常用培养基的配方

1、伊红美蓝培养基原理一般用来鉴定大肠杆菌。 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下： 制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用

2、。 用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。 取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 将划线后的培养皿倒置37温箱中培养1824小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。 配置方法蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 2030g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml 储备培养基的制备 先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.27.4。趁热用

3、脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 制法 将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至5055，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。麦康凯培养基原理1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。配置方法蛋白胨 17g脙胨3g猪胆盐(或牛、羊胆盐)    5g氯化钠 5g琼脂 17g蒸馏水1000mL乳糖10g

4、0.01%结晶紫水溶液      10mL0.5%中性红水溶液     5mL麦康凯-制法 1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121高压灭菌15min备用。2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至5055时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后    倾注平板。注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 吲哚试验吲哚（indol）试验 有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解

5、培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。LB培养基配方胰化蛋白胨 1g      酵母提取物  0.5g      NaCl  1g      琼脂  1.5-2g     水  100mlLB培养基-LB培养基条件L

6、B培养基-固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55的水浴中，待培养基温度降到55时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4保存，一个月内使用。 牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂） 配方蛋白胨10g；牛肉膏3g ；氯化钠5g；琼脂1520g；蒸馏水

7、1000mL；制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.27.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121高压灭菌15min。注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。甲基红试验甲基红试验-化学属性甲基红（Methyl Red）试验 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。 甲基红试验-试验方法挑取新的待试纯

8、培养物少许，接种于通用培养基，培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）35天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂12滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果。 甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.46.0，其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强黄色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。尿素酶某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35孵育1824h，观

9、察结果。红色为阳性，不变为阴性。主要用于肠杆菌科变形杆菌属、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。明胶液化明胶液化 gelaune liquefaction指细菌把明胶胶分解成液状的现象。 明胶液化-它的特征这种能力可因细菌种类不同而有显著差异，因此很早以来就被用来作为鉴别、测定细菌的一种特征。 明胶液化-适应范围葡萄球菌属、变形菌属、芽孢杆菌属均具有液化能力，而大肠杆菌就无这种液化能力。由于明胶是在热水中溶解胶原（collagen）而成的蛋白质，因此，它是由产生于体外的蛋白酶进行分解的。用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象。VP试验VP试验-试验简介英

10、VP test微生物检验中常用的生化反应之一。某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称VP（+）反应。 VP试验-试验方法1）OMeara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加OMeara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管12min，静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在4850

11、76;C水浴放置2h后判定结果者。 2）Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°C萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动25min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。 3）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能

12、使用。 本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。生理盐水 生理盐水就是0.9%的氯化钠水溶液,因为它的渗透压值和正常人的血浆、组织液都是大致一样的，所以可以用作补液（不会降低和增加正常人体内钠离子浓度）以及其他医疗用途，也常用作体外培养活组织、细胞。氯化钠：俗称盐、食盐。菌注射用水一般使用来溶解难溶于生理盐水药物使用的， 生理盐水就是我们静脉点滴常用的0.9的氯化钠注射液，外用具有一定的杀菌消毒作用。所以它们不是一样的概念. 。人体细胞生活中所处液体环境的浓度配方： 哺乳类

13、需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。血琼脂平板 制法：取营养琼脂（PH76），加热使其溶解待冷至45-50，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 血琼脂平板-用途用途：1 一般棉拭子均接种此培养基。2尿液，脓液3分离细菌标本用。胰蛋白胨胰蛋白胨水 成分胰蛋白胨10g；蒸馏水1000mL；pH7.0 制法将上述成分溶解，校正pH。分装试管，121高压灭菌15min。  BairdParker氏培养基成分 胰蛋白胨10g ；牛肉膏5g ；酵母膏1g ；丙酮酸钠10g ；甘氨酸12g ；氯化锂(LiCl·6H2O)5g ；琼脂20g ；蒸馏水950mL ；PH7.5 。增菌剂的配法 30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。 制法 将各成