不同保存液保存小肠的效果评估

1、    不同保存液保存小肠的效果评估         【摘要】目的评价乳酸林格(LR)液、Euro-Collins (EC) 液、高渗枸椽酸盐嘌呤(HC-A)液和武汉医学院器官1号(MWO-1)液保存猪小肠的效果。方法根据不同保存液将动物随机分成4组，每组又根据保存时间不同分成3个亚组，供肠保存后行自体移植。结果小肠保存10小时后移植，术后3周各组受体的存活率均为100%；保存18小时，LR液组、EC液组、HC-A液组和WMO-1液组受体的存活率分别为60%、100%、80%

2、和100%；保存24小时后，LR液组的移植小肠不能存活，HC-A液组、EC液组和WMO-1液组受体的存活率分别为20%、80%和80%，EC液和WMO-1液保存的小肠组织损伤较轻，肠粘膜的ATP含量及Na+-K+ATP酶的活性高于LR液和HC-A液保存组。结论研究表明保存猪小肠EC液和WMO-1液优于LR液和HC-A液，前者可以有效地保存猪小肠18小时，而LR液和HC-A液只能保存10小时。【关键词】肠，小器官保存组织生存Evaluation of various solutions for porcine small bowel graft preservationLI Yousheng,

3、LI Jieshou, LI Ning, et al.Institute of General Surgery, Nanjing General Hospital of PLA, Nanjing 210002【Abstract】ObjectiveTo study the effects of four solutions, lactate Ringer (LR) solution, Euro-Collins (EC) solution, hyperosmolar citrate adenine (HC-A) solution, and WMO-1 solution, on porcine sm

4、all bowel graft preservation.MethodsThe animals were given various solutions and randomly divided into 4 groups. And each group was redivided into three subgroups based on preservation time (10 h, 18 h, and 24 h). After preservation, the porcine segmental small bowel autotransplantation was performe

5、d.ResultsAfter the small bowel preservation for 10 h, on postoperative day 21 the recipient survival rate was 100% in all groups. After the small bowel preservation for 18 h, the recipient rate was 60% (LR), 100% (EC), 80% (HC-A)，and 100% (WMO-1). After the small bowel preservaton for 24 h, no anima

6、ls were survived more than 21 days in LR group, in HC-A, EC and WMO-1 groups the recipient survival rate was 20%, 80%, and 80%, respectively. Intestinal mucosal ATP level and Na+-K+ATPase activity were higher in EC and WMO-1 groups than in LR and HC-1 groups.ConclusionSmall bowel grafts could be eff

7、ectively preserved for 10 h by the LR and HC-A, and for 18 h by EC and WMO-1 solutions.【Key words】Intestine, smallOrgan preservationTissue survival本研究通过对比4种保存液保存小肠的效果，从中筛选出适合临床小肠移植要求的保存液。材料与方法一、实验动物：白色杂种猪，体重18.522.5 kg，雌雄不限，术前24小时禁食，自由饮水。二、手术方法及供肠保存方法：采用自体节段性小肠移植模型，解剖出供应回肠末端的肠系膜动、静脉，切除待移植的小肠及血管，动脉插管

8、，用4保存液灌洗，灌洗压力为75.6 mmHg，灌洗时间20分钟，用液量400500 ml。以5 g/L的甲硝唑溶液灌洗肠腔。经上述处理的离体小肠置入不同的保存液中，按设计要求的时间保存后行自体移植。移植小肠为末端回肠，长约200 cm，行腹壁Thiry-Vella造口。三、保存液及实验分组：选用的4种液体为乳酸林格(LR)液、Euro-Collins(EC)液、高渗枸橼酸嘌呤(HC-A)液和武汉医学院器官1 号(WMO-1)液1。LR液、EC液、WMO-1液根据配方由本院制剂中心配制，HC-A液由上海市中心血站提供。实验分组见表1。四、观察指标：观察移植术后3周受体的存活率。移植术后自肠造口

9、在内镜直视下采取肠粘膜，行常规病理组织学检查。采用高压液相色谱法测定肠粘膜内的磷酸腺苷含量(ATP，ADP，AMP)，计算磷酸腺苷总量(TAN)，TAN=ATP+ADP+AMP。肠粘膜Na+-K+ATP酶的活性测定采用Zemelman法。表1实验分组及移植术后3周受体生存率组别保存10小时保存18小时保存24小时生存率生存率生存率LR液组5/5(100%)3/6(60%)0/5(0%)*EC液组5/5(100%)5/5(100%)4/5(80%)HC-A液组5/5(100%)4/5(80%)1/5(20%)WMO-1液组5/5(100%)5/5(100%)4/5(80%)  

