肝癌血行相关因子及检测意义

1、肝癌血行相关因子及检测意义山东中医药大学2006级研究生刘奎 指导者 徐瑞荣【摘要】早期微转移是肝癌难以有效诊治和病死率高的主要原因之一，因此早期检测出外周血中的肿瘤细胞，对及早有效的综合治疗具有重要的临床意义。血行微转移是肝癌的主要转移途径，但血行微转移的诊断仍然存在困难，主要是没有找到能准确反映早期微转移的肿瘤相关因子。近年来发现Glypican-3 mRNA、OPN、AFPmRNA、AFP-L3与肝癌血行微转移有密切的关系，而传统检测肝癌的标志物AFP、AFU、GGT2、AP、AIF、ALD-A、5-NPDV、VEGF等依然在肝癌的检测中有着重要意义。现将目前肝癌血行检测的主要相关因子做

2、一概述。【关键词】 肝癌 血行相关因子 检测意义Factors related primary carcinoma of the liver blood test and significanceLiu Kui Guide XU Ruirong【Abstract】Early micro-metastasis is the effective diagnosis and treatment of primary carcinoma of the liver and one of the main causes of high mortality, early detection of the t

3、umor cells in peripheral blood of the early and effective treatment has important clinical significance. Blood-hepatocellular carcinoma metastasis is the main way to transfer, but the transfer of blood-diagnosis there are still difficulties, mainly find is not accurately reflect the early transfer o

4、f tumor-associated factor. In recent years found Glypican-3 mRNA, OPN, AFPmRNA, AFP-L3 blood and primary carcinoma of the liver micrometastases in a close relationship, and the traditional markers of primary carcinoma of the liver detection AFP, AFU, GGT2, AP, AIF, ALD-A, 5 - NPDV, VEGF, such as in

5、primary carcinoma of the liver detection still has important significance. Presently makes the present primary carcinoma of the liver blood line of examinations main multiple coefficient of correlation an outline.【Key words】primary carcinoma of the liver Blood related factors Examination significanc

6、e1. Glypican-3 mRNA1.1 Glypican-3 mRNA的概述 Glypican-3即磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因，是一种膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPG)， Glypican-3结构特殊，影响多种生物效应分子，对组织、器官的发生、发展起关键的调节作用，几乎在所有人类肝癌和黑色素瘤细胞上表达，而在胎盘和胎肝以外的正常组织不表达。Glypican-3在肝癌中过表达,而在成人正常组织（如肝、肺、肾、心、脑、脾、胃、小肠、大肠、睾丸、膀胱及胰腺中亦均不表达1）、癌旁组织、肝炎、肝硬化组织中仅低表达或不表达。Zhu Z W等2证实Glypican-3 mRNA在正常肝组织、肝灶性结节

7、状增生、肝硬化中低表达或不表达；相反在研究的30例肝癌患者中有20例显著表达，在5例中适度表达；Glypican-3在肝癌患者中相对于在正常肝组织中的表达平均增加有显著意义。Glypican-3被认为是肝癌表达比较特有的基因。1.2 Glypican-3 mRNA的检测意义 柏凯等3通过检测原发性肝癌患者外周血Glypican-3，结果发现外周血Glypican-3 mRNA检出率与肿瘤直径、癌结节数目、临床TNM分期、门静脉癌栓、肝外转移明显相关（P 0.05）。、期患者阳性率36% 远较、期患者阳性率76%低（ P 0.05），说明原发性肝癌早期即表现为全身性疾病，可以发生肿瘤细胞的血液性

8、播散。随着临床分期的增加，外周血单核细胞Glypican-3 mRNA检出率有增高的趋势，提示动态观察外周血中Glypican-3 mRNA 表达有助于判断肝癌患者的预后。这和Nakano M等4报道的即使直径2 cm的高分化肝细胞癌，肿瘤细胞也可能侵蚀血管壁形成血行微转移的结果基本相符。Glypican-3 mRNA在门静脉癌栓的患者中表达高达90%，肝外转移患者的外周血单核细胞Glypican-3 mRNA 100%阳性，表明随着肿瘤逐渐进展，发生转移的可能性增大。唐浩等5在大鼠肝细胞癌模型中得出：外周血Glypican-3 mRNA的阳性率与肝癌微转移的发生有明显的相关性,且高于AFP

9、mRNA的阳性率.有望成为肝癌微转移新的诊断指标。DING Guanghui等6报道:41例AFP阴性肝癌中有30例为Glypican-3 mRNA阳性,表达率为73.17。因此Glypican-3 mRNA在肝癌的早期发现、转移及预后中有重要价值，并可望成为肝癌特别是AFP阴性时肝癌的一个新的基因标志。2. OPN2.1 OPN的概述OPN即骨桥蛋白（osteopornin），是一种分泌性磷酸化糖蛋白，以多种亚型存在于细胞内外，结构上它与多种基质蛋白相似，功能上它具有细胞因子的特点，参与了机体多种病理过程。OPN含有特异的与细胞黏附有关的RGD(Arg-Gcy-Asp)序列，通过与其受体整合

