实验一.培养基的制作

1、1培养基的制备及灭菌 2从土壤中分离和纯化微生物 3细菌染色及形态观察 4放线菌、酵母菌和霉菌形态观察 5微生物显微计数和大小测量 6E.coli生长曲线的测定 1 科学、合理安排实验教学内容科学、合理安排实验教学内容UVL7细菌的生理生化反应 8环境因素对微生物生长的影响 9微生物的诱变育种 产淀粉酶菌株的分离纯化产淀粉酶菌株的分离纯化12-1312-13每人任每人任选选6 6课时课时水和饮料中细菌学检查水和饮料中细菌学检查食用真菌的采集、分离和培养食用真菌的采集、分离和培养抗药性突变株的筛稳定抗药性突变株的筛稳定1培养基的制备及灭菌 2从土壤中分离和纯化微生物 实验一实验一 培养基的制备和

2、灭菌培养基的制备和灭菌1.1 1.1 掌握培养基配制的原理。掌握培养基配制的原理。1.2 1.2 通过对牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马铃薯培通过对牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马铃薯培 养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。1.3 1.3 了解高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。了解高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。 1 实验目的实验目的2.1 2.1 什么是培养基什么是培养基, ,一般培养基应具备哪些营养要素一般培养基应具备哪些营养要素? ?2.2 2.2 培养基有哪些类型培养基有哪些类型, ,为什么培养不同的微生物需要的培养为什

3、么培养不同的微生物需要的培养 基不同基不同, ,培养基为什么要调节培养基为什么要调节pH pH 值值, ,配制好的培养基为什么配制好的培养基为什么 要立即灭菌要立即灭菌? ?2.3 2.3 高压蒸汽灭菌的原理是什么高压蒸汽灭菌的原理是什么? ?2 实验原理实验原理(通过了解下列问题来掌握实验原理通过了解下列问题来掌握实验原理)3 3 材料与方法材料与方法3.1.1 药品：待配各种培养基的组成成分，琼脂，待配各种培养基的组成成分，琼脂，1 mol/L 1 mol/L NaOH NaOH 溶液、溶液、1 mol/L HCl1 mol/L HCl溶液。溶液。3.1.2 仪器：天平，高压蒸汽灭菌锅天平

4、，高压蒸汽灭菌锅3.1.3 玻璃器皿：移液管，试管，烧杯，量筒，锥形瓶，培养移液管，试管，烧杯，量筒，锥形瓶，培养皿，玻璃漏斗等。皿，玻璃漏斗等。3.1.4 其它物品：药匙，称量纸，药匙，称量纸，pHpH试纸，记号笔，棉花，纱试纸，记号笔，棉花，纱布，线绳，牛皮纸，报纸等。布，线绳，牛皮纸，报纸等。3.1 3.1 实验器材实验器材3.2 3.2 方法方法3.2.1 3.2.1 称量。根据培养基的配方配制称量。根据培养基的配方配制400 400 mL 培养基，用托盘天平培养基，用托盘天平按比例称取牛肉膏按比例称取牛肉膏? g? g，蛋白胨，蛋白胨? g? g，NaCl ? g, .NaCl ?

5、g, .。牛肉膏用玻。牛肉膏用玻璃棒挑取，放在培养皿中称量，再用热水熔化后倒入烧杯中；蛋白璃棒挑取，放在培养皿中称量，再用热水熔化后倒入烧杯中；蛋白胨易吸潮，取出药品后应迅速盖上瓶盖。胨易吸潮，取出药品后应迅速盖上瓶盖。3.2.2 3.2.2 溶化。在烧杯中加入溶化。在烧杯中加入? mL? mL水，用玻璃棒搅匀，然后在电炉水，用玻璃棒搅匀，然后在电炉上加热使其溶解，待溶液即将沸腾时，加入琼脂？上加热使其溶解，待溶液即将沸腾时，加入琼脂？g g，边加热边，边加热边搅拌，使其熔化搅拌，使其熔化 。药品完全溶解后，补充水到。药品完全溶解后，补充水到? mL? mL。3.2.4 3.2.4 过滤。用四

6、层沙布过滤，取其滤液。（如果培养基较澄清过滤。用四层沙布过滤，取其滤液。（如果培养基较澄清，则无需过滤。），则无需过滤。）3.2.3 3.2.3 调节调节pHpH。先用精密。先用精密pH pH 试纸测量培养基的原始试纸测量培养基的原始pHpH为？，然为？，然后用滴管向培养基中逐滴加入后用滴管向培养基中逐滴加入1 mol/L NaOH1 mol/L NaOH溶液，边滴加边搅拌溶液，边滴加边搅拌，并随时用，并随时用pH pH 试纸测定，直至试纸测定，直至pHpH达到？。（使用时注意节约达到？。（使用时注意节约pHpH 试纸，每次撕一小节进行测定，试纸不能接触比色纸）试纸，每次撕一小节进行测定，试纸

7、不能接触比色纸）3.2.5 3.2.5 分装。将培养基先分装？支试管，分装的高度为试管高度分装。将培养基先分装？支试管，分装的高度为试管高度的的1/51/5，其余培养基分装到？个三解烧瓶中，分装量不超过三角，其余培养基分装到？个三解烧瓶中，分装量不超过三角烧瓶容积的烧瓶容积的1/2 1/2 。分装时注意培养基不能沾到瓶口或管口。分装时注意培养基不能沾到瓶口或管口。（教师示范）（教师示范）3.2.6 3.2.6 加塞、包扎。在装有培养基的试管口或瓶口塞上棉塞，阻加塞、包扎。在装有培养基的试管口或瓶口塞上棉塞，阻止微生物进入培养基。将同组试管共？支用报纸包扎，并用麻绳止微生物进入培养基。将同组试管

8、共？支用报纸包扎，并用麻绳捆扎。三角瓶外用报纸包扎后，用麻绳扎一活结。捆扎。三角瓶外用报纸包扎后，用麻绳扎一活结。（教师示范）（教师示范）3.2.7 3.2.7 灭菌。将上述培养基以灭菌。将上述培养基以0.1 MPa,121,20 min 0.1 MPa,121,20 min 高压蒸高压蒸汽灭菌。汽灭菌。（教师分组讲解灭菌锅的结构、使用方法和注意事项）（教师分组讲解灭菌锅的结构、使用方法和注意事项）3.2.8 3.2.8 搁置斜面。将灭菌的试管培养基冷至搁置斜面。将灭菌的试管培养基冷至5050左右，搁置成左右，搁置成斜面，斜面长度略小于试管总长度的斜面，斜面长度略小于试管总长度的1/21/2。（教师示范）（教师示范）3.2.9 3.2.9 无菌检查。取灭菌的培养基放入无菌检查。取灭菌的培养基放入3737培养箱中培养箱中24 h,24 h,观观察是否有菌产生，以检查灭菌是否彻底。察是否有菌产生，以检查灭菌是否彻底。实验报告实验报告1 1 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法（注意语用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法（注意语言简洁、准确、突出操作的依据、使用的仪器、材料的数言简洁、准确、突出操作的依据、使用的仪器、材料的数量、以前实验中末使用的特殊材料和注意事项。量、以前实验中末使用的特殊材料和注意事项。2 2 实验结果。可用文字或表格描述，注意培养基的名称、实验结果。可