教学课件-DNA的粗提取与鉴定-申盼

1、【新闻链接】【新闻链接】今年今年8 8月，一则新闻一经播出，震惊全国。月，一则新闻一经播出，震惊全国。甘肃白银系列杀人案告破甘肃白银系列杀人案告破和静高级中学和静高级中学 申盼申盼 课题课题1 1 DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定学习目标学习目标1)1)通过尝试对植物或动物组织中的通过尝试对植物或动物组织中的DNADNA进行粗提取，进行粗提取，了解了解DNADNA的物理化学性质。的物理化学性质。2 2）概述）概述DNADNA的粗提取和鉴定的原理。的粗提取和鉴定的原理。3 3）通过对）通过对DNADNA的粗提取实验过程的设计及操作，锻的粗提取实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养

2、实事求是的科学态度。炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。 学习学习重点重点：DNADNA的物理化学性质。的物理化学性质。 学习学习难点难点：粗提取的：粗提取的DNADNA的除杂。的除杂。导学案反馈导学案反馈组别组别A+A+A-A-B B得分得分1 13 32 21 1分分2 25 51 10 0分分3 35 51 12 2分分4 45 51 12 2分分5 54 41 11 10 0分分6 65 51 12 2分分7 74 41 12 2分分8 86 63 3分分9 94 41 12 2分分实验思路实验思路1 1）DNADNA应应从哪提取？从哪提取？2 2）怎样将怎样将DNADNA与细胞

3、中的其他物质分离？与细胞中的其他物质分离？3 3）怎样鉴定提取物是否为怎样鉴定提取物是否为DNADNA？ DNA DNA的溶解性的溶解性当当NaClNaCl浓度为浓度为0.14mol/L0.14mol/L时，时，DNADNA的溶解度的溶解度最小最小，浓度为浓度为2mol/L2mol/L时，时，DNADNA的溶解度的溶解度最大最大。利用这一原理，可以使利用这一原理，可以使DNADNA在盐溶液中溶解或析出。在盐溶液中溶解或析出。DNADNA的特性的特性2mol/L DNA DNA不溶于酒精不溶于酒精细胞中某些蛋白质溶于酒精细胞中某些蛋白质溶于酒精 DNA DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液将将DN

4、ADNA与蛋白质进与蛋白质进一步分离一步分离 （提纯）（提纯）DNADNA的特性的特性 DNA DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质水解蛋白质 对对DNADNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080 的高温的高温 而而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对但对DNADNA没有影响没有影响DNADNA的特性的特性 DNA DNA的鉴定的鉴定沸水浴沸水浴蓝色反应蓝色反应DNADNA + + 二苯胺二苯胺DNADNA的特性的

5、特性（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取讨论：讨论： 什么样的实验材料更适合提取什么样的实验材料更适合提取DNA?DNA?实验设计实验设计洋葱洋葱鸡血鸡血哺乳动物的红细胞哺乳动物的红细胞香蕉香蕉DNADNA含量相对较高、材料易得含量相对较高、材料易得（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液讨论：讨论：1 1）动物细胞如何破碎）动物细胞如何破碎? ?其原理是？其原理是？2 2）破碎植物细胞时，加入洗涤剂和食盐的作用是？）破碎植物细胞时，加入洗涤剂和食盐的作用是？3 3）此步骤获得的滤液可能含有哪些细胞成分？此步骤获得的滤液可能含有哪些细胞成分？实验设计实验设计蒸馏

6、水涨破，渗透作用蒸馏水涨破，渗透作用洗涤剂：瓦解细胞膜洗涤剂：瓦解细胞膜 食盐：溶解食盐：溶解DNADNADNADNA、蛋白质、多糖、蛋白质、多糖、RNARNA等等（三）（三）去除滤液中的杂质去除滤液中的杂质讨论：讨论：1 1）滤液中的杂质主要是？）滤液中的杂质主要是？2 2）为什么反复地溶解与析出）为什么反复地溶解与析出DNADNA， 能够去除杂质？能够去除杂质？3 3）方案二与方案三的原理有什么不同）方案二与方案三的原理有什么不同？实验设计实验设计蛋白质蛋白质 方案二：蛋白酶分解蛋白质，不分解方案二：蛋白酶分解蛋白质，不分解DNADNA； 方案三：方案三：DNADNA耐高温而蛋白质不耐高温

