DNA提取各种缓冲液的配制

1、植物总DNA的提取一、所需仪器设备及消耗品剪刀、塑料袋（封口） 、冰箱、棕色广口瓶（ 1000、500、200、100、50ml）、 量筒（1000、500、100、10ml）、烧杯（1000、500、200、100ml）、pH试纸、电 子天平、高压灭菌锅、研钵、液氮罐（液氮） 、水浴锅、离心机、 移液器（ 1 套）、 枪头（1ml、200ml、20 口 l ）、枪头盒、离心管（）（包括盒和架）、一次性手套、 电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽） 、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自 制）、记号笔、单面刀片二、所需化学药品及试剂CTAB NaCI、EDTA-Na 2fO Tris、冰乙酸、硼酸、

2、B -巯基乙醇、NaAc 氯仿（三氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、溴酚蓝、琼脂糖、蔗糖、溴化乙锭（EB）、 RNase NaOH HCl （浓）、ddHO三、各种缓冲液的配制（一）2%CTA提取缓冲液（300ml）（高压灭菌）4mol/L 的 NaCI 35ml X3 =105ml1mol/L 的 Tris-HCl 10ml X3=30mlL 的 EDTA 4ml X3 =12mlCTAB2gX3 =6g（二）1X TE （母液）（50ml）（高压灭菌）1mol/L 的 Tris-HCl （）500 口 lL 的 EDTA（）100 口 l最后加ddHO定容到50ml工作液为X TE （45ml灭

3、菌的ddbbO中，加入5ml已灭菌的1X TE）（三）4mol/L 的 NaCI （150ml）（高压灭菌）35.055g 的NaCI,力口 ddHO120ml溶解，再加水定容到 150ml（四）1mol/L的NaCI （400口 l）（用于配制 RNase储存液）取 4mol/L 的 NaCI （已灭菌）100 口 I，力口 300 口 I 灭菌的 ddHQ（五） 3moI/L的NaAc溶液（）（50ml）（高压灭菌）NaAc- 3H2O20.405g加 ddH2O30mI用冰乙酸调节pH至力口 ddHO定容到50ml（六）RNase储存液（10mg/ml）（ 1ml）1mol/L 的 Tr

4、is-HCl （）10 口 l1mol/L 的 NaCI15口 lRNase10mg沸水浴 1520min（七）EB储存液（1mg/ml）EB 30mgddH2O 30ml磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保存于室温。制胶时EB终浓度为 口 g/ml （ 30ml力口 15 口 I、40ml加20 口 I ）（八） 10 XT BE缓冲液（电泳缓冲液）（高压灭菌）Tris 碱54g硼酸L 的 EDTA（） 20ml以上溶于400ml的ddbbO中，在定容到 500ml工作液为1XTBE或 XT BE（九）6X上样缓冲液（4C保存）%勺溴酚蓝（1ml 40% （w/v ）的蔗糖水溶液）4

5、0%（w/v）蔗糖水溶液（2g/5ml的ddHO,加热溶解，注：温度不能太高）（十）1mol/L的HCI溶液（不用灭菌）ml的浓盐酸，加灭菌ddHbO，混匀，室温保存（100ml）。（-一）5mol/L 的 NaOH容液（50ml，10g 的 NaOH容于 50ml 灭菌的 ddHhO中）（不用灭菌）200g的NaOH溶于灭菌的ddHO中，定容至1000ml（十二）1mol/L 的 Tris-HCl （）（ 100ml）（高压灭菌）12.11g 的 Tris 碱80ml的 ddHO加浓盐酸调节pH值至（大约加）（十三）L的EDTA（） （50ml）（高压灭菌）9.305g 的 EDTA-Na

6、2H2O1g的NaOH磁力搅拌器剧烈搅拌40ml 的 ddHO最后加水定容到50ml，用NaOH调节pH值至DNA定量用紫外分光光度计法，1 OD260 50卩g/ml双链DNAPCR（聚合酶链反应）一、所需仪器设备及消耗品冰箱（4C、20C）、高压灭菌锅、离心机、移液器（1套）、枪头、枪头盒、PCRf （包括盒和架）、PCF仪、离心管（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片二、所需化学药品及试剂质粒（阳性对照）、引物（1、2）、4X dNTR DNA模板、buffer （MgCI2）、TaqDNA 聚合酶、ddH

7、2O琼脂糖、DNA标准样品（DNA ladder ）、溴化乙锭（EB、5XTBE 电泳缓冲液（Tris、硼酸、EDTA三、PCF反应体系与反应程序仅供参考成分母液浓度各成分加入量各成分终浓无离子水(口1 / 20 口 I )度缓冲液10X21 X(buffer )MgC225mmol/LmmoI/L4X dNTP2mmol/L2mmoI/L引物5pmoI/L2LTacDNA聚 合酶5U/13U模板DNA20ng/ 口150 ng操作顺序： 水、4XdNTP混合 buffer、taqDNA聚合酶混合，、混合 加入引物 混匀、分装PCRt 向每个PCRt加入模板DNAPCR扩增反应程序:94 C预

8、变性 35min。进入循环：94C变性30s 56C退火3045s 72C延伸12min, 3036个循环。循环结束后再72C延伸7min。外源脱水应答转录因子 DREB基因在转基因小麦中的诱导型表达与抗旱生理效果In duced Expressi on ofDREBTra nscripti onal Factor and Study on ItsPhysiological Effects of Drought Tolera nee in Tran sge nic Wheat成分母液浓度各成分加入量各成分终浓无离子水(1/25 粒 l )度13缓冲液10X1 X(buffer )4X dNTP2mmol/L2mmol/L引物151 口 mol/L引物251 口 mol/LTacpNA聚 合酶5U/11U模板DNA20ng/ 口1150 ngPCR扩增反应程序：94 C预变性5min。进入循环：94C变性45s45C退火45s 72C延伸1min, 35个循环。循环结束后再72C延伸10min。一般PCR反应中引物的终浓度为 口 mol/L , mol/L时