10、;   注：*与EC液组和WMO-1液组相比，P0.05 表2肠粘膜Na+-K+ATP酶活性(mol.mg-1.h-1)组别正常小肠保存10小时保存18小时保存24小时保存后术后0.5小时保存后术后0.5小时保存后术后0.5小时LR液组15.15±3.7112.30±2.478.29±2.0913.74±3.455.79±1.511.29±2.591.15±0.47*EC液组16.16±2.5813.96±1.459.23±3.4713.81±2.956.89

11、77;2.6212.34±3.494.27±1.34HC-A液组14.74±1.8615.30±3.729.79±2.1512.46±1.785.79±1.6911.95±2.962.92±1.39*WMO-1液组13.49±3.9212.46±3.079.34±1.2912.29±3.456.03±1.2712.34±2.455.06±1.27     注：*与EC液组和WMO-1液组相比，P0

12、.05；*与EC液组和WMO-1液组相比，P0.01 结果有6只动物因血管吻合失败而摒除在研究之外，每组实验观察动物数均为5只。移植术后3周受体的存活率见表1，术后存活率为100%的最长有效保存时间，LR液，HC-A液为10小时，EC液组、WMO-1液为18小时。小肠保存10小时，各组小肠移植术后组织结构均能恢复正常。LR液、HC-A液保存18小时后移植，术后3周移植小肠的粘膜结构不能恢复正常，而EC液、WMO-1液组的小肠粘膜结构正常。保存24小时后移植，各组移植小肠的组织结构均不能恢复正常。LR液保存10小时的肠粘膜内ATP、TAN的含量分别为(0.89±0.09) nmol/克

13、湿组织和(1.56±0.05) nmol/克湿组织，仅为正常小肠粘膜的52.7%和70.3%(P0.05)；EC液、WMO-1液和HC-A液组的ATP、TAN含量与LR液组相近。LR液保存24小时后，肠粘膜的ATP、TAN含量分别为正常小肠的7.7%和14.0%(P0.01)，而EC液组的ATP、TAN含量分别为LR液组的315.4%和216.3%(P0.01)，HC-A液组为LR液组的107.7%和103.2%(P0.05)，WMO-1液组为LR液组的307.7%和271.0%(P0.01)。低温保存后小肠粘膜的Na+-K+ATP酶活性与正常小肠无差异，再灌注后则明显降低，保存24

14、小时后再灌注0.5小时，EC液和WMO-1液组的肠粘膜液中Na+-K+ATP酶活性是LR液组的371.3%和440.0%(P0.01)，是HC-A液组的146.2%和173.3%(P0.05)，见表2。讨论低温保存器官的能量物质含量与移植器官的生存能力呈正相关，本研究也表明肠粘膜的ATP、TAN含量与移植小肠的活力密切相关。有报道器官低温保存后其Na+-K+ATP酶活性降低，但本研究结果表明低温保存时肠粘膜Na+-K+ATP酶活性与正常小肠相似，而移植术后0.5小时肠粘膜的Na+-K+ATP酶活性明显降低，与Helou等2的研究结果相同，其原因可能是由于肠粘膜Na+-K+ATP酶主要位于绒毛尖

15、端，再灌注时随着绒毛的坏死脱落，Na+-K+ATP酶活性降低。Todo等的动物实验表明，UW液保存24小时的小肠组织损伤较LR液、EC液保存小肠为重，花生四烯酸和自由基生成较多3，本研究采用猪为实验对象，结果表明，保存10小时，LR液，HC-A液、EC液和WMO-1液的效果相似，而保存时间超过18小时时，LR液和HC-A液的保存效果不如EC液和WMO-1液。WMO-1液含有能量物质(ATP)及微量的Ca2+，研制者认为ATP可以为保存器官提供能量，微量钙具有稳定细胞膜的作用1。本研究的结果表明，用WMO-1液保存小肠，其粘膜的ATP及TAN含量并不高于EC液组，可能与外源性ATP不能为组织直接

16、利用有关，这是由于外源性ATP以ATP形式给入不易为组织细胞所摄取。新研制的保存液(如UW液)均不含有Ca2+，这是由于Ca2+参与细胞缺血再灌注损伤，WMO-1液中Ca2+能否稳定细胞膜尚需探讨。EC液保存小肠组织损伤较轻，保存小肠24小时，肠粘膜的ATP、TAN含量显著高于LR液和HC-A液。以EC液保存小肠18小时后移植，术后3周动物的存活率为100%，若将保存时间延长至24小时，则术后的存活率降至80%。EC液和WMO-1液保存的小肠，其粘膜的Na+-K+ATP酶的活性和ATP、TAN的含量无差异。本课题为国家自然科学基金资助项目作者单位：李幼生黎介寿李宁江志伟赵允召李南云刘放南210002南京军区南京总医院全军普通外科研究所参考文献1顾湘君，朱文慧，汪素兰，等. 自制WMO-1号液保存狗肾48、72小时的实验研究. 中华器官移植杂志，1984，5：15-17.2Helou C, Seguo AC, Dos S, et al. Evaluation of human kidney viability during cold storage. Renal Fail, 1993, 15:85-