饲料中真蛋白的测定

1、河南畜牧兽医 2007年 (第 28卷 第 10期综 合 版饲料是畜牧生产中的重要生产资料 , 饲料中蛋白质含 量是判定饲料营养价值的一项重要指标 , 饲料中粗蛋白质 包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质 , 后者主要包括 游离氨基酸、 硝酸盐、 氨等 , 故不能反映出饲料蛋白质对动 物的真正营养价值。目前 , 部分养殖场户存在一个认识误 区 , 认为标签上标注的粗蛋白质含量高 , 营养价值就高。 为 此 , 部分饲料生产企业利用人们认识上的误区 , 在饲料生 产中添加羽毛粉、 血粉、 尿素等不易被动物机体吸收的物 质 , 饲料产品中粗蛋白含量提高了 , 但却没有相应的营养 价值 , 造成养殖

2、效益下降。漯河市畜产品质量安全监测检 验中心成立以来 , 每年要对送检的 1000多个饲料样品进 行蛋白质的测定 , 笔者对如何测定饲料中真蛋白的含量及 注意事项 , 有了一些亲身的感受和认识 , 现提出与大家共 同讨论、 互相学习 :1适用范围本操作方法适用配合饲料、 浓缩饲料和单一饲料。 2原理在样品水溶液中加入过量硫酸铜 , 在碱性条件下 , 纯蛋白被氢氧化铜沉淀 , 用水洗去水溶性含氮物 , 沉淀部分 按粗蛋白的测定方法测定其含氮量。3试剂3.110%硫酸铜溶液称取五水硫酸铜 10g , 用水溶解 , 转移至 100ml 容量瓶中定容至刻度。3.22.5%氢氧化钠溶液称取 2.5g 氢

3、氧化钠 , 用水溶解 , 转移至 100ml 容量瓶 中定容至刻度。催化剂0.4g 硫酸铜 (5个结晶水 , 6g 硫酸钠 , 均为化学纯 ,磨碎混匀。3.5氢氧化钠 (化学纯 40%水溶液 (M/V 。配制方法 :500g 氢氧化钠 +1100ml 蒸馏水。3.6硼酸 (化学纯 2%水溶液 (M/V 。配制方法 :20.5g 硼酸 +1000ml 蒸馏水。甲基红、 1%乙醇溶液、 溴甲酚绿、 0.5%乙醇溶液 , 等体积混合 , 在阴凉处保存期为 3个月。盐酸标准溶液邻苯二甲酸氢钾法标定 , 按 GB/T 601制备。3.8.10.02mol /L 盐酸标准溶液1.67ml 盐酸 (分析纯

4、注入 1000ml 蒸馏水中。 3.8.20.1mol /L 盐酸标准溶液8.3ml 盐酸 (分析纯 注入 1000ml 蒸馏水中。 3.9硫酸铵 (分析纯 干燥。 3.10蔗糖 分析纯。 4仪器设备实验室用样品粉碎机 ; 分样筛 :孔径 0.45mm (40目 ; 分析天平 :感量 0.0001g ; 电炉 ; 滴定管 :酸式 , 25ml 、 50ml ; 凯氏烧瓶 :250ml ; 凯氏蒸馏装置 :常量直接蒸馏式或半微 量 水 蒸 汽 蒸 馏 式 ; 锥 形 瓶 :250ml ; 容 量 瓶 :100ml ; 烧 杯 :样品的处理称取待测样品 0.51.0g (精确到 0.1mg 于 2

5、00ml 烧 杯中 , 加入 50ml 蒸馏水 , 用玻璃棒搅拌均匀 , 在电炉上加 热煮沸 , 加入 20ml 的 10%硫酸铜溶液 , 再加入 20ml 的2.5%氢氧化钠溶液中 , 搅匀 , 从电炉上取下 , 室温放置 2小时 , 然后用倾泻法将样品过滤到滤纸上 , 用少量温水多次 洗涤烧杯和沉淀物 , 直至洗出液无硫酸根离子 (用 10%氯饲 料 中 真 蛋 白 的 测 定胡艳丽 , 王克然(漯河市畜产品质量安全监测检验中心 , 河南 漯河462000中图分类号 :S816.17文献标识码 :B 文章编号 :1004-5090(200710-0031-02检测技术以使溶液完全澄清 ,

6、排除其他添加剂的干扰 , 且在酸性条 件下 , 羧甲基纤维素钠的黏度下降 , 因此可以对样品的 pH 值进行适当调整。 参考文献 :1中华人民共和国国家技术 .GB 8387. 中华人民共和国 国家标准 -茶游离氨基酸总量测定 .2中华人民共和国国家技术 .GB/T 16771-1997. 中华人民共和国国家标准 -橙、 柑、 桔汁及其饮料中果汁含量的测定 .3茚 三 酮 比 色 法 测 定 酱 油 中 氨 基 氮 含 量 的 试 验 条 件 探 讨 . 山东轻工业学院学报 , 1996, (6 . 4中华人民共和国国家技术 .GB/T 18246-2000. 中华人 民共和国国家标准 -饲料

7、中氨基酸的测定 . 5中华人民共和国国家技术 .GB/T 5009124-2003. 中华人民共和国国家标准 -食品中氨基酸的测定 .(收稿日期 :2007-09-11河南畜牧兽医 2007年 (第 28卷 第 10期 综 合 版化钡溶液来检验滤液有无沉淀 , 连同漏斗一起放入 80 干燥箱中烘干 , 将滤纸和沉淀物小心放入 250ml 凯氏烧 瓶中 , 加入 6.4g 催化剂、 20ml 浓硫酸 , 在电炉上消化 , 样 液澄清后继续消煮 2小时 , 取下冷 却 后 加 入 20ml 蒸 馏 水 , 转入 100ml 容量瓶中 , 冷却后用水稀释至刻度 , 摇匀 , 作为试样分解液。同时做空

