菠菜中草酸的提取及含量测定

1、菠菜中草酸的提取及含量测定一、实验目的1学会沉淀法提取操作，进一步熟悉过滤，离心，提取等操作，掌握均匀沉淀法的原 理。2学习文献资料的查阅方法，学会制定实验方案，综合运用各种分析方法解决实际问 题。3学习食品采样方法，综合分析菠菜中草酸的含量分布情况。 二、实验原理草酸是一种二元羧酸, 是植物体内普遍存在的一种组分, 在菠菜、苋菜、生菜等许多蔬菜作物体内都有较高的含量。从环境毒理学和食品营养学角度看, 草酸在蔬菜作物可食部位的大量累积会影响到人类的身体健康。本实验采用灵敏度较高的比色法测菠菜中草酸含量。采用722型分光光度计法测定，Fe在pH值 的KCl- HCl缓冲液中与磺基水杨酸（SSAL

2、）和草酸均生成络合物，Fe3 +和 草酸的络合物能使Fe3+与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅,测定Fe3+的磺基水杨酸络合 物的吸光度, 随着草酸量的增加而降低, 据此可计算出样品中草酸根的含量。三、仪器与试剂仪器部分：榨汁机，722型分光光度计, 水浴锅，电子天平, 台秤 , 100mL 容量瓶3个 ,250mL容量瓶4个，200mL烧杯2个，500mL烧杯2个，离心机及离心管， 长颈漏斗，铁架台， 滤纸。试剂部分：新鲜菠菜，磺基水杨酸（分析纯） （s）, FeCl3，草酸钠（s）, KCl（s）, 12mol/L 浓盐酸，L稀盐酸，去离子水，pH试纸。四、实验步骤 （一）样品制备1铁标准液

3、的配制（ mg/ mL ） : 称取 0 .4 g FeCl3 于 500mL 烧杯中 , 加去 250mL 离子水溶解。2 磺基水杨酸（ SSAL） 的配制 （ 0 .5%） ： 称取 0 .5 g 磺基水杨酸（ 分析纯 ） 于 100 mL 容量瓶中 , 加水稀释至刻度。3 草酸钠标准液的配制（ 2 mg/ mL ） : 称取 0 .2 000 g 草酸钠于200 mL 烧杯中 , 加去离子水 , 稍加热 , 使其溶解, 移入 100 mL 容量瓶用去离子水定容。4 缓冲液的配制（ pH 值 2） : 称取 3.7g 左右 KCl 于 500 mL 烧杯中,加去离子水少量, 在水浴锅上微热

4、溶解，加12mol/L浓盐酸用pH试纸使pH值为2移入250 mL容量并S中，用去离 子水稀释至刻度。5 草酸的待测液制备：将菠菜在去离子水中洗涤2 次 , 晾干。 称取菠菜可食部分100 g，加入100 mL水，压榨23 min,每2g匀浆折算为1 g试样，称取1份匀浆50 g,用100 mL水 洗入250 mL容量瓶，加入浓度为 L的HCl溶液，澄清，置于7080 C水浴上加热30 min, 其间摇动数次,取出冷却, 加水至刻度,摇匀过滤。将滤液经10000r/min 离心 10min， 得到的即是草酸待测液。6比色法测定菠菜中草酸含量的条件研究2该最大吸收波长即为测定时所要选择的最佳波长

5、508nm。标准曲线的制作按照以上确定的条件，按下列顺序：加液：2mL Fe3+, 20mL缓冲液，mL磺基水杨酸，从容量瓶中依次取出已经配制的Na2c2O4溶液体积为：0、0. 2、0.4、0. 8 mL,再用蒸储水定容至100mL容量瓶中。显色 30min后，以蒸储水为参比液，在508nm波长处进行比色测定。 根据测定结果(见表一)，绘 制草酸含量的标准曲线，通过计算机拟合，获得该标准曲线A关于x的方程。其中式中，x为 显色体系的草酸的质量浓度 (mg/mL), A为吸光度。7.菠菜中的待测液中草酸含量的测定：用菠菜待测液替换草酸根溶液，依次取0, 0. 4, mL用蒸储水定容至100mL

6、容量瓶中。显色30min后，以蒸储水为参比液，在510 nm波长处进行比色测定其余按照制作标准曲线相同 的方法，进行显色反应，并测定其吸光度，填入表二。根据标准曲线方程，计算待测液中草酸 含量。五、实验数据处理FeCl3: 0 .4 g磺基水杨酸：0.5gNa2c2。4： 0.2275gKCl ：Na2c2O4浓度的计算，以第二份为例：x=0.2275 g X103 /100mL X50mL= X10-3 mg/mL组别Fe3+溶?夜-的体积/(mL)缓冲液的体积/(mL)磺基水杨酸的体积/(mL)Na2c2O4 的浓度 x /(mg/mL)吸光度A2200220X10-3220X10-322

7、0X10-2220X10-2表用origin软件绘制的草酸含量标准曲线 B吸光度A与草酸的质量浓度x(mg/mL)的线性方程A=菠菜草酸代替草酸钠得到的吸光度；波长(nm)508508508508菠菜待测液体积吸光度由人=当体积为时,A=#x=mL草酸质量 w=x X50mL/ X250mL=实际取了 25g菠菜，所以100g菠菜含草酸的质量m=wX100g/25=1.83g六、误差分析1.杂质过程中，菠菜未完全榨汁，造成草酸不能尽数提取，从而造成实验结果比真实结果偏低一点。对实验结果有很大影响，而实验过程中pH与反应的最适pH有一定偏差。3 .在显色过程中，未等到显色完全，就进行了比色测定，

8、导致偏差。4 .移取溶液过程中由于无1mL吸量管，造成测量结果不够精确。七、注意事项1 .比色实验的选择：在显色30min后进行比色较合适。2 .在比色测定时,都是要以蒸馏水为参比溶液,注意不能用1 号溶液作为参比。3 .加液时要按顺序加入，分光分度计使用之前要预热。4 .用标准曲线法测草酸含量时注意草酸的浓度要在线性范围内。5 .要使吸光度控制在，这样才能提高准确度。6 .为了使草酸提取完全，应将菠菜的榨汁在7080c下水浴加热，并加入适量盐酸。参考文献：1 曾芳， 刘忠珍， 许桂芝，王荣辉，欧俊 . 蔬菜中不同形态草酸的提取测定 期刊论文 -食品科学2009(16)2 段立珍 , 汪建飞 , 赵建荣 . 比色法测定菠菜中草酸含量的条件研究3 NOONAN S C, SAVAGE G P. Oxalate content of foods and its effect on humansJ. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition, 1999, 8(1): 64-74.4 张英鹏 ,