马棘不同提取部位对小鼠镇痛作用的研究

1、    【摘要】  目的研究马棘（Indigofera Pseudotinctoria Matsum，IPM）不同提取部位对小鼠的镇痛作用。方法用两种不同提取方法（溶剂萃取法和大孔吸附树脂梯度洗脱分离法）对马棘进行提取，制备样品，通过小鼠醋酸扭体法（acetic acid writhing ,AW）及热板法（hotplate,HP）筛选镇痛有效部位。结果溶剂萃取法（solvent extraction,SX）和大孔吸附树脂梯度洗脱分离法（gradient elution separation with macroporous resin ,MG

2、S）所提取样品均对醋酸引起的小鼠扭体反应有明显的抑制作用；SX提取物镇痛有效物质主要集中在正丁醇部分、石油醚部分、水部分；MGS提取物能明显延长小鼠热板的痛阈时间，其镇痛有效物质主要集中在300 ml·L-1和900ml·L-1的乙醇洗脱部分以及沉淀物部分。结论 马棘对实验小鼠具有明显的镇痛疗效；初步筛选了马棘镇痛作用有效部位的研究方法。 【关键词】  马棘 提取部分 镇痛 有效部位Research of Analgsic Effects of Different Extraction Parts from Indigofera Pseudotinctria Ma

3、tsum in MiceAbstract：ObjectiveTo research the analgesic effects of different extraction parts.MethodsThose parts of the IPM were extracted by two means,such as solvent extraction(SX)and gradient elution separation with macroporous resin (MGS). Those utility parts of analgesic effects were optimized

4、by the acetic acid writhing (AW) and hot plate (HP) in mice.ResultsThe writhing responses were inhibited obviously in mice by those extracted samples which from the IPM by the SX and MGS. The main active substance was centralized to n-butanol,petroleum and water fractions. The pain threshold time of

5、 hot plate was extended obviously by the MGS extract in mice,its analgesic substance was centralized to 300 ml·L-1,900 ml·L-1elution fractions in alcohol and sediments fractions.ConclusionThe IPM has analgesic effect obviously in experimental mice. A research method has been screened preli

6、minarily for the active position of analgesic effect of the IPM.Key words：Indigofera Pseudotinctoria Matsum(IPM);  Extraction parts;  Analgesia;  Effect position    马棘（Indigofera Pseudotinctoria Matsum ,IPM）为豆科植物马棘的干燥根皮，又名一味药、铁扫帚、马胡梢、野绿豆。含蒎立醇（Pinicol）、黄酮类（Flavona）、酚、鞣质、

7、环烯醚萜类、三萜皂苷类、-类甾醇以及多种微量元素等1。性甘、微苦，平。用于清热利湿、消食除积、祛痰止咳，具有清热解毒之功效，可治疗扁桃体炎、疟疾、疔疮痈肿、烫伤、烧伤等1，2。民间用于跌打损伤、风湿痹痛、出血。还有报道马棘具有明显的镇痛作用，并研究了其镇痛有效部位。现报道如下。1  材料与方法1.1  动物及材料昆明种小鼠，体重1822 g，由湖北省实验动物中心提供（医动字第21-68号）；酮洛芬（ketoprofen，浙江湖州市合成药厂生产，湖北省医药公司经销，050811），吐温-80（上海申隆药业，050712）；D101大孔树脂（天津海光化工有限公司）；石油醚、醋酸

8、乙酯、正丁醇、乙醇、醋酸均为分析纯，构于湖北省医药公司；马棘皮药材采自湖北省建始县，经鉴定为豆科植物马棘（Indigofera Pseudotinctoria Matsum,IPM）全草的根茎皮。YLS-6B智能热板仪（安徽淮北正华生物仪器设备有限公司制造）。BS110S电子天平（沈阳龙腾电子有限公司生产）。1.2  方法1.2.1  溶剂萃取法分离样品按文献4，5称取马棘皮药材粗粉200 g，加950 ml·L-1乙醇回流提取3次，第1次10倍量溶剂，回流2 h，第2次和第3次8倍量溶剂，回流1.5 h，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇至无醇味，得100 ml浓缩

