柿叶总黄酮提取工艺的研究

1、柿叶总黄酮提取工艺的研究                   作者：张秀梅 曾祖平 王永红  【摘要】目的对柿叶中总黄酮的提取工艺进行优选。方法采用正交实验法，以总黄酮含量（· ）为指标，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间 种因素进行了研究。结果将柿叶最粗粉用 倍乙醇提取 次，可以获得较高的提取率。结论此工艺有效成分提取率较高，重现性好，稳定可行。 【关键词】   柿叶 总黄酮 正交实验

2、 提取工艺Abstract:Objective Methods ， Results Conclusion Key words: ；   ；   ；   柿树是我国的重要 树种之一，柿叶为柿树科落叶乔木植物柿Diospyros kaki 的新鲜或干燥叶片。国内外研究表明，柿叶制剂、柿叶茶及柿叶提取物具有降压、利尿、抑菌、止血、降脂、抑制癌瘤生长等多方面的生理活性。 研究表明，柿叶中的主要有效成分为黄酮类，大多以苷的形式存在，其具有抗急性脑缺血损伤神经保护作用，对心血管系统有增加冠脉流量、降低血压、降低心肌耗氧量、改善全身血液循环作用，能

3、增加小鼠对窒息性缺氧的耐力，并对大鼠急性心肌缺血有一定的保护作用。此外，柿叶黄酮还有抗氧化清除自由基、抗过敏、保肝2、抗炎、抗菌、抗肿瘤等功能，在防治中老年人脑动脉硬化、预防脑血栓形成、防治老年人痴呆和其它神经退行性疾病、皮肤抗衰老、美容等方面有广泛的开发前景3。为了有效利用柿叶所含的黄酮类物质，本实验以总黄酮含量为指标，采用正交实验优选了总黄酮最佳提取条件。 1  仪器与试药   仪器 紫外可见分光光度计（）；倾斜式高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）； 电子 精密天平（ 仪器上海有限公司）； 电子精密天平（ ）。  试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾

4、干，经鉴定为柿树科柿属柿Diospyros Kaki ；芦丁对照品（ 中国 药品生物制品检定所，批号： ）； · 等均为分析纯。 2  方法与结果   因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间 种因素进行考察，每种因素分为 个水平，结果见表。2.2  供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉（ 目之间） 共 份，按照表 （ ）正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至 或 量瓶中，分别以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜（ ），作为供试品溶液。表1  正交设计因素水

5、平（略）表2   L9（34）正交实验设计及结果分析（略）2.3  对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的芦丁对照品 于 量瓶中，乙醇超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液 · 。2.4  显色试剂及测定波长的选择（ ） 显色法 ：精密吸取芦丁标准液 和供试液、各适量至 量瓶中，分别加入 ，放置 ，然后加入（ ） ，混匀，放置 ，再加入 ，用乙醇定容至刻度，放置 。在 范围内扫描测定吸收光谱。 显色法 ：精密吸取芦丁标准液 和供试液、各适量至 量瓶中，分别加入 · ，用乙醇定容至刻度，摇匀，放置 。在 范围内扫描测定吸收光谱。 &

6、#160;       比较上述两种显色法，用（ ） 显色后，明显生成红色絮状沉淀，此法不宜采用；而 显色后，芦丁标准液的 ， 个样品溶液的 ，故选择 显色后 测定吸光度。2.5  显色稳定性考察精密吸取芦丁标准液 和供试液 ，依法显色后放置不同时间，测定吸光度，结果见表，吸光度RSD 分别为和，可见芦丁标准液和供试液显色后 内基本稳定。2.6  线性关系考察取芦丁标准液 置 容量瓶中，用乙醇定容至刻度，摇匀，分别取， 置 量瓶中，加入 · ，用乙醇定容至刻度摇匀， 后于 处测定吸光度值，结果见表。线性回

7、归得标准曲线：A × C × ，R ，线性范围为 。2.7  样品测定分别取 份供试品溶液适量至 量瓶中，加 · ，用乙醇定容至刻度，摇匀， 后于 处测定吸光度 值，换算为总黄酮含量（· ），如表 所示，极差分析得最佳提取工艺为 ，即乙醇， 倍量，提取 次（， ）。表3  显色稳定性考察（略）表4  芦丁标准曲线的制作（略）2.8  验证实验精密称取柿叶最粗粉（ 目之间） 份， 置于 锥形瓶中，按照 条件提取，合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至 量瓶中，乙醇定容至刻度，过微孔滤膜，测定样品中总黄酮的含量，结果见表，其平均值为 · ，RSD ，表明此条件重复性良好。表5  验证实验结果（略） 3  结论与讨论 3.1  结论柿叶乙醇提取最佳工艺为 ，即乙醇， 倍量，提取 次（， ）。证样品中总黄酮平均含量为 · （RSD），表明正交实验结果可靠。3.2  讨论【参考文献】 1 郭 玫，董晓萍，徐文萍柿叶的研究概况甘肃中院学报，（增）：2 谭仁祥植物成分分析北京：