人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立

1、人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立动物：c()裸小鼠，鼠龄 6 1 0 周，体重 l5 25 g ，雄性。饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内，室内恒温、恒湿，定期消毒。笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌，并在无菌条件下适时更换。方法：收集培养的 823 细胞 (癌细胞在含 10% 小牛血清的 1640 培养液中，于 2 恒温孵育箱中培养，常规传代。 )在细胞培养至对数期时，用 1640 制成约 2 ×l0 7 个细胞悬液，取 02(4x106个 823细胞 / 只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下， 每组接种 3只鼠，当皮下移植瘤长至直径为 l 3 左右时取出移肿瘤（大约在 10

2、d左右），及时放入含无血清培养液的平皿中， A 再在超净工作台内修剪肿瘤组织，去除脂肪，结缔组织及坏死肿瘤组织，并用无血清培养液洗涤2 次，将瘤组织切成约 l ×l ×2 的小块，加入适量的备用。以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠，常规消毒背部肩胛区，（切开局部皮肤）用无菌套管针抽吸准备好的2 3 大小瘤块，将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下， 建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。作鼠间传代(2 只代 )。移植瘤生长特性：胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节，直径约1 5，质地较硬，在以后的几天中，上述皮下结节没有继续增大，此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期 (7-10d 左

3、右 )。随后，裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长 体积逐渐增大。大概 (25-30d) 传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。A 具体操作：1 一般要求需在无菌条件下进行。 可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。动物处死后，用新吉尔灭 (1 1000) 或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取， 对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。瘤块污染常是接种失败的主要原因， 应予注意在高温季节操作时，应注意降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。常用腋下部位皮下作为实体瘤接种部位； 肌肉接种则用大腿肌肉；腹水型接种于腹腔。2 瘤块的制备接种用的瘤块应选择接种后 7 10d 、肿瘤生长

4、旺盛且无溃破而动物健康较好的瘤源动物，颈椎脱臼，固定于蜡板上，用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤 (消毒面应尽可能大一些 )。切开皮肤、选择生长良好无坏死或液化的瘤组织。在无菌平皿内，剪成 2 33 的小块。平皿内放置少许消毒的生理盐水缓冲液或其它营养液， 以保存瘤块。平皿应放置在冰块上。用无菌套管针抽吸或向套管针内塞进一小瘤块，接种于同种受体动物右前肢腋窝皮下 (接种部位皮肤应先用碘酊、酒精消毒 )。接种操作时间应尽可能的缩短，从一个瘤块所取的材料一般应在 30 内接种完。3 瘤细胞悬液的制备如每次需要接种的动物数量较多时，可用瘤细胞悬液接种。 具体方法为，在无菌操作下取瘤块，除去坏死组织，将数个

5、瘤块混合，剪成小块，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放入无菌容器内，加生理盐水适量稀释成 1 3 1 4 的瘤细胞悬液。 容器置冰块上， 用空针抽吸，每次抽吸前应将细胞混匀。每个动物接种0.2 。整个操作应在30 内完成。停止给予受试物之次日 (或停止给予受试物后 1 5d) 处死动物，先称体重，后解剖皮下瘤块，称重。如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于 1g 或 20% 鼠的瘤重小于 400 ，大白鼠肿瘤平均重量小于 2g ，表示肿瘤生长不良。在试验期间给受试物组鼠死亡超过 20% ，或平均体重 (去瘤后 )下降 (自身对照 )超过 15% 者，表示受试物的毒性反应。应当减少剂量重新试验。取平衡饲养

6、1 周的裸鼠若干只，于第 3d 将瘤细胞悬液按 0.5 只(含瘤细胞 7.5X10e 个)接种于裸鼠左侧肋部皮下。823 单细胞悬液的制备：将 823 细胞，用一 1640 培养基培养基 (7.2 ，含 10% 胎牛血清，青霉素 100 ，链霉素 100) ，于 37 度， 502 ，饱和湿度的 C02 培养箱中培养， 23d 传代一次。该细胞贴壁生长，呈多角形。实验时取对数生长期细胞，用 0.25% 胰蛋白酶消化后机械吹打成单细胞悬液， 1500 离心，弃上清液，用适量配制成细胞浓度分别为 1.5x1) 悬液， 0.4% 台盼蓝染色法测细胞活力在 95% 以上。18 号的硬脊膜外穿刺针，把外面的套管针部分磨平磨尖（为什么要磨，看到实物你就明白了） ，里面的实体针不用磨。一次用 6 根左右就可以了，先用一个不锈钢饭盒之类的东西作一个手术包，把所有相关的手术器械（剪刀镊子什么的，包括接种针）都装进去，盖上盖子， 8 层纱布包裹， 121 度，半个小时。操作的时候在超净台里面进行无菌操作，