TNBS诱导的大鼠炎性肠病模型的建立

1、 TNBS 诱导的大鼠炎性肠病模型的建立王园园 王金凤 蔡 欣 徐 涛 邹民吉 刘 深 刘中成 王 旻 龙民慧 王嘉玺 徐东刚 摘 要 目的 建立 2, 4, 6-三硝基苯磺酸 (T NBS 诱导的炎性肠病动物模型 , 以用于相关药物评价 。 方法 雄性 W istar 大鼠 50只随机分为 T NBS 造模组 、 对照组及正常组 , 各组大鼠分别用 2%T NBS 、 50%乙醇及生理盐水灌肠 。观察各组大鼠的粪 便 、 精神状态和进食情况 , 并每日称量体重及食重 。 分别在造模后第 3、 6和 14天处死大鼠 , 分离结肠组织 , 制作病理切片 , HE 染 色后显微镜下观察结肠组织病理

2、变化 。 结果 T NBS 造模组在造模后第 1天即表现出明显的肠道稀便和血便 , 并持续约 8天 ; 造 模后体重和进食明显下降 , 持续 710天后缓解 ; 造模后第 3天可观察到明显的肠道病理改变 , 并逐渐加重 , 至第 6天时可见黏 膜的大量炎性细胞浸润以及肠壁的透壁性坏死 。 造模对照组大鼠在造模后第 1天部分稀便 , 第 2天即恢复正常 , 造模后第 3天 肠道可见轻度病理改变 。 正常组大鼠一切均正常 。 结论 T NBS 诱导的大鼠造模后表现出明显的炎性肠病症状 , 可作为 I B D 病 因及治疗药物研究的有效模型 。关键词 2, 4, 6-三硝基苯磺酸 炎性肠病 动物模型

3、Est ablishm en t of I nfl am ma tory Bowel D isea se M odels I nduced by 2, 4, 6-Tr i n itrobenzenesulfon i c Ac i W ang J infeng, W ang Yuanyuan, Cai X in, et al . Institute of B asic M edical Sciences, A cade m y of M ilitary ChinaAbstract O bjecti ve To devel op a model of inflammat ory bowel ind

4、uced 6-trinitr obenzenesulfonic acid (T NBS . M ethods FiftyW istar rats were random ly divided model and nor mal gr oup. 2%T NBS, 50%ethanol and physi ol ogical saline were ad m inistered per t o of gr oup s, res pectively . Feces, p sychosis and appetite were observed, body weight and food killed

5、after 3, 6and 14d, and the col ons were is olated and hist ol ogical findingswere exa m the rats in the model gr oup had l oose and bl oody st ools, and the sy mp t om s las 2ted f or about 8days . eaten were markedly decreased for 7-10days . Obvi ous pathol ogical changes in the col on were observe

6、d on third day on sixth day, characterized by mucosal necr osis and trans mutable infla mmati on . I n the mock model gr oup, the rats had l oose ools on first day, and recovered on second day . L ight pathol ogical changeswere found on third day . I n the nor 2mal gr oup, no pathol ogical changes w

7、ere f ound in col on . Conclusi on Rats treated with T NBS showed obvi ous characters of infla mmat ory bowel disease, which could be used as a model in study on eti opathogenesis and evaluati on effects of medicines .Key words 2, 4, 6-trinitr obenzenesulfonic acid; I nflammat ory bowel disease; Ani

8、 m al model 作者单位 :100850 北京 , 军事医学科学院基础医学研究所基因工程研究室通讯作者 :徐东刚 , 电子信箱 :xudgnic . bm i . ac . cn; 王金凤 , 电子信箱 :jf wangl 炎性肠病 (infla mmat ory bowel disease, I B D 是一类病因不明的慢性肠道炎症性疾病 , 由于具有恶变倾向因而对患者造成非常严重的威胁 , 是胃肠道中除恶变外最严重的疾病之一 。 I B D 主要包括溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis, UC 和克罗恩病 (Cr ohn s dis 2ease, CD 。 其发病率