10、素、CD44等结合来促进细胞的趋化黏附和迁移，从而介导肿瘤细胞的侵袭转移7。OPN及其相关分子与肿瘤转移的关系密切.通过转录因子与OPN启动子的应答元件(RAE序列、Tcf-4结合序列、AP-1结合序列、RE-1序列等)相互作用,调控OPN的表达。OPN通过促进肿瘤细胞黏附、激活生长因子受体、促进血管生成等多个环节参与肿瘤转移过程8。2.2 OPN的检测意义OPN参与了包括肝癌在内的多种恶性肿瘤的增殖和转移，满晓波等9报道在103例人肝细胞癌病例中69例肝癌组织中OPN基因表达水平高于癌旁组织,其中58例超过2倍以上，肝癌和癌旁组织中OPN平均表达水平具有明显差异(P0.001)而在大鼠肝癌模

11、型中随着肝癌的发生和发展OPN表达水平逐渐上升，可见OPN在肝癌组织中高表达并且随着肝癌血行转移而逐渐升高。崔伯康等10复发组血浆OPN浓度为(961.0411.6)g/L，复发组与无复发组血浆OPN浓度比较有显著性差异(P=0.039)。可见肝癌患者血浆中OPN浓度可以作为预测肝癌复发转移的参考因子。陆健等11认为OPN在肝癌组织中显著高表达,且和早期复发血行微转移相关，OPN可能参与了肿瘤血管生成的过程。因此检测OPN有助于肝癌的诊断和复发。3. AFP、AFPmRNA及AFP-L33.1 AFP、AFPmRNA及AFP-L3的概述AFP是由Bregstrand等于1956年首次发现的血清

12、蛋白成分，1963年Abelev等首先报道了它与肝细胞的密切关系。在正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失，因此正常人血清中AFP的含量尚不到20g/L。当干细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新被激活，使原来已丧失合成AFP能力的细胞又重新开始合成，以至血中AFP含量明显升高，而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加，AFP就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标。肝癌AFP阳性率为70%-90%。在生殖腺胚胎瘤、少数转移性肿瘤如胃癌以及孕妇、肝炎、肝硬化中AFP可呈假阳性，但升高不如肝癌明显。利用RT-PCR技术检测肝癌患者外周血中AFP

13、mRNA即甲胎蛋白信使核糖核酸的表达，AFPmRNA在健康志愿者、非肝癌恶性肿瘤患者外周血中均为阴性；在肝细胞癌组外周血中AFPmRNA的检出率明显高于对照性乙型肝炎或肝硬化组。AFPmRNA检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移显著相关。AFP-L3是AFP三种异质体之一，通常AFP可分为三种异质体，即AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3。AFP异质体是AFP不均一的糖链异质性，即氨基酸序列相同而糖链不同的AFP。3.2 AFP、AFPmRNA及AFP-L3的检测意义AFP仍是目前国内大多数医院诊断肝癌的主要指标，陈克林等12采用逆转录和巢氏多聚酶链式反应及SOUTHERN杂交技术以检测

14、肝癌患者有无血行微转移，AFPmRNA的阳性率为61.5。张开泰等13采用AFPmRNA作为外周血肝癌手术后血行微转移的标记物，AFPmRNA的阳性率为56.7%。因此可以认为AFPmRNA可作为定性诊断原发性肝癌的血液学指标，也可作为肝癌细胞血行微转移的标志物，并可判断肝癌临床分期、转移倾向、预后和复发14。AFP variants中尤以AFP-L3与小扁豆凝聚素的亲和力很高，其主要存在于肝癌细胞中，LiD等15指出AFP-L3在诊断肝癌方面是一个高特异性指标，并且AFP-L3受慢性肝病等的影响小，Ando E等16研究发现 35%早期肝癌患者中可检测出AFP-L3，并指出AFP-L3在早期

15、肝癌检测中有重要意义。因此AFP、AFPmRNA及AFP-L3在肝癌的早期诊断、分期及预后中有着重要意义。4.其它因子4.1 血管内皮生长因子（VEGF） 徐洪雨等17报道: VEGF在原发性肝癌中的阳性表达率为65.63；原发性肝癌中肿瘤微血管密度（MVD）为30.9612.32，其中VEGF表达阴性者MVD为19.127.34，VEGF表达阳性者MVD为42.3615.54，二者 相比有显著差异（P0.01)，由此可见VEGF能促进肿瘤中微血管形成,血管形成在原发性肝癌的生长和转移中起到重要的作用. 刘吉奎等 18测定肝癌组织中VEGF阳性表达率为82.8%，转移组VEGF阳性表达例数以及

