肌苷注射液细菌内毒素检查法的研究

1、    肌苷注射液细菌内毒素检查法的研究        卫生部药品标准收载了肌苷注射液(2ml:100mg),并采用家兔法进行热源检查，随着鲎试剂法本身的发展和进步以及在我国的应用范围的扩大，用鲎试剂法实验取代家兔法进行细菌内毒素检查已是必然的趋势，本文采用了细菌内毒素定量分析技术-动态浊度法对肌苷注射液进行干扰试验，结果报告如下。 1实验材料1.1仪器BET16细菌内毒素测定仪(天津大学无线电厂)。1.2试剂肌苷注射液(50mg/ml),批号971127,971128和98

2、0421,江苏武进制药厂，三批样品均经热原检查合格。鲎试剂，批号980419A,灵敏度为0.03Eu/ml,装量2.2ml,细菌内毒素检查用水(以下简称BET水)，批号981005,规格5ml,均由湛江安度斯生物有限公司提供。内毒素标准对照品，批号:9808,40Eu/支(中国药品生物制品检定所)。2实验方法和结果1，22.1标准曲线的建立2.2样品液的干扰预实验和C。以C/C作为干扰系数F(内毒素回收率)。对批号971128的样品进行测定，结果见表1。表1肌苷注射液(原液)鲎试验干扰预实验结果样品浓度50/mgml-116/mgml-18/mgml-1CCFCCFCCF1.9820.031%

3、2.0110.9860.4901.8761.8821.000.9360.031%0.9930.4010.4040.9630.9881.030.3360.031%0.3320.1450.4500.3360.3521.052.1130.031%1.8360.6420.3501.9451.9380.9961.1230.031%0.8970.3130.3490.9971.0231.030.3620.031%0.3780.1950.5150.3100.2980.961F±SD1%0.425±0.071.01±0.03从以上结果可以看出样品原液对鲎试验有较强抑制作用，其回收率

4、小于1%，16mg/ml稀释液也有一定的抑制作用，回收率在50%以下，而8mg/ml的稀释液则无干扰作用。2.3样品8mg/ml稀释液的干扰确证实验将样品液用BET水稀释成8mg/ml后用同2.2的方法进行试验。对三批样品进行试验，结果见表2。 表2肌苷注射液(8mg/ml稀释液)鲎试验干扰实验结果批号971127971128980421CCFCCFCCF1.8971.7970.9472.1682.1430.9881.6531.5870.9600.9960.9720.9761.2181.1340.9310.8770.8250.9410.3320.3411.030.3220.3311.030.2

5、450.2651.082.1242.1030.9901.8761.8851.001.7861.7951.001.1151.2161.090.9651.0181.050.7860.7430.9450.2960.2760.9320.2780.3111.120.2010.2211.10F±SD0.994±0.061.02±0.061.00±0.07三批样品的结果无显著性差异(P0.05)。由表2的结果可以看出，样品8mg/ml稀释液的内毒素回收率在100%左右，表明对鲎试验无干扰。 3样品细菌内毒素检查理论限值L的计算和常规鲎试验法的建立3595版药典确定的肌

6、苷注射液热原检查剂量为家兔1.6ml/kg(80mg/kg),静脉注射用药的内毒素限值为5Eu/kg,因此肌苷注射液的内毒素理论限值L应为3.125Eu/ml(5÷1.6),或0.0625Eu/mg。常规检查计算样品最大可稀释倍数(MVD)时可按此限值计算。对于8mg/ml的样品稀释液，其L值折算为0.5Eu/ml。凝胶法和浊度法常用的鲎试剂(灵敏度为0.5,0.25,0.125,0.06和0.03Eu/ml等)都是适用的，样品检测时的最大可稀释倍数(MVD)均在11(L÷)倍以上，所以用鲎试验法来检测肌苷注射液的内毒素是完全可行的。4讨论与凝胶法的试验相比，内毒素定量分析

7、技术-动态法最大限度地消除了内毒素标准品对试验结果的影响，在标准曲线建立以后，试验结果不再受内毒素标准品准确性的影响。使试验结果的重现性得以保证。此外，建立在定量分析基础上的抑制/增强系数更具科学性，对样品的干扰行为的描述更为准确。这是凝胶法所不及的。本实验结果表明肌苷注射液原液以及稀释液(16mg/ml)的内毒素回收率在50%以下，表明对鲎试验有干扰，样品稀释至8mg/ml后干扰消除，可用鲎试验。王晓华(浙江省药品检验所杭州 310004)姚治(浙江省药品检验所杭州 310004)参考文献1，胡冠时，苏桂兰，等.鲎试剂反应动力学.前卫药学杂志，1994，820.2，Michale E.Dawson inhibition or enhancement testing.Lalupdate,1997,15