越橘组培苗生根培养的正交试验

1、现代农业科技2009年第11期越橘(Vaccinium vitis-idaea L.又称蓝莓,杜鹃花科越橘属植物,是具有较高经济价值和广阔开发前景的新兴果树树种。成熟的果实呈红色或蓝色,越橘果实富含V E、V A、V B、SOD、自由基、熊果苷、花青苷等特殊成分以及钾、铁、锌、钙等微量元素,具有抗癌、增强心脏功能、明目、延缓脑神经衰老等药用价值和保健功能1。在美国、智利、日本、德国、加拿大等国,它的生产也已进入了产业化栽培阶段。我国近几年蓝莓栽培的面积也在不断扩大。然而由于苗木供应不足,目前栽培面积还相当有限。高效育苗技术的研究将有助于我国越橘的产业化发展。在组织培养中,组培苗最后移栽成活率的

2、高低,直接关系到生产的效益。影响这一效益的因素众多,其中组培苗在培养瓶内的生根率与所长根的质量就是其中一项。基于此,本研究尝试采用不同的激素及其浓度配比,借助正交设计方法,对越橘组培无根苗进行培养瓶内生根,筛选出最适宜组培苗生根的培养基配方,促进组培苗更好生根,进而为实现顺利移栽创造条件,指导产业化发展。1材料与方法1.1材料选取及处理越橘材料为购买的矮生越橘品种美登(Blomidon的二年生组培苗。剪取健壮无病虫害的当年生枝条,剪成34cm 长带芽茎段,去掉叶片,自来水冲洗干净。无菌条件下将冲洗干净的茎段放入70%乙醇溶液中浸泡30s,无菌水冲洗2 3次,再用0.1%升汞溶液浸泡10min,

3、无菌水冲洗4次,切成1cm左右小段接入接种培养基WPMA(改良WPM培养基 +ZEA1.0mg/L+蔗糖20g/L。培养温度(251,每日光照16h,光强15002000Lx。将初代培养基上诱导生成的芽转接于继代扩繁培养基,每3周继代1次,以获得优质健壮小苗,为进一步生根作准备。继代培养20d后,取高2.5cm 左右的越橘再生苗茎段作为供试材料。再生苗扩繁培养基与接种培养基成分相同。1.2方法1.2.1试验设计。采用L16(45正交试验设计,共16个处理,试验因子见表1。每个处理7瓶,每瓶接种78个茎段。1.2.2培养条件。培养温度为白天2425,夜晚22,光周期16h,光源为日光灯光源,光照

4、强度2000Lx。1.2.3统计方法。接种2周后,观察不同处理的生根数,计算平均生根率,并对统计结果进行方差分析。2结果与分析由表2可知,不同处理组合之间越橘组培苗的生根率存在差异。在基本培养基为1/2WPMA,附加IBA2.0mg/L、NAA 0.5mg/L、蔗糖20g/L和活性炭时,越橘组培苗的生根率为45.23%,显著高于其他15个组合。极差分析结果表明,这5个因素对于越橘生根影响的主次关系依次为活性炭、IBA 浓度、基本培养基成分、NAA浓度和蔗糖浓度。方差分析结果表明(见表3,添加活性炭是影响越橘生根的高度显著因素,IBA浓度对越橘生根率影响较显著,基本培养基对越橘生根的影响不显著。

5、各因素及其水平对越橘生根有不同的影响。基本培养基成分对越橘生根率影响程度依次为1/2WPMA、1/2WPM、WPMA和1/2MS,但是各水平间差异不显著。IBA浓度是影响越橘生根的较重要的因素。IBA浓度为2.0mg/L时,生根率最高。方差分析结果中NAA浓度对越橘生根影响不显著,NAA0.5mg/L时,生根率相对较高。蔗糖浓度也是影响较弱的一个因素,生根率相对较高的浓度是20g/L,与通常注:WPMA培养基为以WPM培养基为基础的改良培养基。表1试验因子水平11/2WPMA0010+2WPMA 1.00.215-31/2MS 2.00.520+41/2WPM 3.0 1.030-基本培养基吲

6、哚丁酸(IBAmg/L萘乙酸(NAAmg/L蔗糖mg/L活性炭g/L 水平因子越橘组培苗生根培养的正交试验刘建新(黑龙江省农科院生物技术研究所,黑龙江哈尔滨150086摘要利用正交试验设计研究了不同基本培养基、不同浓度的吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖以及活性炭等因子对越橘组培苗生根的影响。结果表明:5个因子对越橘再生苗生根的影响程度依次为活性炭、吲哚丁酸、基本培养基、萘乙酸和蔗糖。其中,活性炭的添加对越橘的生根有极显著影响,吲哚丁酸的影响较显著,基本培养基有影响但不显著。越橘组培苗生根的适宜培养基组合为1/2WPMA+IBA2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭1g/L。关键词

7、越橘;组培苗;生根培养;正交试验;培养基筛选中图分类号S663.904+3文献标识码A文章编号1007-5739(200911-0036-02Orthogonal Experiment on Rooting Culture of BlueberryLIU Jian-xin(Biotechnological Research Institute,Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Harbin Heilongjiang150086 Abstract A set of orthogonal experiment was carried on

