从贯叶连翘中提取金丝桃素的工艺探讨

1、西北植物学报2001,21(6):12091213文章编号:1000240252(2001)0621209205():,结果表明,金丝桃素提取:2h后,加入0.5%NaOH,用75%甲醇在0.05Mpa下78提取5,每次1.5h,溶媒量为5倍,浓缩温度与干燥温度为78。关键词:贯叶连翘;金丝桃素;提取工艺中图分类号:Q946.83文献标识码:AStudiesonthechoiceofconditionsfortheextractionofhypericinfromHypericumperforatumLICui2qin,WANGZhe2zhi(InstituteofLifeScience,Sh

2、aanxiNormalUniversity,Xian710062,China)Abstract:ConditionsfortheextractionofhypericinfromHypericumperforatumL.wereoptimized.Resultsoftheoptimizationshowedthatafterimmersedinwater(45)fortwohours,addingwith0.5%NaOH,5timesextractionwith75%methanolat78un2der0.05Mpa,1.5heverytime,thetemperatureforconcent

3、rationandspray2driednot.above78Keywords:HypericumperforatumL.;hypericin;extraction金丝桃素(Hypericin)是贯叶连翘(HypericumperforatumL.)中最具生物活性的物36质,具有抗抑郁1,2、抗菌消炎2、抗HI等重要功效。它的开发应用在国际V和抗肿瘤上已引起广泛的关注。为了制定科学合理的提取工艺,保证有效成分的提取效率,本研究以金丝桃素含量和干品得率为指标,采用正交试验法研究了从贯叶连翘中提取金丝桃素收稿日期:2001206228;修改稿收到日期:2001208212基金项目:教育部重点科研项

4、目资助。作者简介:李翠芹(1970-),女(汉族),在读硕士研究生,讲师。21的较佳工艺。1材料与方法1.1实验材料贯叶连翘采自秦岭北坡,于6月份开花季节采地上部分顶端30cm。1.2试剂金丝桃素标准品购自Sigma公司,甲醇、乙醇1.3仪器测定用BeckmanHPLC(高效液相色谱仪)。.2金丝桃素含量测定UV测定法:以金丝桃素标准品溶解于无水甲醇中测定OD590nm绘制标准曲线,得回归方程。样品测定:取提取物70mg左右,加入20mL无水甲醇,超声溶解15min,添加无水甲醇至25mL,离心,取上清液5mL,添加无水甲醇至25mL,充分混匀后,在590nm处测定OD值,根据

5、回归方程计算金丝桃素含量。HPLC测定法:以金丝桃素标准品作外标法测定,色谱柱:SpherisorbC18;固定相:5uC18;流动相甲醇水=7525;流速:1.0mL min;检测器:UV254nm;样品溶剂:无水甲醇;样品制备方法同UV法。1.4.3提取效率以所得最终干物质的重量与原植物重量之比及提取物中金丝桃素的百分含量来计算。2结果与分析2.1金丝桃素提取条件的确立影响金丝桃素提取效率的因素很多,如溶剂类型、浓度、提取时间、提取次数、温度等。现针对这些因素采用7因素2水平正交法确立金丝桃素的提取条件。因素水平见表1,结果见表2,方差分析见表3、表4。贯叶连翘提取物HPLC检测图谱见图1

6、,UV检测图谱见图2。表1因素水平Table1Factorlevels因素Factors12B溶媒浓度(%)Contentofmenstruum7590A浓缩和干燥温度()Temperatureofconcentrationand()9078提取温度()Temperatureextraction()C次数Times35DTime(h)11.5时间(h)E溶媒MenstruumF溶媒量Quantityofmenstruum5倍7倍G常压780.05MPa78乙醇甲醇6:表2试验方案与结果Table2Schemeandresultsofexperiment因素Factors试验号Experimen

