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1、实验三实验三 酶促转氨反应酶促转氨反应一一 实验原理实验原理 v氨基酸分子上的氨基转移到氨基酸分子上的氨基转移到-酮酸分子上的酮酸分子上的反应称转氨反应。由转氨酶催化的转氨反应是反应称转氨反应。由转氨酶催化的转氨反应是氨基酸代谢的重要反应之一。经转氨后，原来氨基酸代谢的重要反应之一。经转氨后，原来的氨基酸变成了酮酸，而原来的酮酸则变成新的氨基酸变成了酮酸，而原来的酮酸则变成新的氨基酸。的氨基酸。v在动物机体中活力最强、分布最广的转氨酶有两种：一种为谷氨酸丙酮酸转氨酶（简称GPT），另一种为谷氨酸草酰乙酸转氨酶（简称GOT）。它们的催化反应如下：v GPTv丙氨酸+-酮戊二酸 谷氨酸+丙酮酸v此

2、反应最终产物都是丙酮酸。测定单位时间内丙酮酸的产量即可得知转氨酶的活性。 丙酮酸可与2,4 二硝基苯肼反应，形成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色。再与同样处理的丙酮酸标准液进行比色，计算出其含量，以此测定转氨酶的活性。 丙酮酸 + 2,4 二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（棕红色） v1. 称取称取0.3g叶片叶片用剪刀将叶片剪碎用剪刀将叶片剪碎放于研钵中。放于研钵中。v2. 量取量取4ml磷酸缓冲液，分三次加入研钵中磷酸缓冲液，分三次加入研钵中（2，1，1），研磨成浆状，到入离心管中，），研磨成浆状，到入离心管中，5000rpm 离心离心10min, 上清液即为酶粗提液。上清液即为酶粗提液。

3、二二 实验步骤实验步骤3. 取取4支试管支试管编号编号按下表要求加样按下表要求加样:试管号试管号1(空白管空白管)2(对照管对照管)3(标准管标准管)4(样品管样品管)酶粗提液（酶粗提液（ml）0.10.1Ala和和-酮戊二酸酮戊二酸(ml)0.5标准丙酮酸液标准丙酮酸液(ml)0.5磷酸缓冲液磷酸缓冲液(ml)0.60.50.14.加样完毕加样完毕 摇匀摇匀 用橡皮筋将用橡皮筋将4支支试管扎牢试管扎牢 置于置于40水浴中加热水浴中加热30min。5.取出冷却取出冷却 每支试管各加每支试管各加0.5ml 2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼 反应反应5min 再每支试管再每支试管各加各加5ml 0.4N的的 NaOH溶液溶液 摇匀摇匀 静静止止10min 在在=530nm下，测量吸光度下，测量吸光度OD值。值。三、计算：三、计算：231SXDDDVCC）（按下式计算丙酮酸生成量：按下式计算丙酮酸生成量：Cx=样品中丙酮酸含量样品中丙酮酸含量 Cs=标准丙酮酸溶液含量标准丙酮酸溶液含量(0.002mM/ml) V=标准丙酮酸溶液

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