依拉地平残留验证

1、1. 依拉地平残留测定及方法学验证1.1 测定仪器及检测条件仪器: 安捷伦-6890N气相色色谱仪 ，N2000工作站测定条件 柱:毛细管柱 DB-624，Catalog 123-1334 Serial No: US9323717H规格: 30M×0.32mm×1.8µm载气:N2 流速: 2.0ml/min , 柱温:程序升温 55 保持2min以10/min升温150 保持2min进样器温度:180 分流比:10:1 进样体积1ul检测器 FID温度：250 氢气：40ml/min 空气：400ml/min 尾吹：30ml/minRang 0 ATTEN 01

2、.2. 专属性试验精密吸取乙醇127µl（相当于100mg），醋酸乙酯111µl（相当于100mg），甲苯115ul（相当于100mg）别置3个事先装有少量二甲亚砜(DMSO)的100ml容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配置成3个相应的二甲亚砜溶液，分别吸取各溶液5ml到个50ml的容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配置成含各溶剂浓度均为100µg/ml的3种溶液A（乙醇），B（醋酸乙酯）, D(甲苯)溶液，取3个溶液及DMSO溶液在信噪比3条件下进样分析，出样顺序：乙醇A（RT=2.547），醋酸乙酯B（RT=4.308），甲苯C（RT=6.993），DMSO（R

3、T=10.00）取上述A-C. 3溶液按1：1混合进样。其中乙醇，乙酸乙酯之间的分离度为27，乙酸乙酯和甲苯之间分离度为38，甲苯和DMSO之间分离度为2.8，且乙醇,醋酸乙酯,甲苯,理论塔板数均大于30000，对称性好。由于DMSO是稀释溶剂，浓度较大，不能真实反映与甲苯之间的分离度，我们分别吸取乙醇，乙酸乙酯，甲苯和DMSO各1ml混合，进样0.2ul，RANG为4，分流比100:1，四个成分之间分离度均大于28。各溶剂分离度、理论塔板数溶剂分离度理论塔板数Rt乙醇27399222.547乙酸乙酯38840744.312甲苯2.81770947.1521.3定量限检测限试验（1）取专属性项

4、下A乙醇溶液5.0ml到100ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，测定一次，再吸取该溶液2ml加3mlDMSO混合得浓度为2.0ug/ml，测定一次，再将该溶液稀释一倍，在信噪比大于10的条件下测得定量限浓度为1.0ug/ml，吸取1.0ug/ml溶液1ml到洗淋瓶中，加2mlDMSO混合，在信噪比大于3的条件下测得最低检测浓度为0. 33ug/ml（2）取专属性项下B（醋酸乙酯）,溶液5.0ml到100ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，测定一次，再吸取该溶液1.0ml加3mlDMSO混合得浓度为1.25ug/ml，测在信噪比大于10的条件下定一次，测得定量限浓度为1.25ug/ml，吸取1

5、.0ug/ml溶液1ml到洗淋瓶中，加2mlDMSO混合，在信噪比大于3的条件下测得最低检测浓度为0. 42ug/ml（3）取专属性项下 C(甲苯) 溶液3.0ml到100ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，测定一次，再吸取该溶液1.0ml加4mlDMSO混合得浓度为0.6ug/ml，测在信噪比大于10的条件下定一次，测得定量限浓度为0.6ug/ml，吸取0.6ug/ml溶液1ml到洗淋瓶中，加2mlDMSO混合，在信噪比大于3的条件下测得最低检测浓度为0. 2ug/ml结果见表一，表二。表一乙醇、醋酸乙酯、甲苯、定量限浓度，定量限溶剂定量限浓度（µg/ml）定量限（ppm）乙醇1.