9、在欧洲和北美最高 , 在亚洲等地区也呈逐年上升的态势 13。 I B D 确切的病因和发病机制尚不清楚 , 可能的致病因素包括环境微生物因素 、 免疫因素和遗传因素 46。目前 , 通过外源化学物刺激诱导肠黏膜产生免疫反应来建立 I B D 模型是较常用的方法 。 有研究报道利用 2, 4, 6-三硝基 苯磺酸 (2, 4, 6-trinitr obenzenesulfonic acid , T NBS 诱导的 I B D 模型与人类的 CD 相似 7。本研究利用 T NBS 诱导建立了炎性肠病大鼠模型并对该模型进行 了初步评价 。 材料与方法 1. 材料 :实验动物为 SPF 级雄性 W i

10、star 大白鼠 , 体重 160±20g, 购自军事医学科学院动物中心 。 T NBS 为 Sig ma 公司 产品 , 浓度 5%(即 50g/L , 使用前配制成 2. 0%T NBS (5%T NBS 10m l +无水乙醇 10m l +生理盐水 5m l 。 2. 方法 :将 50只雄性 W istar 大鼠随机分为 3组 , T NBS 造 模组 20只 , 对照组 18只 , 正常组 12只 。实验动物禁食 24h 后 , 用 30g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉 , 大鼠用特殊的硅胶 导管导入距肛门约 8c m 的结肠内 , T NBS 造模组缓慢注入 210%T NB

11、S, 剂量为 100mg/kg体重 ; 乙醇对照组灌注等量 24 论 著 J Med Res, July 2008, Vol . 37No . 750%乙醇 , 正常对照组仅灌注等量生理盐水 。在导入药液的 时候采取头低尾高的体位 , 防止灌注液体外溢 , 并倒提大鼠 30s 。 造模后大鼠平躺 , 自然清醒 , 常规饲养 。每天观察大鼠 的粪便性状 、 进食情况和精神状态 , 并记录体重和食重 。 各组 大鼠分别于造模后第 3、 6、 14天用戊巴比妥钠麻醉后处死 4只 , 取病变明显部位结肠组织 , 进行病理切片制作 , HE 染色 后显微镜下观察 。3. 数据处理 :数据分析结果以 x

12、±s 表示 , 所测数据用 SPSS 10. 0统计软件进行单因素方差分析的 LS D 检验 , 以 P 0. 05为有统计学意义 。结 果1. 造模后一般情况 :T NBS 造模组大鼠造模后第 1天即出现稀便 、 少动 、 畏寒等症状 , 且大部分稀便带 血 , 精神状态不佳 , 皮毛也变得粗糙 、 不光滑 , 稀便和 血便状况持续大约 8天 。造模对照组中部分大鼠在 造模后第 1天出现稀便 , 但第 2天即恢复正常 , 精神 和活动状况正常 , 皮毛光滑 。 正常对照组大鼠未见异 常 。 在整个实验过程中 , T NBS 造模组大鼠造模后共 死亡 3只 , 占造模组的 15%,

13、其他组均无死亡发生 。 2. 造模后体重 、 食重变化 :如图 1和图 2所示 , T NBS 造模组大鼠造模后进食量明显减少 ,也持续下降 。 造模后第 5, 8天达到造模前食量 ;加 , 至第 10大鼠于 50%1, 体 重也稍有下降 , 但第 天即开始回复 , 第 3天即达到 并超过造模前水平 。正常对照组大鼠体重和进食量 在生理盐水灌肠后没有发生明显下降 , 并于灌肠后第 2天超过造模前水平 。图 1 造模后大鼠体重变化3. 组织病理学变化 :T NBS 造模组大鼠造模后第 3天结肠黏膜充血 , 黏膜上皮中度受损 , 黏膜下层见 大量中性炎性细胞浸润 , 肠壁发生水肿 , 可见出血病

14、灶 , 隐窝结构中度受损 (封三彩图 7A ; 第 6天可见黏 膜糜烂 , 肠壁坏死并深达肌层 , 炎细性胞浸润肠壁全 层 , 黏膜及腺体脱落形成大面积溃疡灶 , 肠壁水肿明图 2 造模后大鼠食量变化显 (封三彩图 7B ; 第 14天肠黏膜结构基本恢复完 整 , 坏死腺体得以修复 , 腺体数量较少 , 腺体间有纤维 组织修复瘢痕 , 许多腺体内可见黏液潴留 (封三彩图 7C 。 造模对照组大鼠除仅在第 3天镜下观察可见 黏膜轻度损伤 , 肠壁轻度水肿浸润 , (封 ,(、 7F 。讨 论炎性肠病在西方国家相当常见 , 尽管在亚洲国家 的发病率低于西方 , 但近 10年亦呈上升趋势 。国内 由

