动物血液原虫病病原检查技术

1、 动物血液原虫病病原检查技术一、实验目的要求掌握动物血液原虫病的血液涂片技术和染色方法；正确判断各种常见血液原虫的形态特点。二、实验器材（一）仪器设备 生物显微镜（带油镜镜头）、载玻片、注射针头、剪刀、染色缸（二）试剂 姬姆萨氏染料、甘油、甲醇、香柏油（三）实验动物 鸡（四）示教标本 1 伊氏锥虫2 双芽巴贝斯虫3 环形泰勒虫4 卡氏住白细胞虫5 沙氏住白细胞虫三、实验方法、步骤和操作要领（一）姬姆萨氏染色液的配制1姬姆萨氏染色液原液配方。 姬姆萨氏染色粉 0.5g 中性纯甘油 25ml 无水中性甲醇 25ml2 姬姆萨氏染色液原液配制过程。（1）先将姬姆萨氏染色粉置研钵中，加少量甘油充分研磨

2、，再加甘油再研磨，直至甘油全部加完为止。将其倒入棕色小口试剂瓶中，在研钵中加入少量甲醇以冲洗甘油染液，冲洗液仍倒入上述瓶中，再加甲醇再洗再倒入，直至25 ml甲醇全部用完为止。（2）塞紧瓶盖，充分摇匀，而后将瓶置于65温箱中24h或室温35d，并不时摇动，然后过滤到棕色小口试剂瓶中，即为原液。 （二）血液涂片的制作及染色 1血液涂片的制作。（1）薄片法（适合于观察红细胞内虫体，如巴贝斯虫）。 用消毒注射针头刺破鸡的翅下静脉。 用洁净载玻片的一端，从鸡的翅下静脉穿刺处接触血滴表面，蘸取少量血液。 另取一块边缘光滑的载玻片，作为推片。先将此推片的一端置于血滴的前方，然后稍向后移，触及血滴，使血液均

3、匀分布于两玻片之间，形成一线。 推片载玻片与血片载玻片成3045°角，平稳地向前推进，使血液接触面散布均匀，即成薄的血片。 抹片完成后，立即置流动空气中干燥，以防血球皱缩或破裂，并加甲醇固定，待干。（2）厚滴法（适合于观察血浆内虫体，如伊氏锥虫）。 取血液12滴置洁净载玻片上。 用另一块载玻片之角，将血滴涂散至直径1cm即可。 置室温中待其自行干燥(至少经1h之久，否则血膜附着不牢，染色时易脱)。 染色前先将血片置于蒸馏水中，使红细胞溶解，血红蛋白脱落，血膜呈灰白色为止，再进行染色。2血液涂片的染色过程。（1）血片用甲醇固定2 min。（2）将血片浸于用10份蒸馏水加1份染液稀释的染

4、色液缸中30 min (过夜最好)。或将蒸馏水与染液按21稀释好的染色液直接滴加于血片上，染色10 min 。（3）血片取出后，用洁净的水冲洗。待干镜检。附：血液涂片的制作及染色流程图。（图16-1） 图16-1 血液抹片的制作及染色流程图四、实验注意事项1配制染色液时姬姆萨氏染料必须充分研磨。2采血前先用酒精棉消毒待干，以免皮屑污染血片和酒精溶血。3取血滴时必须在针头刺破后流出的表层血液用玻片迅速蘸取，以免血液凝固。4注意在病畜出现高温期，未作药物处理前采血，以提高虫体检出率。5涂片时血膜不宜过厚，使红细胞均匀分布于玻片上。6血片必须充分干燥后再用甲醇固定，以免血膜脱落。五、实验报告如何制作

5、染色效果好且无杂质污染的血液涂片？试作分析、阐述。附：参考资料 1家畜常见血液原虫的形态特征描述。（1）伊氏锥虫。伊氏锥虫寄生于动物血浆内，虫体呈纺锤或柳叶状，体长1824µm，宽12µm。前端比后端更尖。经姬姆萨染色后，虫体呈淡蓝色。在显微镜下可看见下列几部分构造： 原生质：浅蓝色部分。 核：在虫体中部呈紫红色椭圆形。 副基体：在虫体后端呈紫红色的小圆点。 波动膜：在虫体的一侧呈波状。 鞭毛：在虫体后端，从付基体附近的毛基体开始围绕波动膜边缘，直到虫体的前端游离，呈细长鞭毛状。（图16-2、图16-3）图16-2 锥虫模式图1.核 2.波动膜 3.副基体 4.生毛体 5.

6、颗粒 6.空泡 7.鞭毛图16-3 血液涂片中的锥虫 （2）双芽巴贝斯虫。双芽巴贝斯虫寄生在红细胞内。虫体较大，有梨形、环形、椭圆形、变形虫形等。典型虫体呈双梨形，细的一端联在一起成锐角排列。虫体大于红细胞半径，经姬姆萨染色后，原生质浅蓝色，边缘较深，有二团紫红色的染色质。（图16-4）图16-4 血液涂片中的双芽巴贝斯虫（3）环形泰勒虫。环形泰勒虫寄生在牛的淋巴细胞、巨噬细胞及红细胞内。配子体呈小环形，短棒状或逗点状。在每个红细胞中通常有15个虫体，大小为0.72.9µm，染色后原生质呈浅蓝色，染色质呈紫红色。（图16-5）裂殖体，又称石榴体，有不同形状和大小，存在于淋细胞的胞浆中或淋巴液中。通常可看到浅蓝色的原生质背景上有暗紫色数目不等的染色质核。（图16-6）图16-6 泰勒虫裂殖体（石榴体）图16-5 泰勒虫配子体 2家禽常见血液原虫的形态特征描述。（1）卡氏住白细胞虫。卡氏住白细胞虫配子体寄生在鸡的血细胞内。配子体刚侵入红细胞时呈圆点状或逗点，每个红细胞内可有13虫体（图16-7）。随着虫体的发育长大，红细胞的胞浆及胞核萎缩消失，配子体变为近圆形，大小为15.5×15.0；有一紫红色的核仁（图16-8）。图16-7 卡氏住白细胞虫第期配子体图16-8 卡氏住白细胞虫第期配子体（2）沙