6、020.0醋酸乙酯1.2525.0甲苯0.612表二：乙醇、醋酸乙酯、甲苯、检测限浓度，检测限溶剂检测限浓度（µg/ml）检测限（ppm）乙醇0.336.6醋酸乙脂0.428.4甲苯0.24.01.4. 线性关系测定. 标准溶液配置精密吸取乙醇380µl（相当于300mg），醋酸乙酯333µl（相当于300mg），甲苯57µl（相当于50mg），置同一个事先装有少量二甲亚砜（DMSO）的200ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，配成含乙醇1500µg/ml，醋酸乙酯1500µg/ml，甲苯250µg/ml，的标准储备液，分别

7、精密吸取标准储备液：1ml，2ml, 5ml，10ml，15ml，20ml到6个100ml的容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配成1#6#的6个标准溶液。取上述六个标准溶液分别进样，线性关系见表三，四，五.表三： 乙醇的线性关系浓度（µg/ml）峰面积回归方程相关系数1513522Y=868.5x+10670.9999830267687567184150131216225197214300260930表四：醋酸乙酯的线性关系浓度（µg/ml）峰面积回归方程相关系数1511259Y=738.3x+5760.999923022314755661615011090922516849

8、8300220822表五：甲苯的线性关系浓度（µg/ml）峰面积回归方程相关系数2.55152Y=1964.8x+393.5R=0.999965.01015412.525157254931837.5746645098250上述结果可以看出：乙醇，醋酸乙酯在浓度15µg/ml300µg/ml之间，甲苯在浓度2.5µg/ml50µg/ml之间，线性关系良好，相关系数均大于0.9999。1.5. 依拉地平加样回收率实验精密称取供试品(200812001)4份，每份500mg，分别置4个10ml容量瓶中，其中一份精密加入DMSO溶液溶解，作为空白检测溶

9、液。其余的每份分别加入线性项下的2#，4#，6#标准溶液溶解。空白样进样2次，空白检测溶液中测出乙醇A=21552, 醋酸乙酯，甲苯均未测出，再将其余3份样品分别测定(n=3)，并用各自相对应的线性方程计算回收率，结果见表六.七. 八. 表六： 乙醇加样回收率次数加入浓度（µg/ml）峰面积减去原样后峰面积测定浓度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%130478502629829.0596.898.81.2230483742682229.6598.8330485822703029.8999.64150150078128526146.7697.8515014993312

10、8381146.5997.76150151770130218148.7199.17300284443262891301.47100.58300282352260800299.0699.79300281736260184298.3599.5表七：醋酸乙酯加样回收率次数加入浓度（µg/ml）峰面积测定浓度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%1302270729.9899.999.71.12302286430.19100.63302265029.9099.74150109923148.1198.75150108806146.5997.76150110653149.199.4

11、7300225366304.47101.58300222090300.041009300220861298.3799.5表八：甲苯加样回收率次数加入浓度（µg/ml）峰面积测定浓度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%15.099864.9398.599.81.125.0100064.9498.835.0100584.9699.34254859824.7699.05254881624.8799.56254893124.9399.77509919050.75101.58509856350.43100.99509882650.56101.11.6. 依拉地平精密度测定精密称

12、取供试品（批号200812001）6份，每份500mg，置10ml容量瓶中用DMSO稀释到刻度，按验证方法测定6次，计算精密度误差，标准溶液配置，精密吸取标准储备液10ml到100ml容量瓶的，用DMSO稀释到刻度，配成含乙醇150ug/ml，乙酸乙酯150ug/ml，甲苯25ug/ml，标准溶液 进6次，标准溶液峰面积误差RSD10%，供试品进2次，按外标法计算供试品中残留溶剂含量（ppm）。6次测定结果见下表九表九：依拉地平精密度（乙醇）供试品测定次数标准峰面积乙醇平均RSD（%）样品峰面积A平均含量（ppm）平均RSD（%）1 0.050052g/ml1312660.9620665472

13、4781.62 0.050102g/ml208844763 0.050000g/ml206424724 0.050380g/ml214834875 0.049772g/ml204984716 0.050205g/ml214014871.7. 依拉地平残留测定供试品配制：取供试品200802001，200901002，200802003, 3批样每个批号精密称取500mg到10ml容量瓶中，用DMSO溶解并稀释到刻度，标准溶液峰面积，取精密度-6项下标准溶液各溶剂峰面积，供试品残留按外标法即得，结果见表十,表十：依拉地平中乙醇、乙酸乙酯、甲苯、的残留量批号浓度（g/ml）参数乙醇乙酸乙酯甲苯20

