层粘连蛋白受体及微血管密度与甲状腺癌转移的关系

1、    层粘连蛋白受体及微血管密度与甲状腺癌转移的关系        摘要：目的探讨微血管密度(MVD)层粘连蛋白受体(LN-R)表达水平及其与甲状腺癌转移的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测33例原发性甲状腺癌中LN-R的表达及MVD计数。结果33例原发性甲状腺癌中LN-R表达阳性者19例，表达率为57.6 %。在有转移的14例甲状腺癌中12例LN-R表达阳性，表达率为85.7 %。在无转移的19例中，LN-R表达阳性者7例，表达率为36.8 %。在有转移的甲状腺癌中LN

2、-R阳性表达率明显高于无转移的甲状腺癌(P0.001)。MVD计数在有淋巴结转移的甲状腺癌中为88.69±18.26，在无转移的甲状腺癌中为31.18±14.42，后者MVD计数明显低于前者(P0.001)。在无淋巴结转移的甲状腺癌中LN-R表达阳性者的MVD计数为43.16±10.71，明显高于LN-R表达阴性者(P0.05)。结论LN-R表达及MVD计数与甲状腺癌的侵袭转移有关，可作为甲状腺癌患者的预后指标。关键词：甲状腺肿瘤；层粘连蛋白受体；微血管密度；免疫组化中分类号：R736.1文献标识码：A文章编号：1000-7431(2000)05-0334-03T

3、HE SIGNIFICANCE OF MICROVESSEL DENSITY AND LAMININ RECEPTOR EXPRESSION IN THYROID CARCINOMAZHANG Wei-dong, GAO Xue-qin, SONG Shou-qin, et al.（Institute of Basic Medical Sciences, Shandong Academy of Medical Sciences, Jinan, 250062 China）Abstract：ObjectiveTo investigate the relationship between the l

4、aminin receptor expression and the microvessel density with metastasis of thyroid carcinoma. MethodsThe SP immunohistochemical method was employed to determine LN-R expression level and microvessel count in 33 cases of primary thyroid carcinoma. ResultsThe overall positive rate of LN-L expression in

5、 thyroid carcinoma was 57.6 % (19/33), among which the node positive and negative groups were 85.7 % and 36.8 % respectively (P0.01). On the other hand, microvessel density (MVD) of the node positive and negative groups were 88.69， 18.26 and 31.18， 14.42 respectively (P0.001). In the node negative g

6、roup, if the LN-R expression was positive MVD was higher than that of LN-R expression negative group. ConclusionSince the LN-R expression and MVD show a positive correlation with invasion and metastasis of thyroid carinoma. They were considered to be an important prognostic indicator of thyroid canc

7、er.Key words：Thyroid neoplansms;Lamimin receptor;Microvessel density;Immunohistochemistry侵袭和转移是引起肿瘤治疗失败，导致患者死亡的主要原因。研究表明，层粘连蛋白受体(laminin receptor, LN-R)是连接肿瘤细胞与细胞外基质的重要分子，在肿瘤血管早期生成和肿瘤的侵袭和转移中起了重要作用1，2。在正常情况下LN-R位于细胞的基底部，与基底膜的层粘连蛋白(laminin LN)结合，定位于基底膜上，能够调节细胞的粘附、扩散、迁徙和增殖1。LN-R表达和微血管密度(microvessel den

8、sity MVD)均可作为恶性肿瘤的预后指标已有报道3，但是MVD及LN-R在甲状腺癌中的表达国内尚少见报道。为了探讨MVD及LN-R表达在甲状腺癌中的意义，观察它们之间的相关性及其与甲状腺癌转移的关系。我们检测了甲状腺癌中的LN-R及MVD。材料与方法一、材料收集我院及济南市中心医院1997年内甲状腺癌存档标本33例。其中男性10例，女性23例，男女比为12.3。在33例甲状腺癌标本中乳头状腺癌20例，滤泡腺癌11例，髓样癌2例。有淋巴结转移者14例，无转移者19例。二、试剂兔抗人F-RAg抗体，多克隆抗LN-R抗体(SA-0182,Sigma公司)，SP-9000试剂盒，DAB显色试剂盒均

9、购自北京中山生物技术有限公司。三、免疫组化染色采用SP法。切片厚4 m，常规脱蜡，梯度酒精脱水至蒸馏水后，染LN-R切片入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L，pH 6.0)，92热修复30 min。蒸馏水洗3次。染F-Rag的切片0.1 %胰酶消化，室温10 min，蒸馏水洗3次，用3 % H2O2阻断内源性过氧化物酶室温10 min，蒸馏水洗3次。滴加5 %山羊血清，室温10 min。倾去血清，滴加LN-R抗体1100，F-RAg抗体1100，湿盒内4冰箱过夜。PBS洗3次，每次5 min。加Bio/IgG标记的二抗1100，37 30 min，PBS洗3次，每次5 min，加辣根过氧化物酶标

10、记的链酶卵白素1100，37 30 min，PBS洗3次，每次5 min。DAB显色室温10 min，自来水冲洗，苏木素复染胞核，脱水、透明、封固。用已知阳性切片做阳性对照，阴性对照片用正常山羊血清代替一抗，PBS代替二抗和三抗。四、阳性结果判定LN-R判定对免疫组化法进行评估，癌细胞膜及胞浆中出现棕黄色颗粒状物，切片中着色癌细胞数量10 %判定为阳性。MVD判定选择切片中微血管密度高的区域在200倍的视野中计数。计数5个视野的微血管数，取其平均值。内皮细胞被染成棕黄色。无管腔者一个内皮细胞可计数为一条血管，有管腔者管腔内应少于8个红血球者方可计数。统计学分析各组MVD数据用±s表示