7、。耐高温而蛋白质不耐高温。用用高高盐浓度的溶液盐浓度的溶液溶解溶解DNADNA，能除去在高盐中不能溶解的，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用杂质；用低低盐浓度盐浓度使使DNADNA析出析出，能除去溶解在低盐溶液中，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂质。溶解度不同的多种杂质。（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定思考：思考：1 1）如何从滤液中析出）如何从滤液中析出DNADNA？2 2）纯的）纯的DNADNA应该是什么颜色？应该是什么颜色？3 3）如何鉴定）如何鉴定D

8、NADNA分子？应注意什么？分子？应注意什么？实验设计实验设计白色丝状物白色丝状物用二苯胺试剂，沸水浴；做空白对照实验。用二苯胺试剂，沸水浴；做空白对照实验。利用冷酒精利用冷酒精实验操作实验操作制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静置或离心加柠檬酸钠，静置或离心破碎细胞，释放破碎细胞，释放DNA 加蒸馏水，同方向快速加蒸馏水，同方向快速搅拌搅拌，过滤过滤破坏细胞膜、核膜等。破坏细胞膜、核膜等。去除杂质去除杂质 加入加入2mol/L NaCl，同方向缓慢，同方向缓慢搅拌搅拌，过滤过滤 加蒸馏水至加蒸馏水至NaCl 浓度为浓度为0.14mol/L，同方向缓慢，同方向缓慢搅搅 拌拌，析出，析出D

9、NA，过滤过滤将粘稠物溶解到将粘稠物溶解到2mol/L NaCl溶液中，同方向缓慢溶液中，同方向缓慢 搅拌，过滤搅拌，过滤 除去细胞质中的大部分杂质。除去细胞质中的大部分杂质。DNA析出析出 与等体积与等体积95冷酒精混合，同方向缓慢冷酒精混合，同方向缓慢搅拌，搅拌，析出析出 白色丝状物白色丝状物除去核蛋白等。除去核蛋白等。DNA鉴定鉴定 加入加入2mol/L NaCl溶液，溶液，搅拌搅拌。再加入二苯胺，沸水浴。再加入二苯胺，沸水浴以鸡血为例以鸡血为例实验小结实验小结1 1）共有）共有“四次过滤，四次过滤，两两次析出，次析出， 六次搅拌六次搅拌”2 2）加入）加入“两两次蒸馏水，次蒸馏水，三三

10、次次NaClNaCl 溶液，溶液，一一次酒精次酒精”实验展示实验展示加入洗涤剂和食盐，充分搅拌、研磨加入洗涤剂和食盐，充分搅拌、研磨以以香蕉香蕉为实为实验材料，提验材料，提取取DNADNA实验展示实验展示香蕉的香蕉的DNADNA鉴鉴定结果定结果香蕉香蕉DNADNA对照组对照组实验展示实验展示以以洋葱洋葱为实为实验材料，提验材料，提取取DNADNADNADNA断裂，断裂，无法形成絮状沉淀无法形成絮状沉淀实验展示实验展示香蕉、洋葱的香蕉、洋葱的DNADNA鉴定结果鉴定结果对比对比香蕉香蕉DNADNA洋葱洋葱DNADNA对照组对照组课堂巩固课堂巩固1.1.下列哪项不宜选作下列哪项不宜选作DNADNA

11、提取材料的是提取材料的是( )( )A.A.洋葱表皮细胞洋葱表皮细胞 B.B.鲜豌豆种子鲜豌豆种子C.C.人的成熟红细胞人的成熟红细胞 D.D.猪肝猪肝2.2.实验中实验中NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2mol/L2mol/L和和0.14mol/L0.14mol/L，分别对，分别对DNADNA有何影响有何影响? ? 前者是溶解前者是溶解DNADNA，过滤除去不溶的杂质，过滤除去不溶的杂质 后者是使后者是使DNADNA析出，过滤除去滤液中的杂质析出，过滤除去滤液中的杂质C C课堂巩固课堂巩固3.3.在在DNADNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是蒸馏水的作用分别是( )( )。A.A.稀释血液，冲洗样品稀释血液，冲洗