温热低渗液联合丝裂霉素对小鼠腹水瘤腹腔种植的影响

1、    温热低渗液联合丝裂霉素对 小鼠腹水瘤腹腔种植的影响        摘要：目的探讨低渗性温热化疗对小鼠腹水瘤细胞腹腔种植的影响及探索能够结合热化疗药物达到最佳疗效的灌注液介质的浓度。方法以昆明小鼠腹水瘤为模型，观察不同温度、不同浓度的低渗液结合MMC抑制腹水瘤细胞的生长及其毒性作用。结果以上方法均能破坏小鼠腹水瘤细胞，减少瘤细胞数量，抑制腹水产生，延长小鼠生存时间，S期肿瘤细胞百分率减少，瘤细胞DNA指数(DI)降低(P<0.05)，且以43°

2、C重蒸溜水(DDW)及MMC腹腔内灌注的方法疗效最佳。结论低渗液，尤其是DDW结合热化疗药物行腹腔内灌注是进展期消化道肿瘤患者发生腹膜种植转移的一种新的、有效的治疗方法。关键词：腹腔内；热低渗化疗；腹水瘤分类号：R73-36+1文献标识码：A文章编号：1000-8578(2000)01-0040-03The Effects of Hyperthermic and Hypotonic Solution in Combination with MMC inMice Following Intraperitoneal Implantation of Ascitogenous Tumor CellsY

3、U Honglai,ZHANG Liang,HUANG Guangjian,et al（Department of Surgery,Huashan Hospital,Shanghai Medical University,Shanghai 200040,China）Abstract：Objective To evaluate the efficacy of hyperthermia and hypotonic solution in combination with antitumor drugs in mice implanted intraperitoneally with ascitog

4、enous tumor cells.Methods The model of ascitogenous tumor cells of KM mice was used.The effects on interfering formation of ascitogenous tumor and inhibiting free cells in ascites and toxic effects were systematically observed after treated with different hyperthermic and hypotonic solution in combi

5、nation with MMC.Results Compared with the control, the results showed that cancer cells in KM mice peritoneal cavity were seriously damaged with decreasing number and progression of their ascites formation,the survival days were prolonged,the percent of tumor cells in Sphase and DNA index(DI)decreas

6、ed(P<0.05).However.the best treatment result was observed in mice receiving MMC in 43°C DDW.Conclusion Hypotonic solution,especially DDW,and hyperthermia containing chemotherapentic agent by Ip infusion may be a new available treatment of choice in the management of peritoneal carciomatosis

7、in advanced digestive cancer patients.Key words：Intraperitoneal;Hyperthermic hypotonic chemotherapy,Ascitogenous tumor cells胃肠道癌根治术后，肿瘤局部复发或腹膜转移是患者死亡的主要原因1，我们针对其腹膜种植性转移的防治问题，利用昆明小鼠腹水瘤模型，模拟人体环境，观察不同温热、不同浓度低渗液结合MMC对抑制腹水瘤细胞的生长及其对机体的毒副作用。探讨能够结合热化疗药物达到最佳疗效的灌注液介质，以期为腹腔内温热低渗化疗应用于临床提供实验依据。1材料与方法1.1动物模型建立昆明小

8、鼠，鼠龄45周，全部雌性，体重2124g；腹水瘤细胞株(肝癌细胞腹水型，H22，由上海药物研究所提供)。在超净工作台内，每只小鼠腹腔内注射H22单细胞悬液0.1ml(3×106/只)。该模型已经观察20代，移植瘤生长潜伏期6±0.7天，带瘤生存期13.4±2.2天，移植率99%。1.2动物分组与处理小鼠腹腔接种瘤细胞24小时，随机分成5组，每组12只。对照组腹腔注射常温生理盐水(NS)；实验组灌注37°CNSMMC；组43°C、MMC及生理盐水，灌注时水温达45°C，至腹腔内为43°C可维持15分钟；组43°C、M

9、MC及0.45%氯化钠溶液；组43°C、MMC与DDW。注入药液量为2ml/只，MMC的浓度均为1mg/kg2，接种后第1、8天各灌注1次，共2次。1.3观察与检测指标(1)接种3天后，每日测鼠重并作腹腔穿刺，观察腹水产生时间；小鼠死亡时准确计腹水量；(2)小鼠出现腹水时每只取0.5ml，按白细胞计数计瘤细胞总数；用台盼蓝染色计瘤细胞存活率；(3)荷瘤生存时间和生命延长率；(4)小鼠出现腹水时每只取0.5ml，经涂片、Feulgen染色后，用像细胞光度计(ICM)检测瘤细胞S期百分数和DNA指数(DI)；(5)作尸解观察胸、腹腔内脏器的病理变化并作石蜡切片；(6)小鼠濒临死亡时每只取

10、腹水0.5ml，制作光镜和扫描电镜标本，行形态学检查。1.4统计学处理实验数据采用t、F检验。2结果2.1腹水出现时间、腹水量、瘤细胞计数及瘤细胞存活率对照组于接种后6.0±0.74天开始出现腹水，各实验组腹水出现时间均延长，组9.0±2.09天；组9.3±2.1天；组12.0±2.37天；组出现腹水最迟15.3±2.83天，但各组致瘤率仍为100%。从表1可见与对照组比较各实验组腹水量、瘤细胞计数及瘤细胞存活率都呈下降趋势(P<0.05)；其中组疗效强于其它治疗组。表1各组腹水量(ml)、瘤细胞数(107/L)及瘤细胞存活率(%)(x&