14、08120010.050205峰面积平均值21401/含量（ppm）487/2009010010.050076峰面积平均值13515/含量（ppm）308/2009010020.050022峰面积平均值25304/含量（ppm）578/说明：符号“ / ”表示未检出。1.8 耐用性实验 1 1.8.1 测定仪器及检测条件仪器: 安捷伦-6890N气相色色谱仪 ，N2000工作站测定条件 柱:毛细管柱 DB-624，Catalog 123-1334 Serial No: US9323717H规格: 30M×0.32mm×1.8µm载气:N2 流速: 1.8ml/mi

15、n , 柱温:程序升温 60 保持2min以12/min升温180 保持2min进样器温度:170 分流比:12:1 进样体积1ul检测器 FID温度：250 氢气：40ml/min 空气：400ml/min 尾吹：30ml/minRang 0 ATTEN 0 1.8.2 测定： 标准溶液配置，精密吸取乙醇380µl（相当于300mg），醋酸乙酯333µl（相当于300mg），甲苯57µl（相当于50mg），置同一个事先装有少量二甲亚砜（DMSO）的200ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，配成含乙醇1500µg/ml，醋酸乙酯1500µg/m

16、l，甲苯250µg/ml，的标准储备液，吸取标准储备液10ml到100ml容量瓶的，用DMSO稀释到刻度，配成含乙醇150ug/ml，乙酸乙酯150ug/ml，甲苯25ug/ml，标准溶液 进6次，标准溶液峰面积误差RSD10%，供试品（批号200812001 200901001. 200901002）各1份，每份500mg，置10ml容量瓶中用DMSO稀释到刻度，进供试品溶液2次测定，按外标法即计算即得1.8.3结果标准溶液进6次标准溶液乙醇A=111611 RSD=2.3%标准溶液乙酸乙酯A=95660 RSD=2.6%标准溶液甲苯A=42063 RSD=2.6%供试品20081

17、2001供试品浓度0.050021g/ml, 峰面积平均值A=17612, 乙醇含量473ppm, 醋酸乙酯，甲苯均未测出。供试品200901001供试品浓度0.050162g/ml, 峰面积平均值A=11431, 乙醇含量306ppm, 醋酸乙酯，甲苯均未测出。供试品200901002浓供试品度0.050081g/ml, 峰面积平均值A=21905. 乙醇含量588ppm, 醋酸乙酯，甲苯均未测出。 1.9耐用性实验 21.9.1 测定仪器及检测条件仪器: 安捷伦-6890N气相色色谱仪 ，N2000工作站测定条件 柱:毛细管柱 DB-1，Catalog 123-1033 Serial No

18、: US6517452H规格: 30M×0.32mm×1.0µm载气:N2 流速: 1.5ml/min , 柱温:程序升温 50 保持2min以10/min升温150 保持2min进样器温度:180 分流比:10:1 进样体积1ul检测器 FID温度：250 氢气：40ml/min 空气：400ml/min 尾吹：30ml/minRang 0 ATTEN 01.9.2 测定：标准溶液配置精密吸取乙醇380µl（相当于300mg），醋酸乙酯333µl（相当于300mg），甲苯57µl（相当于50mg），置同一个事先装有少量二甲亚砜（DM

19、SO）的200ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，配成含乙醇1500µg/ml，醋酸乙酯1500µg/ml，甲苯250µg/ml，的标准储备液，吸取标准储备液10ml到100ml容量瓶的，用DMSO稀释到刻度，配成含乙醇150ug/ml，乙酸乙酯150ug/ml，甲苯25ug/ml，标准溶液 进6次，标准溶液峰面积误差10%，供试品（批号200812001 200901001. 200901002）各1份，每份500mg，置10ml容量瓶中用DMSO稀释到刻度，进供试品溶液2次测定，按外标法计算即得1.9.3结果标准溶液进6次标准溶液乙醇A=113727 RSD=3.1%标准溶液乙酸乙酯A=104546 RSD=2.