11、，均数用t检验。阳性率用t检验进行统计学处理。结果一、LN-R在甲状腺癌中的表达在33例原发性甲状腺癌中有19例LN-R表达阳性，表达率为57.6 %。阳性反应物成棕黄色颗粒状，主要定位于细胞膜及细胞质中。(见插页第页4)阳性表达与淋巴结转移的关系见表1。表1甲状腺癌淋巴结与LN-R表达的关系淋巴结例数LN-R()例数阳性率(5)转移141285.7无转移19736.8有淋巴结转移者LN-R表达阳性率为85.7 %(12/14)，明显高于无淋巴结转移者的阳性率36.8 %(7/19，P0.001)。二、甲状腺癌中MVD计数内皮细胞胞质内有棕黄色颗粒状阳性反应物。MVD计数与甲状腺癌转移的关系见

12、表2。有淋巴结转移的甲状腺癌中MVD数为88.69±18.26，无淋巴结转移者MVD为31.18±14.42，后者明显低于前者P0.001，有非常显著意义(见插页第页5)。 4甲状腺癌组织中LN-R表达阳性棕黄色颗粒状主要定位于胞膜和胞质中。(IHC×200)5甲状腺癌组织中MVD阳性着色棕黄色颗粒位于血管内皮细胞胞质内。(1HC×200)(4、5正文见第334页)表2甲状腺癌淋巴结与MVD的关系淋巴结状态甲状腺癌MVDx±s转移88.69±18.26无转移31.18±14.42三、LN-R表达与MVD计数在甲状腺癌中的关系

13、在有淋巴结转移的甲状腺癌中LN-R阳性表达率为85.7 %(12/14)，MVD计数为88.69±18.26，均明显高于无转移者的36.8 %(7/19)和31.18±14.42。两者之间呈正相关。在无淋巴结转移的甲状腺癌中LN-R表达与MVD的关系见表3。在无淋巴结转移的甲状腺癌中LN-R表达阳性者的MVD计数为43.16±10.71，LN-R表达阳性无淋巴结转移者的MVD为20.34±11.57，明显低于前者(P0.05)。表3无淋巴结转移的甲状腺癌中LNR表达与MVDLN-R例数LN-R阳性率(%)MVD736.843.16±10.711

14、2020.34±11.57讨论研究证明LN-R是连接瘤细胞与细胞外基质的桥梁。LN-R的高表达，可使癌细胞与细胞外基质的粘附力增强，有利于肿瘤的侵袭和转移。本研究结果LN-R在有淋巴结转移的甲状腺癌的表达率为85.7 %，明显高于无转移者的36.8 %，两者表达率之间的差异有显著意义(P0.001)，与文献报道一致4，5。进一步证实LN-R的表达与肿瘤的生物学行为有关，与甲状腺癌的侵袭与转移有关。MVD与肿瘤的侵袭和转移的关系在乳腺、胃肠道和膀胱癌中得到证实6。动物实验结果显示微血管生成是肿瘤转移所必需的，微血管的形成增加了肿瘤细胞进入微循环的机会，因此肿瘤内MVD可能与肿瘤的侵袭性

15、行为和转移有关7，8。Folkman认为MVD可作为判断乳腺癌预后的独立指标9。本项研究有淋巴结转移的甲状腺癌中MVD为88.69±18.26，明显高于无转移者的31.18±14.42，两组差别有显著性意义(P0.001)。与Weidner等人在乳腺癌中的研究结果一致6。因此提示MVD增加在甲状腺癌转移诊断中有重要的临床意义。一般情况下，有少数淋巴结阴性的甲状腺癌的病人早期即可发生转移，因此筛选这部分高危转移患者尤为重要，一直是许多临床工作者极为关注的问题。本项研究结果表明无淋巴结转移的甲状腺癌中LN-R表达阳性者的MVD明显高于LN-R表达阴性者(P0.05)。提示LN-

16、R表达阴性MVD增高的甲状腺癌患者具有潜在的转移的危险性。Gas等分析了171例淋巴结阴性的乳腺癌患者，其中LN-R无表达或低表达者中MVD也低者有68例，LN-R表达、MVD计数高者有28例，提示在淋巴结阴性的乳腺癌病人中，LN-R表达与MVD增加有一定的相关性，与我们的实验结果一致。因此认为LN-R表达和MVD计数对于选择淋巴结阴性的甲状腺癌患者中的高危病人具有重要意义，可作为预后指标，同时联合检测LN-R和MVD对术后选择治疗方案，如化疗方案或抗血管生成治疗具有指导性意义。(本文编辑：戴峰)基金项目：山东省自然科学基金资助项目(Y94C0319)作者简介：张维东，女，大学本科，研究员。张

17、维东（山东省医学科学院基础医学研究所济南 250062）高雪芹（山东省医学科学院基础医学研究所济南 250062）宋守芹（山东省医学科学院基础医学研究所济南 250062）武利存（山东省医学科学院基础医学研究所济南 250062）刘惠萍（济南市中心医院病理科）参考文献1Pellgrinl R, Martinonc S, Tagliabue E, et al. Prognostic significance of laminin production in relation with its receptor expression in human breast carcinomaJ. Br C

18、ancer Res Treat, 1995, 35:1952Marques LA. Franco LF. Torloni H, et al. Independent prognostic value of laminin receptor expression in breast cancer survivalJ. Cancer Res, 1990, 50:14793Maretignne S, Menard S, Bufalino R, et al. Prognostic significance of the 67-kilodalton receptor expression in human breast carcinomasJ. JNCI, 1993, 85:3984Gasparini G, Barbareschi M, Boracchi P, et al. 67-kD laminin receptor expression adds prognostic information to intra-tumoral microvessel d