分子心血管学教育部重点实验室转基因动物平台

1、12仪器设备：仪器设备： 显微操纵系统、倒置显微镜、自制防震台、显微操纵系统、倒置显微镜、自制防震台、细胞培养箱、超净台、方波电穿孔系统、高速细胞培养箱、超净台、方波电穿孔系统、高速冷冻离心机和独立的动物饲养室。冷冻离心机和独立的动物饲养室。功能：功能： 构建过表达心血管疾病相关基因载体，利构建过表达心血管疾病相关基因载体，利用转基因或基因敲除的方法，制备心血管疾病用转基因或基因敲除的方法，制备心血管疾病小鼠和家兔的模式动物，为系统地研究心血管小鼠和家兔的模式动物，为系统地研究心血管疾病病理机制、评价药物药效和药理提供体内疾病病理机制、评价药物药效和药理提供体内研究的技术手段。研究的技术手段。

2、 3Genetically Engineered Mouse Models:Transgenic characterize the ability of a promoter to direct tissue-specific gene expression examine the effects of overexpressing andmisexpressing endogenous or foreign genes at specific times and locations in the animals45内皮细胞内皮细胞Tie2平滑肌细胞细胞平滑肌细胞细胞SM22a a神经系统神经

3、系统Neuron specific enolase,nestin, synapsin, GFAP肝脏肝脏Albumin, ApoE脂肪脂肪AP2肾脏肾脏Uromodulin, mSGLT 2,mKAP2, CYP27B1皮肤皮肤Keratin 5,keratin 6心脏心脏MHC, MLC2Transgene Design: Representative Examples of Tissue-Specific Expression Profiles全身表达全身表达EF1，CMV胰腺胰腺Elastase赢润生物（Yrbio）长沙市国家高新技术开发区 678Pros: Relatively sim

4、ple and efficient Generate transgenics in 3 months Long transgenes possible Potentially all speciesCons: Multiple copies at a single locus Occasionally mosaic founders (late stage integration) 10% insertions result in phenotype due to disruption ofendogenous gene Deletion, complex rearrangements of

5、host genome Not all integrated transgenes are expressed. Expressionlevel do not correlate well with copy number91011定动物实验日期实验用动物种类和数量PMSG注射时间和量实验日期HCG注射时间和量交配情况动物年龄饲养环境光照周期雄鼠淘汰雌鼠淘汰实验记录实验记录操作人操作人赵芙洁2011-10-82011-10-82011-10-92011-10-92011-10-102011-10-102011-10-82011-10-82011-10-92011-10-92011-10-102

6、011-10-10C57C57* *5 5C57C57* *9 9C57C57* *5 5150ul150ul（11:00AM11:00AM）150ul150ul（11:00AM11:00AM）150ul150ul（11:00AM11:00AM）赵芙洁，韩迎春2011-10-102011-10-102011-10-112011-10-112011-10-122011-10-12150ul150ul（10:00AM10:00AM）150ul150ul（10:00AM10:00AM）150ul150ul（10:00AM10:00AM）赵芙洁，韩迎春C57C57：=1:1=1:1* *5 5C57C

7、57：=1:1=1:1* *9 9C57C57：=1:1=1:1* *5 5ICRICR：结扎：结扎=1:1=1:1* *1818ICRICR：结扎：结扎=1:1=1:1* *1818ICRICR：结扎：结扎=1:1=1:1* *18183W3W3W3W3W3W2525252525257:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:0012实验日期实验日期见栓动物数量供体受体取卵开始时间取卵结束时间取卵数量加热块温度注射基因名称、片段确认和浓度稀释离心情况注射台温度注射开始时间注射卵数量注射结束时间存活卵数量2011-10-6

8、2011-10-6操作人10王宇辉2 28:008:009:009:0080803636PCSK9PCSK9野生野生TETE稀释，稀释，3-3-5ng/ul5ng/ul，离心，离心353513:0013:00606016:0016:00101013每只动物回输卵数量回输动物体重戊巴比妥钠用量回输情况手术情况第二天情况第五天体重第10天体重第15天体重出生情况带仔情况基因型鉴定10X1251%，200ul好顺利恢复262628未生李海波14 供体鼠见栓率及取卵数统计供体鼠见栓率及取卵数统计年龄年龄3-4周周品系品系C57BL/6激素剂量激素剂量5U/只只见栓率见栓率60.0%平均取卵数平均取卵数27个个/只只 受体受体ICR雌鼠情况统计雌鼠情况统计年龄年龄8-16周周见栓率见栓率15%回输数回输数51只只产子母鼠数产子母鼠数20只只出生子鼠数出生子鼠数80只只制备转基因品系制备转