7、tNo.12345678K1K2A111122221.69.B11221122.1.48C11222211.1.D121212121.361E12122211.47F1211.441.39G1222121.401.43试验指标Experimentindication金丝桃素含量(%)得率(%)()0.350.400.0.500.310.0.260.28()700.0630.06813171211129.6(%)图1样品HPLC图H.金丝桃素;P.伪金丝桃素Fig.1HPLCfigureofsampleH.Hypericin;P.Pseudohypericin图2样品UV图波长(n

8、m)Wave2length(nm)Fig.2UVfigureofsample表3方差分析(含量)Table3Analysisofvariance(content)21方差来源ABCDEFG平方和0.2412.11310-37.81310-31.5110-31.5110-33.12510-41.12510-4-405(自由度1111111均方0.2412.1130-37.81310-31.5110-31.10-33.125.4F值P11349.9436.7..01050505F0.01(1,2)=98.50,F0.251。方差分析(得率)Table4Analysis

9、ofvariance(yield)ABCDEFG平方和48.020.84519.6830.84511.0451.4450.0451.73505(1,自由度11111113均方48.020.84519.6830.84511.0451.4450.0450.578F值P83.081.46234.051.467.1050505050505F0.01(1,3)=34.11,F0.3)=10.13。方差分析表明,溶媒浓度对金丝桃素的提取效率影响极显著,提取温度次之,提取次数对得率的影响较显著。其他因素对结果的影响不显著。影响因素按其程度从大到小依次为B

10、D、EFG(含量),B、DFG(得率)。表2结果表明,4号提取条件最好,即A1B2C2D2E2F1G1,金丝桃素含量为0.50%,得率为18%。计算选优为A1B2C2D2E2F1G2(含量)与A1B2C2D2E2F2G2(得率)。但从方差分析看,溶媒、溶媒量对结果几乎无影响,可任取其一水平,从节约成本考虑,选择较佳提取工艺为A1B2C2D2E2F2G1,即75%甲醇,0.05MPa78提取5次,每次1.5h,溶媒量5倍,浓缩和干燥温度78。2.2水处理对提取效率的影响提取前不用水浸泡或者用不同温度的水浸泡粉碎后的贯叶连翘2h,提取后测定金丝桃素含量和得率,结果见表5。表5水处理对金丝桃素提取率

11、的影响Table5Effectofwateronextractionradioofhypericin水温()Temperatureofwater金丝桃素含量(%)Contentofhypericin(%)0.260.310.430.59得率(%)Yield(%)8.99.712.313.2不浸泡浸泡153045从表5结果可看出,水的前处理有利于去除水溶性杂质,随着水温的升高,金丝桃素6:含量上升,但超过一定温度后,得率下降。综合考虑得率和含量,提取前用45的水浸泡2h为较佳处理条件。2.3碱处理对提取效率的影响浸泡好的料中加入含干料重量0%、0.5%、1.0%、2.0%的NaOH,测定金丝桃素

12、含量和得率,结果见表6。表6NaOHTable6EffectofNaOHcontentonofNaOH(%).1.2.0)0.0.450.350.28(%)(%)9.6从表6结果可看出,在原药材中加入NaOH,有利于金丝桃素的溶出,即有利于提取物得率与含量的升高;当NaOH添加至一定比例(此处为0.5%)时,随着NaOH量的升高,提取物得率上升,但含量在下降;综合考虑得率与含量,0.5%(即NaOH与药材的重量比)为最佳比例。参考文献:1CAMI LLACRACCHIOLORN.1997,http: camilla STJOHNS.FAQ.2江苏新医学院.中药大词典(上)M.上海:上海人民出版社,1977:1489.3中国药科大学.中药词海(第二卷)M.北京:中国医药科技出版社,1996,1176.4VLIETINCKAJ,BRUYNEDE,APERSS.Plant2derivedleadingcompoundsforchemotherapyofhumanim2.,1998,64(2):97.munodeficiencyvirus(HIV)infe