凝胶色谱法测定注射用盐酸头孢吡肟中的高分子杂质

1、凝胶色谱法测定注射用盐酸头孢吡肟中的高分子杂质    【摘要】 目的 建立测定注射用盐酸头孢吡肟中高分子杂质(头孢吡肟聚合物)的方法。方法 采用分子排阻凝胶色谱自身对照外标法进行定量，用葡聚糖凝胶G10(40120 m)为填料，流动相A为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.0)，流动相B为超纯水，流速为1.0 mL/min, 检测波长为254 nm。结果 注射用盐酸头孢吡肟的高分子杂质含量均小于0.5。结论 本法快速、简便，可用于注射用盐酸头孢吡肟高

2、分子杂质的质量控制。【关键词】 盐酸头孢吡肟 凝胶色谱法 高分子杂质Abstract:Objective To establish a method for determining high molecular weight impurities in cefepime hydrochloride injection. Methods Quantification of high

3、0;molecular weight impurities in cefepime hydrochloride injection was determined by Sephadex G10 column chromatography with external standard method. The mobile phase consisted of 0.1&#

4、160;molL phosphate buffer(pH7.0) and supper pure waterThe flow rate was 1.0 mLmin and detection wavelength 254 nm. Results The content of high molecular weight impurities in&#

5、160;different batches of cefepime hydrochloride injection was less than 0.5Conclusion This method was sensitive and accurate for determining high molecular weight impurities in cefepime

6、 hydrochloride injection.Key words: cefepime hydrochloride; sephadex G-10; high molecular weight impurities注射用盐酸头孢吡肟（cefepime hydrochloride）是20世纪90年代上市的第四代头孢菌素，本品抗菌谱广，药效强。实验研究表明，控制产品中高分子杂质是减少-内酰胺类抗生素过敏反应的重要途径之一 1。中国药典2005年版采用凝胶色谱自身对照外标

7、法定量测定内酰胺类抗生素中的聚合物，而盐酸头孢吡肟不能完全缔合，无法采用“自身”对照外标法定量，根据中国药典2005年版二部阿莫西林聚合物检验方法，可以用结构与研制产品类似，且能够完全缔合的其他药物制备对照品，进行自身对照外标法定量2-3。本文用与头孢吡肟结构及分子量相近的头孢噻肟作对照品，建立了测定注射用盐酸头孢吡肟中高分子杂质(头孢吡肟聚合物)的方法。1 仪器与试药1.1 仪器 DHLA电脑恒流泵(上海泸西分析仪器厂)，UVD6802紫外检测仪(上海金达生化仪器厂)，HW2000色谱工作站(南京色谱软件有限公司)。1.2 试药 头孢噻肟对照

8、品(批号130483-200102，中国药品生物制品检定所)；注射用盐酸头孢吡肟(批号060330、060731、060830，广州白云山天心药业股份有限公司)。 磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸、氢氧化钠均为分析纯；水为二次重蒸馏水；葡聚糖凝胶(Sephadex)G10和蓝色葡聚糖2000为Amersham Bioscience公司产品。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱为玻璃色谱柱（40 m×1.5 cm），内填Sephadex G10凝胶；流动相A为pH7.0的0.1 mol/L磷酸盐缓冲

9、液(取磷酸氢二钠21.85 g和磷酸二氢钠6.08 g，加水1 000 mL，调pH值为7.0)，流动相B为超纯水；流速为1.0 mL/min；检测波长为254 nm。2.2 系统适用性试验4 分别以流动相A、B为流动相，取0.1 mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液200 L注入色谱仪，理论塔板数按蓝色葡聚糖2000峰计算分别为1 968、1 639，拖尾因子分别为1.7、1.1，在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000保留时间的比值为1.01，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物与相

10、应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值都在0.931.07之间，另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200 L，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差为0.35。2.3 标准曲线绘制 取头孢噻肟对照品约0.25 g置50 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 mL分别置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液各200 L，记录色谱图，以质量浓度()为横坐标， 峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，回归方程为：=8.714×

11、106A+31788(n=5,r=0.9998)。实验表明，在0.0250.4 mg/mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好。2.4 精密度和稳定性试验 配制每1 mL含100 g的头孢噻肟对照溶液，精密量取200 L注入色谱仪，连续进样5次，计算峰面积的RSD为0.35。将测定溶液放置1、2、4 h，分别测定峰面积，计算峰面积的RSD为0.27。2.5 检测灵敏度试验 取头孢噻肟对照品适量，精密称定，用水稀释制成一系列浓度的溶液，精密量取上述溶液200 L注入色谱仪，以流动相B为流动相进行测定

12、，记录色谱图。最小检测限(S/N3)为0.025 mg/mL，最小定量限(S/N10)为0.076 mg/mL。2.6 重复性试验 取同一批号样品依法重复测定6次，得高分子杂质含量分别为0.09，0.1，0.1，0.1，0.1，0.1，RSD为4.15。实验表明方法的重复性良好。2.7 样品的测定 取头孢噻肟对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.2 mg的对照溶液。取供试品适量约相当于头孢吡肟0.2 g ，精密称定，置10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，立

13、即精密量取200 L注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图，见图1。另精密量取对照溶液200 L注入色谱仪，以流动相B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算，含头孢吡肟聚合物以头孢吡肟计算(头孢噻肟:头孢吡肟1.00.94)，3个批号（060330、060731、060830）的样品测定结果分别为0.3%、0.2%和0.1%。图1 注射用盐酸头孢吡肟高分子杂质检查图谱（略）Fig.1 Chromatograms of high molecular weight impurities in cefepime hydrochloride injection 3 讨 高分子杂质会随样品放置时间的延长而增加，而高分子杂质是引起内酰胺类抗生素过敏反应的主要原因之一，故有必要对其进行检测。中国药典2005年版标准增强了对高分子杂质检测的要求。本方法按照中国药典2005年版标准要求进行研究检测，经试验结果表明，本方法灵敏、准确、简便，可用于注射用盐酸头孢吡肟的质量控制。【参考文献】1 李哲媛，李玉凤，范兵. 阿莫西林中高分子杂质的测定与质量分析J. 中国现代