15、于过去一直认为本病少见而重视不够 , 但近年据报 道也已经超过 2万人 , 并且新病例还在不断发现 。 I B D 病因和确切的发病机制至今尚不清楚 , 治疗亦颇 为棘手 。 理想的动物模型是进行病理 、 病因及相关治 疗药物研究不可缺少的工具 。目前 , T NBS 诱导的大 鼠肠损伤模型已广泛用于人类各种肠道病变发病机 制的研究 812。 T NBS 是一种弱有机酸 , 属于半抗 原 , 单独在体内不能诱导免疫应答 , 只有在与组织蛋 白等高分子物质结合后才能诱发免疫反应 , 因此造模 时需用乙醇作为肠黏膜屏障的破坏剂 , 使得 T NBS 与 肠黏膜角蛋白结合成全抗原 , 从而激发局部免

16、疫反 应 。 T NBS 造成的肠损伤与人类的 CD 在发病机制 、 病理特点及临床表现等方面相似 , 其典型特征是结肠 发生透壁性坏死和广泛的炎性细胞浸润 , 并且伴随着 体重的持续下降 7, 13。以往有文献报道采用较大剂 量的 T NBS 诱导的炎性肠病模型 , 虽然模型制备成功 但病死率较高 , 约为 40%14。本研究采用较文献报 道剂量稍有降低的 2%T NBS 按 100mg/kg 体重对大 鼠进行灌肠 , 从实验结果中可以看到 T NBS 造模组在 造模后体重持续下降 , 直至第 10天才恢复至造模前 水平 , 病理切片观察在造模后第 6天也发现肠壁坏死 3 4 医学研究杂志

17、2008年 7月 第 37卷 第 7期 论 著 并深达肌层 , 炎性细胞浸润肠壁全层 , 这些都是典型的炎性肠病特征 , 表明该方法制备炎性肠病模型是成功的 , 并且采用上述方法造模使模型动物的病死率得到显著控制 , 为 15%。从本实验造模大鼠结肠组织的病理变化观察中我们发现 , T NBS 造模后第 3天就表现出明显的肠道损伤 , 并且在造模后第 6天病理改变达到高峰 , 此后病理改变开始逐渐减轻 。 因此 , T NBS 造模后短期内可用于急性炎症性损伤的研究 。此方法制备炎性肠病模型 ,周期短 , 方法简便 , 可作为研究人类炎性肠病发病机制及相关药物研发的理想模型 。参考文献1 Zh

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24、urine ColitisJ .Gastr oen 2-(收稿 :2008-04-10 作者单位 :075029 张家口 , 河北北方学院附属第一医院心血管内科 (梁海峰 ; 101101 北京市中医学校医学临床学科 (刘新华 梁海峰 刘新华摘 要 目的 观察西洛他唑 (CS 对冠心病 (CHD 患者阿司匹林抵抗 (AR 的影响 。 方法 165例冠心病患者按照是否合 并糖尿病 (DM 分为 A 组 :冠心病组 , B 组 :冠心病合并糖尿病组 。 两组患者均口服阿司匹林 (AS A 0. 1g, qd, 1周后测定二磷酸 腺苷 (ADP 及花生四烯酸 (AA 诱导的血小板聚集率 (P AG 。 随后将 A 、 B 两组患者分别随机分成 A1、 A2、 B1、 B2四组 。 A1、 B1两组继续服用阿司匹林 0. 1qd, A2、 B2组加用西洛他唑 50mgbid, 1周后复查 P AG, 比较各组 P AG 和 AR 的发生情况并进行统计分 析 。 结果 A 组 P AG 及 AR 发生率较 B 组低 (P <0. 01 。 A1组 P AG 及 AR 与 A 组无明显差异 (P >0. 05 ; A2组 P AG 及 AR 较 A 组 A1组有明显差异 (P <0. 01 ; B1组 P AG 及