8、白试验。将半微量蒸馏装置 的 冷 凝 管 末 端 浸 入 装 有 20ml 硼 酸的吸收液和 2滴混合指示剂的锥形瓶内。 蒸汽发生器的 水中应加入甲基红指示剂数滴、 硫酸数滴 , 在蒸馏过程中 保持此液为橙红色 , 否则需补加硫酸。准确移取试样分解 液 1020ml 注入蒸馏装置中 , 小心提起玻璃塞使之流入 反应室 , 同时用蒸馏水冲洗蒸馏装置入口内壁使样品分析 液和冲洗液一并流入反应室 , 迅速将玻璃塞塞好 , 且在入 口处加水密封 , 防止漏气。 蒸馏 4分钟 , 降下锥形瓶使冷凝 管末端离开液面 , 再蒸馏 1分钟 , 用蒸馏水冲洗冷凝管末 端 , 洗液均流入锥形瓶内 , 然后停止蒸馏

9、。蒸馏后的吸收液立即用 0.02mol /L 盐酸标准溶液滴 定 , 溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。称取待测样品 0.51.0g (精确到 0.1mg 于 200ml 烧 杯中 , 加 50ml 蒸馏水 , 用玻璃棒搅拌均匀 , 在电炉上加热 煮 沸 , 加 入 20ml 的 10%硫 酸 铜 溶 液 , 再 加 入 20ml 的 2.5%氢氧化钠溶液搅匀 , 从电炉上取下 , 在室温放置 2小 时 , 然后用倾泻法将样品过滤到滤纸上 , 用少量温水多次 涤烧杯和沉淀物 , 直至洗出液无硫酸根离子 (用 10%氯化 钡溶液来检验滤液有无沉淀 , 连同漏斗一起放入 80 干 燥箱内烘干 , 将滤

10、液和沉淀物小心放入 250ml 凯氏烧瓶 中 , 加入 6.4g 催化剂、 20ml 浓硫酸 , 在电炉上消化 , 样液 澄清后继续消煮 2小时 , 取下放冷后加入 60100ml 蒸馏 水 , 摇匀冷却。同时做空白试验。蒸 馏 后 的 吸 收 液 立 即 用 0.1mol /L 盐 酸 标 准 溶 液 滴 定 , 溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。精确称取 0.2g 硫酸铵代替试样 , 按 5.1或 5.2步骤进 行操作 , 测得硫酸铵含氮量为 (21.190.20 %, 否则应检查 加碱、 蒸馏和滴定各步骤是否正确。称取蔗糖 0.5g , 代替试样 , 按 5.1或 5.2步骤进行空白 测定

11、, 消耗 0.1mol /L 盐酸标准溶液的体积不得超过 0.2 ml 。 消耗 0.02mol /L 盐酸标准溶液的体积不得超过 0.3ml 。 6分析结果的表述真蛋白 (% =100V 1滴定试样时所需标准溶液的体积 , ml ;V 2滴定空白时所需标准溶液的体积 , ml ;C 盐酸标准溶液的浓度 , mol /L ;V 试样分解液的总体积 , ml ;V 试样分解液蒸馏用体积 , ml ;m 试样质量 , g ;0.0140每毫克当量氮的克数 ;6.25氮换算成蛋白质的平均系数。每个试样取 2个平行样进行测定 , 以其算术平均值为 结果。 当真蛋白含量在 25%以上时 , 允许相对偏差

12、为 1%。 当 真蛋白含量在 10%25%之间时 , 允许相对偏差为 2%。 当真 蛋白含量在 10%以下时 , 允许相对偏差为 3%。7关键步骤及注意事项倾泻法过滤洗涤时 , 烧杯中的沉淀物一定要彻底清 洗。室温较低时洗涤用水的温度要稍微高一点 , 以保证烧 杯中的沉淀物彻底转移。过滤时的滤液达到 400ml 后再 用 10%的氯化钡溶液检验滤液是否有沉淀 , 这样可以减少 检验次数。 烘干沉淀时 , 可将滤液倒掉 , 将漏斗和盛放滤液 的容器同时放入干燥箱 , 以免漏斗放置不稳 , 沉淀物遗失。 加入混合催化剂在电炉上消化时 , 要时刻观察样液的颜色 变化 (有些单一饲料中含杂质较多不易观

13、察颜色 , 样液彻 底澄清后再继续消煮 2小时。 半微量法测定真蛋白转移时 要遵循少量多次的原则 , 转移的溶液体积不超过 100ml , 同时 , 还要做到转移彻底。8检测结果比较棉粕 1:真蛋白 42.31%, 粗蛋白 42.91%;DDG :真蛋白 31.10%, 粗蛋白 31.56%;肉松粉 :真蛋白 78.89%, 粗蛋白 79.15%;豆柏 :真蛋白 46.28%, 粗蛋白 46.68%;猪浓缩料 :真蛋白 39.98%, 粗蛋白 41.03%;猪配合料 :真蛋白 16.39%, 粗蛋白 16.66%;棉粕 2:真蛋白 37.30%, 粗蛋白 40.51%;DDG :真蛋白 34.56%, 粗蛋白 37.88%;肉松粉 :真蛋白 75.15%, 粗蛋白 79.85%;猪浓缩料 :真蛋白 36.59%, 粗蛋白 40.69%;猪配合料 :真蛋白 16.39%, 粗蛋白 19.37%;这些数据相差较