9、液，浓缩液加1倍量水混悬后依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，100 ml/次，合并萃取液，回收溶剂得样品石油醚部分8.1 g(A)、醋酸乙酯部分1.8 g(B)、正丁醇部分9.4 g(C)、萃取剩余部分为水部分23.5 g(D)。以254 ml，20 ml·L-1吐温-80溶解，为母液备用。1.2.2  大孔吸附树脂梯度洗脱分离样品按文献4，5称取马棘药材粗粉200 g，置渗漉器内，800 ml·L-1乙醇浸泡过夜后开始收集渗漉液，至流出液薄层层析（TLC）检测无斑点为止，减压浓缩渗漉液，回收乙醇至无醇味，加1倍量水混悬静置过夜，析出油脂状沉淀物，减压抽

10、滤，得油脂状沉淀物6.4 g（E），滤液浓缩至50 ml，经大孔吸附树脂柱，以蒸馏水、100，300，500，700和900 ml·L-1乙醇水溶液梯度洗脱，经TLC检测，合并相似部分，得水洗脱部分7.8 g(F)，100 ml·L-1与300 ml·L-1部分合并为300 ml·L-1乙醇洗脱部分16.4 g(G)、其余部分合并为900 ml·L-1乙醇洗脱部分7.1 g(H)。以1810 ml，20 ml·L-1吐温-80溶解，母液备用。1.2.3  醋酸扭体法取小鼠120 只，随机分为12组，每组10只，、各半。分别i

11、g相应样品液，其方法是：阴性对照组吐温-80(20 ml·L-1)20 g·kg-1，阳性对对照组酮洛芬5 mg·kg-1，样品A120  mg·kg-1，样品B30  mg·kg-1，样品C160 mg·kg-1，样品D480  mg·kg-1，样品E15  mg·kg-1，样品F20  mg·kg-1，样品G 40 mg·kg-1，样品H15  mg·kg-1。给药后1 h，各组小鼠分别ip 6  ml·

12、;L-1醋酸溶液10 ml·kg-1，记录小鼠开始扭体时间及515 min内扭体次数。1.2.4  热板法选痛阈值在530 s的雌性小鼠120只，随机分为12组，每组10只。测各鼠痛阈值两次（取均值）后，分别ig相应样品液，其方法是：阴性对照组吐温-80（20 ml·L-1）仍为20 g·kg-1，其他均ig醋酸扭体法中相应样品剂量的4倍。各组ig样品液1，2和3 h分别测定各鼠痛阈值两次（取均值）。1.2.5  统计方法所有数据用(±s)表示，用软件SPSS10.0进行方差分析及Dunnett t检验；方差不齐资料，用非参数秩和检验

13、进行组间比较。-     The paper shows that flavanones are abundant in longan nucleuses. It is significant to make full use of longan necleuses. It has a brilliant prospect in developing this natural resources. 【参考文献】  1Cai Changhe, Tang Xiaolang,Zhang Aiyu, etc. longan fruit pulp nut

14、ritional therapy value and its development application prospectJ. Food Science, 2002, 23 (8): 328.2Xu Jiankai. Longan high production technology question and answerM. Guangzhou: Guangdong Science and Technology Publishing Press,2001:56.3Tan Shuhui, Zhan Reting. Chinese medicine open country recognit

15、ion handbook (2)M. Guangzhou: Guangdong Science and Technology Publishing Press,2004:208.4Nanjing college of pharmacy << Chinese medicine study >> compilation group Chinese medicine study (center book) M. Nanjing:Jiangsu People's Publishing Press,1976:628.5Xiao Gengsheng, Huang Ruqiang,Ceng Qingxiao,etc. Nutrition composition of Longan seedsJ.Food Science and Technology,2004,(1):93.6Xia Xingzhou, Zhang Hui, Wei Chuanwan. In the banyan tree leaf the flavonoid withdraws the condition researc