生物技术制药试卷A-答案

1、生物技术制药试卷A一、名词解释：（本题共10小题，每小题5分，共计50分）1、生物药物：是指利用各种生物材料，综合采用各种生物技术的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。2、抗生素：由微生物产生，在低浓度下能杀灭和抑制病原体，但对宿主不会产生严重的副作用的物质，或使用化学方法半合成的衍生物和全合成的仿制品。广义的抗生素还包括一些抗肿瘤药、杀虫剂和除草剂。 3、补料分批发酵： 是指将种子接入发酵反应器进行培养，经过一段时间之后，间歇式地、或者连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的方法。4、限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切

2、断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。 5、载体：将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制和增殖的工具。 6、转化细胞系：正常细胞经过某个转化过程，失去正常细胞的特点而获得无限增殖能力的细胞系。7、微载体培养：将细胞吸附于微载体表面，再在培养液中进行悬浮培养，使细胞在微载体表面生长成单层的方法称为微载体培养法。8、毛状根： 受到发根农杆菌感染后形成的根组织，易于培养，改变了植物的次生代谢。毛状根生长快速和次级代谢产物含量高，特别适用于从木本植物和难于培养的植物

3、中得到较高含量的次级代谢产物。9、气升式反应器：没有搅拌，气体通过喷管进入剪切力更小，主要用于悬浮细胞的分批式培养，近年开发用于贴壁细胞的微载体培养，并进行半连续、连续和灌流式培养。10. 酶固定化： 指经物理或化学方法处理，使酶（细胞）限制或固定于特定空间位置，使之不但能连续发挥催化作用，而且反应后酶又可以反复利用的技术。二、简答题 （本题共5小题，每小题8分，共40分）1. 简述生物药物新药的研发流程。答：新药研究和开发的主要过程：(1) 确定研究计划； (2) 准备候选菌株； (3) 选择合适药理模型初筛（摇瓶）、复筛（小型发酵）体外试验、细胞试验；(4) 提纯有效成分进行化学分析 ；

4、(5) 精制样品（中型发酵）；(6) 临床前期(Preclinical ) ；(7) 期临床 (Preclinical I)；(8) 期临床 (Preclinical )；(9) 期临床 (Preclinical )；(10) 注册申请上市、试生产 ； (11) 售后监测(Postmarketing surveillance)。2. 简述生物药物的优点和缺点。答：生物药物是指利用各种生物材料，综合采用各种生物技术的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。优点：（1） 用量少，药理活性高；（2）特异性强，治疗的生理生化机制合理，疗效可靠；（2） 毒副作用小、价值高；（3） 缺点：（1）成

5、分复杂：大多数是混合物；（2）不稳定：易变性，易失活，易降解。（3）提取纯化工艺复杂、生产技术难度高；（4）生理副作用常有发生。3. 给出下列生物药物的中文名称: IFN；TNF；IL；G-CSF；EPO；GM-CSF；r-SK；r-SAK；GH；EGF；bFGF；rhTPO；t-PA；SRM 答：IFN （人-干扰素）；TNF （肿瘤坏死因子）；IL （白细胞介素）；G-CSF （粒细胞集落刺激因子）；EPO （促红细胞生成素）；GM-CSF （粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）；r-SK （重组链激酶）；r-SAK （重组葡激酶）；GH （生长激素）；EGF （表皮细胞生长因子）；bFGF （碱

6、性成纤维细胞生长因子）；rhTPO （重组人血小板生成素）；t-PA（ 组织纤溶酶激活剂）；SRM （生长激素释放抑制素）。 4. 简述微生物发酵制药的基本流程。答：微生物发酵制药基本流程：菌种选育（自然界选种、诱变育种、基因工程、细胞工程）培养基配制（根据培养基的配制原则制备，实践中需多次试验配方）灭菌（杀灭杂菌（胞体、孢子及芽孢）扩大培养和接种发酵过程（检测进程，满足营养需要；严格控制温度、pH、溶氧、转速等）分离纯化（菌体：过滤、沉淀；代谢产物：蒸馏、萃取、离子交换）5、 简述基因工程操作流程答：基因工程的操作流程：（1）分：分离目的基因；（2）切：对目的基因和载体适当切割；（3）接：目

7、的基因与载体连接；（4）转：重组DNA转入受体细胞；（5）筛：筛选出含有重组体的受体细胞；（6）表：目的基因在受体细胞中表达，受体细胞成长为基因改造生物。三、设计题 （本题共1题，共计10分） 请设计一个基因工程药物的生产工艺流程（应包括工程菌构建、扩大培养方法、产物分离纯化、质量检测等环节）。答：干扰素a-2b 的制备干扰素（INF）是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等等作用,是人体防御系统的重要组成部分,干扰素（INF）最早被用于诱导人体产生白细胞。（1） 基因工程菌的组建诱生的白细胞或者成纤维细胞提取核酸 通过寡dT-纤维素柱提取mRNA pBR322质粒

8、 5%-23%蔗糖密度梯度离心提取12S-mRNA PstI内切酶切割 由mRNA转录成cDNA 切割段位于内酰胺基酶基因内 结果导致内酰胺基酶失活，不抗青霉素双链cDNA用末端PstI酶切割 再用DNA转移酶接上dT或者dG 在pBR322质粒DNA的切割段加上dA或者dC + 退火获得杂交质粒 转化大肠杆菌K-12扩增杂交质粒 筛选能够抗四环素、但是对氨苄青霉素敏感的细菌克隆株 采用杂交翻译法挑选含有干扰素cDNA的克隆 将干扰素cDNA克隆进表达载体 在大肠杆菌中进行高效表达 （进入下游工艺）（2） 基因工程菌的发酵生产人干扰素a-2b的基因工程菌为SW-IFNa-2b/E.coliDH

9、5a。质粒使用PL启动子，含有四环素抗性基因。种子培养液含1%蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%NaCl 基因工程菌接种到4个1000ml三角烧瓶之中，每个烧瓶内装有250ml种子培养基，30摇床培养10小时，作为发酵罐的种子 用15L发酵罐进行发酵，装发酵培养基10L 搅拌转速500r/min、通气量为1：1v/v*min、溶氧量为50%30发酵8小时，42诱导2-3小时 鉴控手段：每隔不同时间，取2毫升发酵液，10000r/min离心除去上清液，称量菌体湿重。（3） 干扰素的制备 发酵物质4000r/min离心30min，除去上清液，得湿菌，从其中取100g。悬浮于20mmol/L磷酸缓

10、冲液（PH=7.0）500ml之中，冰浴条件下进行超声破碎。 4000r/min离心30min，除去上清液。沉淀部分用100ml提取液在室温条件下，进行搅拌抽提2小时 提取液15000r/min离心30min，下层不溶弃去。取上清液，用20mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.0）稀释至尿素浓度0.5mol/L 加入0.1mmol/L二巯基苏糖醇，4搅拌15小时。15000r/min离心30min，除去不溶物。上清液用截流量=10000相对分子质量的中空纤维超滤器浓缩 浓缩液采用Sephadex G50层析柱分离，层析柱2cm*100cm、先用20mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.0）平衡固定相，上柱之后，用同一缓冲液洗脱分离 收集人干扰素a-2b部分，用SDS-PAGE检查。再经DE-52柱进行纯化层析柱2cm*50cm、上柱之后，分别采用含有0.05mol/L、0.10mol/L、0.15mol/L的NaCl的20mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.0）洗涤。 收集含有收集人干扰素a-2b部分。分装冻干成品鉴定成品包装。（4） 质量控制标准和具体要求（1） 半成品检定-13项指标1、 干扰素效价测定；2、