16、MVD显著多于无转移组(P0.01)，肿瘤包膜不完整和无包膜组VEGF阳性表达例数显著多于包膜完整组(P0.01)，而且VEGF表达强度与MVD间关系密切，但肿瘤直径5 cm与0.05)，由此可见VEGF在肝癌浸润和转移过程中发挥重要作用。4.2 AFU、GGT2、AP 、AIF 、ALD-A 、5-NPDV19AFU是一种溶酶体酸性水解酶，分类名为-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶；基本生理功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷的分解代谢。AFU广泛存在于人体各组织细胞溶酶体和体液中，胎盘胎儿组织脑肺肝胰肾以及血清尿液唾液和泪液中均含有AFU 。Deuginer 等于 1984 年发现AF

17、U在原发性肝癌病人血清显著升高，具有较高的诊断敏感性和特异性，对小肝癌的诊断敏感性远远高于血清 AFP，与血清 AFP 测定有良好的互补性。血清 AFU 活性与 AFP 水平不相关，两者同时检测，可明显提高肝癌的发现率。GGT2（-谷氨酰转移酶同工酶) 用聚丙烯酰胺凝胶电泳可将血清-谷氨酰转移酶(GGT)分出同工酶各系带，其中以GGT2在原发性和转移性肝癌的阳性率可提高到90%，特异性达97.1%。非癌性肝病和肝外疾病假阳性率低于5%。GGT2与AFP无关，在低浓度AFP肝癌及假阴性肝癌中，也有较高的阳性率。在小肝癌中GGT2阳性率78.6%。AP（异常凝血酶原) 又称-羧基凝血酶原。肝癌细胞

18、本身有合成和释放谷氨酸羧化不全的异常凝血酶原的功能，用放免法测定AP，以250ug/L为阳性，则肝细胞癌患者的阳性率为67%，而良性肝病、转移性肝癌时仅少数呈阳性，因此对亚临床肝癌有早期诊断价值。酸性同工铁蛋白(AIF)、醛缩酶A(ALD-A),5-核苷酸磷酸二酯酶同工酶V (5-NPDV)等在肝癌时增高，特异性强，AFP阴性时也升高，肝癌时阳性率均在70%以上。碱性磷酸酶同工酶I(ALP-I)几乎仅见于肝细胞癌，特异性强，但阳性率低，仅24.8%。5.小结目前上述因子的检测应用最普遍的还是AFP，其在肝癌的早期诊断及预后有极重要的意义； Glypican-3 mRNA、OPN、AFPmRNA

19、及AFP-L3是目前研究的热点，但在临床的应用中还未达到AFP的高度；而其它因子目前只能作为联合检测的一种。参考文献1 丁光辉，王红阳，吴孟超，陈汉.GPC-3 mRNA在甲胎蛋白阴性肝癌中的表达及其意义J.中华实验外科杂志，2001，18（2）：112-113.2 Zhu Z W,Friess H,Wang L,etal.Enhanced glypican-3 expression differentiates the majority of hepato-cellular carcinoma as from benign hepatic disorders J.Gut,2001,48(4)

20、:558-564.3 柏凯，梁平. 原发性肝癌患者外周血GPC-3 mRNA的表达与微转移的关系J.消化外科,2006,5(2):115-118.4 Nakano M,Saito A,Yamamoto M,et al . Stromal and blood vessel wall invasion in well-differentiates hepatocellular carcinomaJ. Liver,1997,17（1）:41.5 唐浩，梁平.外周血GPC-3 mRNA在大鼠肝癌微转移中的意义J.消化外科，2005，4（1）：48-51.6 DING Guanghui,WANG Hon

21、gyang,CHEN Han,WU Mengchao,MAN Xiaobo,CONG Wenming,YANG Jiahe,CHENG Shuqun,LI Nan,and SHEN Li. Expression of the Glypican-3 Gene in -fetoprotein-negative Human Hepatocellular CarcinomaJ.The Chinese-German Journal Of Clinical Oncology 2005,4(5):262-266.7郜玉峰，李旭，谢秀琴，李家斌，江晓平.骨桥蛋白和CD44在肝癌中的表达及意义J.中华肝脏病杂志

22、,2005,13（3）:227-228.8 CHEN Rongxin,YE Shenglong. Relationship between osteopontin-related moleculars and tumor metastasisJ. Journal of International Pathology and Clinical Medicine,2006,26(3)：209-212.9 MAN Xiaobo,HU Heping,TANG Liang,CHENG Qingbao,ZHANG Baohua,QIU Xiuhua,WU Mengchao,and WANG Hongyang. Quantitative Detection of Osteopontin High Expression in Human and Rat Hepatocellular CarcinomaJ. The Chinese-German Journal Of Clinical Oncology,2006,5(2)：78-81.10 崔伯康，张昌卿,张颖，元运飞，张亚奇，石明，陈敏山，李升平，李锦清.骨桥蛋白检测对预测肝细胞癌转移复发的意义J.癌症，2006，25（7）：876-879.11 陆建，卞建民, 樊克武，蔡永东，时开网.