长：230nm；e）进样量：10L。2.4.3测定 取处理液和混合标准使用液各10L注入高兴液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量，供计算。2.5结果计算标准品四条校正曲线样品保留时间min峰面积含量/峰面积含量含量组 g/kg名称Sw11-3753乘积因子: 19.5802稀释因子: 1.0000样品量: 2.55360 g/kg 6.5