盐酸奈福泮及其注射液有关物质的HPLC测定

1、 中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2004, 35(7412毕晓冬 1 , 谢沐风 2*(1.承德颈复康药业集团有限责任公司,河北承德067000;2.上海市药品检验所,上海 200233摘要 :建立了反相高效液相色谱法测定盐酸奈福泮及其注射液的有关物质。采用 ODSC 18色谱柱,流动相为 0.01mol/L 庚烷磺酸钠溶液 (用 1.0%磷酸调至 pH3.5 -乙腈 (6535 ,流速 1.0ml/min,检测波长 210nm。盐酸奈福泮的检测限 为 0.26ng。关键词 :盐酸奈福泮;注射液;有关物质;反相高效液相色谱;测定中图分类号 :TQ

2、460.7+2; O657.7+2 文献标识码 :A 文章编号 :1001-8255(2004 07-0412-03盐酸奈福泮及其注射液有关物质的 HPLC 测定 收稿日期 :2004-03-30作者简介 :毕晓冬(1962,男,工程师,从事药品生产与质量研究。谢沐风(1972,男,主管药师,从事药物质量标准的制订和分析方法学认证的研究。Tel -mail :xiemufeng盐酸奈福泮(nefopam hydrochloride, 1为新型 的非麻醉性镇痛药, 兼有轻度的解热和肌松作用。 化 学结构近似环化苯海拉明,见图 1。由于不具有非 甾体抗炎药的特性,亦非阿

3、片受体激动剂,并对循 环系统无抑制作用,故无耐受性和依赖性,对中、 重度疼痛有效。中国药典 2000版收载了 1原药、片 剂和注射液, 但均无有关物质检查项。 本文建立了 1原药及注射液中有关物质的 RP-HPLC 测定法, 专属 性强,测定简便易行,且国内无相关报道。 1 仪器与试药HP-1100型高效液相色谱仪(包括二极管阵列检测器, 安捷伦公司 。1原药(徐州万和化学工业有限公司,含量 99.3%,批号 020603 ; 1注射液(上海禾丰药业有限公司,规格 1ml 20mg ,批号 030703 。2 方法与结果 2.1 色谱条件的选择 2.1.1 流动相色谱柱 Diamonsil T

4、M ODS C 18柱(4.6mm ×150m m , 5µm ; 流速 1. 0m l /m i n ; 检测波长 210nm ; 柱温 30; 进样量 20µl 。参照文献 13进行流动相的选择试验,结果见 表 1。由此可见,色谱条件 1效果较差,不予采用;色药品质量与分析Preparation and in vitro Dissolution of Gliclazide Sustained-release TabletsLU Jun1 , WU Tao2 , HU Jian-Ping1 , PAN Wei-San 1(1. Dept. of Pharmace

5、utical, School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016;2.Beijing Double-Crane Pharmaceutical Co. Ltd., Beijing 100020A B S T R A C T : The gliclazide s ustained-release tablets were p repared by w etting granulation method using hydroxypropylmethyl cellulose with different v

6、iscosity as carrier and adhesive. The in vitro dissolution of the products was investigatedand compared with Diamicron MR®. The results showed that both had the similar sustained-release property, and the drugrelease pattern was accorded with the first order kinetics.K e y W o r d s : gliclazid

7、e; sustained-release tablets; orthogonal design; in vitro dissolutionfffffffffffffffffffffffffffffffffffffffff中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2004, 35(7 413表 1 不同流动相对 1峰柱效和拖尾因子的影响1峰柱效 201837823762色谱条件123流动相0.3%磷酸 (用三乙胺调至pH3.0 -乙腈 (30 700.01mol/L庚烷磺酸钠溶液 (用1.0%磷酸调至pH3.0 -乙腈 (65 35 0.01mol/L庚烷磺酸

8、钠溶液和15mmol/L磷酸二氢钾溶液 (用1.0%磷酸调至 pH3.0 -乙腈 (65351峰保留时间/min3. 66. 45. 21峰拖尾因子0.7340.9410.927谱条件 3比 2增加了离子效应, 但对 1峰基本无影响, 故采用条件 2。2.1.2 流动相中水相的 pH用 1.0%磷酸将流动相中 0.01mol/L庚烷磺酸钠 溶液分别调至 pH 3.0、 3.5、 4.0,进样测定,结果 见表 2。 由此可见, pH 影响不大,故选用 pH3.5。 2.1.3 检测波长1虽有紫外吸收,但为末端吸收,同时参照文 献 13,选择 210nm 作为检测波长。 2.1.4 溶剂先选用水

