噬菌体的污染防治方法

1、 噬菌体的污染和防治 在很多发酵生产中，如氨基酸发酵、丙酮-丁醇发酵和抗生素发酵中经常遇到噬菌体（bacteriaphage）污染，引起溶菌，并随之消灭发酵迟缓或停止发酵等特别现象。本节主要介绍噬菌体污染的特征，检查方法及防治措施。 一 噬菌体污染的特征 1 发酵液光密度上升缓慢，甚至下降，肉眼可见发酵液渐渐变清；2 耗糖速度缓慢或停止，产物生成量少或不增加，发酵液中残糖高；3产生大量泡末，发酵液呈粘稠状；4 菌体不规章，甚至消灭畸形。二 噬菌体的检查方法 1双层琼脂平板法 （1）&#

2、160;双层琼脂平板的制备：先用78mL 2%的琼脂培育基作底层，凝固后，加入34mL 冷至45的1%琼脂上层培育基（其中含0.2mL发酵菌种悬液和0.1mL待检发酵液），让其平整凝固；（2） 在发酵菌的适宜温度下培育，若是细菌，一般培育1620小时。（3） 检查有无透亮的噬菌斑。 2液体培育检查法 将培育基、发酵菌种及待检发酵液三者混合，培育后观看培育液是否变清。 3斑点试验法 先制备好涂布有发酵菌种的平板，再用接种环或无菌吸管取少许发酵液在平板上点种，培育后，观看是否有噬菌斑。 4玻片快速法 

3、;将发酵菌种、发酵液和少量琼脂培育基（含0.50.8%的琼脂）混匀后涂布于无菌载玻片上，经短期培育后，在低倍镜下观看是否有噬菌斑。 三 噬菌体的防治 发酵液中污染噬菌体，不外乎有两种缘由。1 菌种本身带噬菌体，特殊是溶源性噬菌体，对这种菌种，一经发觉，应马上弃去。2 生产的环境中有噬菌体。因此，可实行相应的预防措施：1 决不使用可疑菌种；2 清除四周环境中存在的噬菌体。能灭菌的灭菌，能消毒的消毒，搞好清洁卫生工作；3 选育抗噬菌体菌株4 轮换使用菌株。由于一个菌株用的时间一长，就有可能消灭该菌种的噬菌体。

4、5 留意通气质量。取风口应设在3040米的高空，空气过滤器要保证质量； 四 发酵液污染噬菌体后的抢救措施 假如一旦发觉噬菌体污染，应准时实行补救措施 1若在发酵前期污染了噬菌体，由于此时耗糖还不多，常用以下措施 （1） 补加抗性种子，并依据发酵液中的养分多少，适当补加养分物质；（2） 补加约50%的已培育至对数期的正常的发酵液，再进行发酵；（3） 若噬菌体轻度污染，菌体仍能较正常地生长，并积累代谢产物，则可照常进行发酵，若污染严峻，则用加热法（7080）灭活噬菌体，放罐后重消毒。  2若在发酵中

5、后期污染了噬菌体，且比较严峻，则应提前放罐，尽快提取产物。发酵罐、管道、洗涤水及用具均应彻底灭菌，防止噬菌体集中而造成新的污染。并准时改用抗该噬菌体的生产菌株。 3对某些产品可用药物防治。选择能特异性地抑制噬菌体而对生产菌株及其发酵产物的积累和提取均无影响，又符合卫生要求、对人无毒的药物。尽可能选活性高（用药量少）、价格低的药物。如在谷氨酸发酵中常选用的药物有：（1） 螯合剂。如植酸盐（0.051%），柠檬酸盐（0.20.5%），草酸盐（0.20.5%），三聚磷酸盐（0.51%）等可抑制噬菌体的吸附或阻挡DNA的注入；（2） 表面活性剂。0.010.2%的聚乙二醇

6、单酯、聚氧乙烯烷基醚、土温20、土温60等。主要作用于寄主细胞表面，抑制噬菌体在细菌上的吸附。（3） 抗菌素。如1ug/mL的金霉素、四环素、氯霉素等抑制噬菌体蛋白质的合成；（4） N-脂酰氨基酸。是一类具有1618个碳原子的衍生物。如20ug/mL的N-棕榈酰-L-谷氨酸，其作用机制是抑制噬菌体核酸的复制或子代噬菌体的成熟把污染的种子划线接种分别，然后挑几个典型的菌落分别编号后做两种不同的处理，一种是扩大培育后涂平板观看，另一种是按你原先的方法用液氮保藏后再涂平板观看，比较同一个菌落的不同处理的子代有无区分 关键是环境的把握，尤其是发酵液的处理，要求取样、洗罐等任何含有细胞的物质都要处理，比如取样后，多余的液体放入漂白