11、#177;s)组别对照腹水量瘤细胞数瘤细胞存活率注：组vs对照组P<0.05vs组P<0.05 2.2荷瘤生存时间与生命延长率各实验组较对照组生存时间明显延长(P<0.01)，生命延长率86%180%，组随着温度升高、渗透压降低生存时间逐渐延长，温热化疗组(、组)强于常温化疗组(组)；温热化疗组中以组生存时间最长，见表2。对照组接种后17天内全部死亡；至31天时，组全部死亡，组有4只生存(33.3%)，组9只生存(75%)；至40天时，组全部死亡，而组3只生存，最长存活48天。表2各组生存时间(天)及生命延长率(%)(x±s)组别对照生存时间*生命延长率评价+注：*

12、组vs对照组P<0.01*vs组P<0.05*vs组P<0.05±：>50%(P>0.05)；+：51%80%;+：80%120%；+：120%160%；+：>160% 2.3S期细胞百分数及DI值组S期细胞百分数与对照组比较明显减少(P<0.05)；对照组DI值均>1，为异倍体型，从表3可见实验组与对照组差异有显著性(P<0.05)、与组间差异也有统计意义。表3ICM测量结果(x±s)组别对照S期百分率*DI*注：组vs对照组P<0.05*vs组P<0.05 2.4病理组织学观察小鼠晚期腹部极度膨隆，形体消

13、瘦，呈恶液质状态。剖腹见腹腔内充满大量血性腹水。实验组小鼠腹腔脏器表面光滑，未发现腹膜癌结节。所有小鼠无肠粘连，无腹腔内脏器损伤及肝肺转移，无肝、肺、肾等脏器组织细胞水肿。2.5腹水瘤细胞光镜电镜改变对照组涂片中可见大量圆形瘤细胞，细胞核大而圆、深染，、组见部分瘤细胞肿胀或气球样改变，部分胞浆碎裂或坏死；组瘤细胞数量明显减少，残留瘤细胞多呈坏死性改变，形态不完整，胞浆溶解，核固缩或碎裂，电镜下几乎均见该组瘤细胞结构破坏，而其它各组表现为程度不一的退形性改变，可见线粒体及胞浆肿胀。3讨论胃肠道肿瘤患者术后出现腹膜播散，其预后极差，单纯手术治疗、全身化疗、腹腔化疗、放疗及免疫治疗都不能达到满意疗效

14、；其根本原因在于术后腹腔内存在游离癌细胞或微小癌灶3。为了阻止腹腔内残留癌细胞和微小癌灶的生长，人们提出采用术后早期腹腔内温热化疗，防治术后局部复发和腹膜播散。体外研究表明46，温热联合化疗药物对肿瘤的杀伤有协同作用。热能改变癌细胞膜通透性，有利于MMC渗入肿瘤细胞内，加强其作用；热能增加MMC癌细胞DNA交联 ，加强对癌细胞杀伤作用；热还能抑制化疗后肿瘤细胞的修复7，8。当细胞处于低渗液或微渗液中时，依靠细胞内外渗透压差，低渗液或微渗液可穿过细胞膜，进入细胞内直接使用癌细胞肿胀、破碎、溶解，随着渗透压浓度的降低，其破坏的细胞数目增多；另外，低渗环境可促进化疗药物与癌靶细胞结合，有利于化疗药物

15、进入瘤细胞内，加强其杀伤作用。本研究采用了术后腹腔内复发机制相仿的小鼠腹水瘤腹腔接种模型，施行不同灌注方法行腹腔内温热化疗。结果显示：以上各实验组均能破坏腹水瘤细胞，抑制腹水产生，延长生存时间，瘤细胞合成期S期百分比减少，DI值降低(P<0.05)；组随着肿瘤细胞所处环境温度的升高、渗透压降低、杀伤细胞效应增强，温热化疗组()生存时间与常温化疗组(组)差异显著(P<0.05)，而温热化疗组中以43°C、MMC、DDW三者结合腹腔内灌注效果最佳(vs、组P<0.05)，且较其它组无特殊副作用。实验结果提示，术后早期行腹腔内温热化疗优于常规的单纯腹腔内化疗；同时若选择微

16、渗的DDW为灌注介质，其疗效强于等渗性温热化疗。这在临床上具有很大实用意义，对进展期胃肠道癌已行根治术后，用43°C、DDW结合MMC进行腹腔灌洗，可较有效地预防胃肠道癌术后腹膜种植。作者单位：郁洪来（江苏连云港海滨疗养院222042）张亮（上海医科大学附属华山医院）黄广健（上海医科大学附属华山医院）蔡端（上海医科大学附属华山医院）张延龄（上海医科大学附属华山医院）参考文献：1Hagiwara A.Takahashi T,Kojima O,et al.Prophylaxis with carbonabsorbed mitomycin against peritoneal recurr

17、ence of gastric cancerJ.The LANCET,1992,339:629.2Koga S.Hamazoe R,Maeta M,et al.Treatment of implanted peritoneal cancer in rats by comtinuous hyperthermic peritoneal perfusion in combination with an anticancer drugJ.Cancer Research,1984,44:1840.3Sayag AC.Gilly FN,Carry PY,et al.Intraoperative chemo

18、hyperthermia in the management of digstive cancersJ.Oncology,1993,50:333.4Loggie BW,Mark BA,Ronald A,et al.Treatment and prevention of malignant ascites associated with disseminated intraperitoneal malignancies by aggressive combinedmodality therapyJ.American Surgeon,1997,63(2):137.5Fujimoto S.Takahashi M,Kobayshi K,et al.Relation between clinical and histologic outcome of intraperitoneal hyperthermic perfusion fo