9、-乙腈(65 35溶解稀释 1,进样测 定,结果在 1峰处有溶剂干扰峰出现。改用流动相 作为溶剂, 则无干扰峰存在。 2.1.5 供试品溶液浓度的确定(即检测限和最大进样 浓度试验 41用流动相溶解后逐级稀释,进样测得检测限 为 0.26ng ,相当于进样量为 20µl 时,最低检测浓 度为 0.013µg/ml。1用流动相溶解制成高浓度溶液,进样测定,表 2 不同 pH 流动相对 1峰柱效和拖尾因子的影响1峰拖尾因子1.0750.9171.026p H3. 03. 54. 01峰保留时间/min6. 55. 15. 41峰柱效 328336323364结果当进样浓度为 0

10、.525mg/ml时, 1柱效已降至 2259,拖尾因子劣化为 2.710。故拟定该浓度为最 大进样浓度。根据检测浓度和最大进样浓度试验结果,确定 0.2mg/ml为供试品溶液浓度。该浓度为最低检测浓 度的 15000多倍,可完全满足测定需要。 2.2 色谱条件的专属性 2.2.1 未经强破坏由最大进样浓度的色谱图(图 2可见,主峰前 后相邻的杂质峰均能与主峰分离。分别取 1原药和注射液, 加流动相溶解并稀释成 0.2mg/ml的供试品溶液,采用二极管阵列检测器检 测主峰纯度,结果分别为 998.395和 999.909,表明 主峰较纯。见图 3。 中国医药工业杂志ChineseJournal

11、ofPharmaceuticals2004, 35(7 4142.2.2强破坏试验取 1 10mg ,共 6份,分别以下列条件试验:酸破坏 :加 1mol/L HCl 1ml,水浴加热 30min ; 碱破坏 :加 1mol/L NaOH溶液 1ml ,水浴加热 30m in ;高温破坏 :100放置 6h ;氧化破坏 :加 3%过氧化氢溶液 1ml , 50水 浴加热 2h ;光破坏 :强日光下照射 4h ;水解破坏 :加水 20m l ,水浴加热 30mi n 。 分别取上述破坏样品,加流动相溶解并稀释至 50ml ,进样测定。结果杂质和各降解产物均能与主 峰完全分离。主峰纯度分别为 99

12、9.879、 999.991、 999.893、 999.778、 999.683、 999.836,表明本色 谱条件专属性良好。2.3稳定性试验取 1原药和注射液的供试品溶液,分别于配制 即刻和放置 18h 后进样测定,结果主峰峰面积、主 峰面积百分比和杂质峰面积百分比均无明显变化, 表明溶液稳定性良好。2.4有关物质检查分别精密量取 1原药和注射液的供试品溶液适 量,加流动相稀释成 1µg/ml的溶液作为对照溶液。 取对照溶液进样, 调节检测器灵敏度, 使主峰的峰高 约为满量程的 20%。 再分别取上述两种供试品溶液 进样测定,记录色谱图至主成分峰保留时间的 2倍。供试品溶液的色

13、谱图中如显杂质峰,则计算出 各杂质峰峰面积的总和,以不加校正因子的主成分 自身对照法,求得杂质总量。结果表明, 1原药和注射液的杂质总量分别为 0.51%和 0.53%。3讨论3.1 最大进样浓度试验对供试品溶液浓度的确定, 有科学的指导意义, 有了一个 “上限范围” 的已知概 念。 同时, 通过进样量的加大, 观察杂质峰的存在情 况,对色谱条件的选择和专属性的判断,也有一定 的积极意义。3.2本文有关物质的检查采用不加校正因子的主成 分自身对照法,自身对照液浓度设定为供试品溶液 浓度的 0.5%,其 3次连续进样的 RSD 为 0.49%, 满足测定计算的需要。参考文献 :王少华 , 于宝东

14、 , 陈安进 , 等 . 盐酸奈福泮缓释片药代动力学 及生物等效性J . 中国临床药理学与治疗学 , 2002, 7(1 : 57-59.谢 林 , 张晓楠 , 严铭娟 , 等 . HPLC法测定生物样品中盐酸 奈福泮的含量J . 中国药科大学学报 , 2000, 31(5 : 365-367. Aymard G, Warot D, Demolis P, et al. Sensitive determination of nefopam and its metabolite desmethyl-nefopam in human biological fluids by HPLC J . J P

15、harm Biomed Anal, 2002, 30(4 : 1013-1021.谢沐风 , 罗霞萍 , 陈亚美 . 如何建立 HPLC 法测定有关物质 的方法J . 中国药品标准 , 2002, 6(3 : 6-8.1234Determination of Related Substances of Nefopam Hydrochlorideand Its Injection by HPLCBI Xiao-Dong1, XIE Mu-Feng2*(1. Chengde Jingfukang Traditional Chinese Medicine Group Co. Ltd., Chengde 067000;2. Shanghai Institute for Drug Control, Shanghai 200233ABSTRACT :ARP-HPLCmethodfordeterminationofrelatedsubstancesofnefopamhydrochlorideanditsinjection wasestablished.AnODSC 18columnwasusedwiththemobilephaseof0.01mol/Lheptanesodiumsulfonatesolut