8、blueberry in order to search the infulence of basic medium,IBA,NAA,sucrose and carbon on root induction of tissue culture.The results showed that the influence of the five factors were followed by carbon,IBA,basic meduim,NAA and sucrose.The best media component for rooting culture of blueberry was1/

9、2WPMA+IBA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+sucrose20g/L+carbon1g/L.Key words Blueberry;tissue culture;rooting culture;orthogonal experiment;filter medium作者简介刘建新(1976-,女,黑龙江齐齐哈尔人,助理研究员,主要从事各种作物组培和分子生物学研究工作。收稿日期2009-04-10园艺博览36现代农业科技2009年第11期表5抗逆性调查树种树干冻裂%腐烂病煤污病蚜虫叶斑病5龄林前5龄林后褐斑病黑湿病北京杨28+无无+无无青杨9无无+(上接第35页度的增加而提高。2.3抗

10、逆性分析在同一立地条件下、同一林分内,经调查,北京杨与青杨相比,其抗逆性各有不同(见表5。北京杨抗叶部病害能力较强,而青杨抗树干腐烂病比北京杨强。3结论与讨论试验结果表明,北京杨与青杨相比,无论生长量、形质特征、叶斑病抗性等方面其速生丰产性均优于青杨。对北京杨的育苗工作及造林问题,在青海省过去由兴到衰,经历了较长曲折而复杂的过程。本试验结果表明,它依然是一个性状稳定的优良品种,在适宜地方可有计划地积极推广。在同一立地条件下,北京杨造林密度适当低于青杨,更能发挥其生态学特性及速生丰产的潜力。造林过程中,要特别注意幼树的水热平衡和腐烂病的大量发生,在较寒冷地区还应注意预防树干冻裂。4参考文献1钮开

11、明.杨树速生丰产林栽培实用技术J.现代农业科技,2008(1:27.2汪海洋.杨树速生丰产栽培主要技术措施J.安徽林业,2004(6:15.3胥谦,张蕾.不同造林密度对杨树干材出材率的影响J.农村实用技术,2008(3:44.4宋丛文,罗治建,梁华东,等.农田营造杨树速生丰产林对地力的影响及效益分析J.湖北林业科技,2004(S1:48-53.进行生根培养的用的蔗糖浓度相同。本试验中影响最显著的因素是活性炭,试验结果表明,添加活性炭的组合,无论其培养基成分如何,越橘组培苗生根率都明显高于不加活性炭的组合。说明根部的暗环境对于越橘生根非常重要。在实际的观察中,虽然3号组合与6号组合的生根率都能达

12、到40%以上,但从图1可以看出,3号组合的根数量较多,长度比较长,根系的长势也更强壮,根系生长状况比6号组合要好。将L16(45正交试验进行单因子效果分析,最优化的组合为1/2WPMA+IBA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭1g/L ,与第3号试验的组合正好符合。3结论与讨论试验的结果表明,除活性炭和IBA 外,NAA 、基本培养基和蔗糖的不同水平对越橘生根影响的差异不显著,说明越橘生根要求的条件不高,属于比较容易生根的植物。在实际生产中,由于从培养瓶取苗到移栽的过程中非常容易损伤茎、叶柄和根系,影响移栽成活率,一般不用无菌操作进行生根培养。通常将增殖后的外植体

13、切下经IBA 粉剂2000mg/L 速蘸处理或IBA 溶液10mg/L 浸泡后直接扦插于基质中,生根成活率可达90%,但所需时间较长,约40d 2。本试验中最优化培养基进行生根培养,2周内生根率可达50%,20d 左右即可进行移栽,且生根率达到85%以上。如果能减少移栽过程中人为的损伤,将不失为一个很好的方法,有待于科研和技术人员的进一步研究和试验。4参考文献1李亚东.越橘栽培与加工利用M.长春:吉林科学技术出版社,2001.2马艳丽.越橘组培快繁技术研究J.吉林林业科学,2005,34(1:3-5.3金彦磊,王秀华,杨永富,等.越橘离体培养的组织学研究J.黑龙江八一农垦大学学报,2009(1

14、:25-29.4柳振亮,赵素华,黄凯,等.不同品种越橘容器苗生长、成花习性观察J.河北林果研究,2007(3:318-320.5马怀宗,李亚东,刘庆忠,等.高丛越橘离体叶片再生植株研究初报J.东北农业大学学报,2004(2:212-215.编号基本培养基吲哚丁酸(IBA mg/L 萘乙酸(NAA mg/L 蔗糖mg/L 活性炭mg/L 生根率%21/2WPMA 1.00.215-10.8731/2WPMA 2.00.520+45.2341/2WPMA 3.0 1.030-18.375WPMA 00.220-20.006WPMA 1.0030+40.417WPMA 2.0 1.010-27.508WPMA 3.00.515+19.5191/2MS 00.530-10.00101/2MS 1.0 1.020+29.41111/2MS 2.0015-12.00121/2MS 3.00.210+10.20131/2WPM 0 1.015+38.78141/2WPM 1.00.510-17.24151/2WPM 2.00.230+30.56161/2WPM 3.0020-9.52L128.0022.9122.3519.4525.59L224.0025.6317.9120.2914.47L315.4028.8223.0026.0434.80L424.0314.4028.522