石杉碱甲固体脂质纳米粒包封率的测定方法研究

1、石杉碱甲固体脂质纳米粒包封率的测定方法研究         作者：李园，陈桐楷，林华庆，张蜀，邓红 【摘要】 目的 建立石杉碱甲固体脂质纳米粒(Hup ASLN)包封率的测定方法。方法 分别采用透析法、超滤法分离固体脂质纳米粒和游离药物,以高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量。结果 超滤法能有效地将石杉碱甲固体脂质纳米粒与游                

2、60;                  作者：李园，陈桐楷，林华庆，张蜀，邓红【摘要】  目的 建立石杉碱甲固体脂质纳米粒(Hup ASLN)包封率的测定方法。方法 分别采用透析法、超滤法分离固体脂质纳米粒和游离药物,以高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量。结果 超滤法能有效地将石杉碱甲固体脂质纳米粒与游离石杉碱甲分离，回收率为98.09%，测得3批样品的平均包封率为57.63%。结论 超滤法方便快捷，结果准确，适用于

3、石杉碱甲固体脂质纳米粒的包封率测定。 【关键词】  石杉碱甲;固体脂质纳米粒;包封率;透析法;超滤法Abstract:Objective To establish a method for the determination of the entrapment efficiency of solid lipid nanoparticles loading huperzine A (Hup ASLN). Methods The solid lipid nanoparticles and free drugs were separated by ultrafiltration and d

4、ialysis with HPLC for the assay of Hup A. Results Free drugs could be effectively separated from the Hup ASLN by ultrafiltration. The average entrapment efficiency of three batches of Hup ASLN was 57.63%,with the recovery of 98.09%.Conclusion It convenient,sensitive and accurate with ultrafiltration

5、,and can be used to determine the entrapment efficiency of Hup ASLN.Key words:huperzine A; solid lipid nanoparticles; entrapment efficiency; dialysis; ultrafiltration石杉碱甲(huperzine A,Hup A)是从中草药蛇足石杉(千层塔)中分离出来的天然产物，是一种高效、可逆的胆碱酯酶抑制剂，能促进记忆再现和增强记忆保持。据文献报道，石杉碱甲治疗阿尔茨海默氏病有确切的临床疗效，是目前国际上治疗老年痴呆较为理想的候选药物1。但石杉

6、碱甲生物半衰期短，口服或注射后会出现不良反应而影响其疗效2。近年来，固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)作为一种给药新载体，在不同给药途径中具有很大的开发潜力和市场前景。将Hup A包封于SLN内，再制成经皮给药制剂，能增加药物在局部组织的积累并起到持续释药的作用，相对减少全身吸收以避免不良反应。SLN的药物包封率是处方工艺筛选与质量评价的重要指标，也是其发挥疗效的关键。本文采用高压乳匀法制备了石杉碱甲固体脂质纳米粒(Hup ASLN)，分别用透析法、超滤法测定其包封率，并分别对这两种测定方法进行比较和方法学考察，优选出准确度高的Hup ASLN包封率测

7、定方法。1 仪器与试药Ultimate 3000型液相色谱仪(美国戴安公司);NS1001L型高压均质机(意大利Niro Soavi SPA. 公司);Zetasizer 3000HS 型激光粒度仪(英国Malvern公司)。石杉碱甲原料药(浙江万邦药业有限公司，批号:20090402);透析袋(截留分子量8 00013 000，上海百博有限公司);单硬脂酸甘油酯(天津市百世化工有限公司);超滤离心管(截留分子量50 000，Sartorius);泊洛沙姆188(德国BASF公司);油酸(天津市大茂化学试剂厂);甲醇、乙腈为色谱纯;其他试剂为分析纯。2 方法与结果2.1 Hup ASLN的制备

8、3,4称取1.5 g泊洛沙姆188，加适量蒸馏水超声分散至完全溶解，将其置于70 恒温水浴中，作为水相;称取处方量的主药与混合脂质材料(单硬脂酸甘油酯和油酸)，主药和脂质材料比例为130(质量比)，在恒温磁力搅拌器70 条件下充分熔融，作为油相。在磁力搅拌下(1 000 r·min-1)，将水相滴加到油相中，保持恒温搅拌一定时间后停止加热，并继续搅拌一定时间，得初乳。将初乳在均质压力70 00090 000 kPa下，通过高压均质机乳匀4次，即得Hup ASLN。同法制备3批，置于4 冰箱保存，备用。同法制备空白SLN。2.2 色谱条件色谱柱：Agilent C8 柱(250 mm&

9、#215;4.6 mm，5 m);流动相：0.02 mol·L-1磷酸二氢钾(pH值3.90)乙腈 (体积比8614);进样量：20 L;检测波长：310 nm;流速：0.8 mL·min-1。2.3 专属性试验精密量取空白固体脂质纳米粒及含药固体脂质纳米粒各1 mL，用体积分数80%甲醇溶液超声破乳后定容至50 mL容量瓶中，离心，取上清液过滤，按上述色谱条件分别进样，结果见图1。由图1可见，石杉碱甲峰与相邻峰分离良好，保留时间约为6.3 min，辅料对药物的测定无干扰。2.4 线性关系考察精密称取石杉碱甲对照品，用体积分数20%的甲醇溶液溶解后配成质量浓度为500.0

10、g·mL-1的储备液。分别精密移取储备液适量，用体积分数20%甲醇稀释成质量浓度为5.0、10.0、25.0、40.0、50.0 g·mL-1的系列对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样。以峰面积(A)对质量浓度()作线性回归，得回归方程为A=0.794-0.1225 (r=0.999 9)，表明石杉碱甲在5.050.0 g·mL-1内线性关系良好。2.5 精密度试验取“2.4”项下5.0、25.0、50.0 g·mL-1的溶液，按“2.2”项下色谱条件进样，于1 d各重复进样5次，计算日内精密度，结果低、中、高3种浓度的RSD分别为0.28%、0.0

11、3%、0.07%;连续5 d重复进样5次，计算日间精密度，RSD分别为0.43%、0.11%、0.19%。表明精密度符合方法学要求。2.6 稳定性试验精密吸取“专属性试验”项下的含药供试品溶液20 L，分别于0、2、4、6、8、24 h进样，按“2.2”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。结果RSD为0.56%，表明样品在24 h内稳定。2.7 回收率试验精密配制低、中、高3个浓度(相当于Hup A质量浓度为400.0、500.0、600.0 g·mL-1)的Hup A 20%甲醇溶液，分别与空白SLN按11比例混合得到混合溶液。精密移取上述混合溶液各1 mL，每个浓度各5份，分别置10 mL容量瓶中，加适量体积分数80%的甲醇溶液超声20 min后定容，然后经3 000 r·min-1离心机离心10 min，取上清液过滤后按“2.2”项下色谱条件进样，计算回收率，结果见表1。2.8 Hup ASLN中Hup A含量的测定精