免疫学检验2019考试重点总结

1、免疫学检验 1 1 .T.T 细胞：T T 细胞是在胸腺中发育成熟的淋巴细胞。 2 2 .B.B 淋巴细胞：B B 淋巴细胞是在骨髓内发育成熟的细胞。 3 3 .最常见的主要辅佐细胞有单核吞噬细胞和树突状细胞。 4 4 .抗原的特性：免疫原性和免疫反应性。 5 5 .影响抗原免疫性的因素 抗原因素：1 1.异质性指抗原与机体成分结构的差异程度，是作为 抗原的必要条件。2,2,抗原分子的理化性质，如分子量大小，化学组成和结构，通常环状分子蛋白质较直链分子蛋白质免疫原性强，还有分子构像与易接近性，以及物理状态。 (2)(2)机体因素：( (宿主因素)1)1.遗传因素 2 2.年龄、性别与健康状态

2、3 3.抗原剂量及进入机体的途径，进入机体途径以皮内注射免疫原性最佳，皮下注射次之，肌肉注射、腹腔注射、静脉注射再次，口服免疫原性最差。 6 6 .抗原表位：又称抗原决定簇，指存在于抗原分子表面的，能与 TCR/BCTCR/BC越抗体特异性结合，决定抗原特异性的特殊化学基团。 7 7 .不完全抗原：仅有免疫反应性而无免疫原性的物质，又称半抗原, 多为一些简单的小分子物质、药物等。 8 8 .根据抗原刺激 B B 细胞产生抗体时是否需要 T T 细胞辅助分类分为：胸腺依赖性抗原和胸腺非依赖性抗原。 M2-tm4E与IT的区别 ii,能 干1依 mA T图利用U绵内点心 息舌需 理胤辅助 必需 桓

3、心小随 多用事白域均成 无快.击*帕 产号就弊的史中 IMkG等 免痕记比 可产生 不产生 我瓶而答 悴造免疫部刑制免境 体雁亮度 9 9 .超抗原：是指能直接非特异性激活某些 T T 细胞亚型或 B B 细胞亚型的物质。 超抗原可分为 T T 细胞超抗原和 B B 细胞超抗原，T T 细胞超抗原如金黄色葡萄球菌肠毒素 A A E E 等；B B 细胞超抗原如金黄色葡萄球菌 A A 蛋白和人类免疫缺陷病毒。 1010 .免疫球蛋白的生物学功能 (1)(1)免疫球蛋白 V V 区的功能：识别弁特异性结合抗原，在体内可直接发挥中和作用(中和病毒、毒素)，以阻止病原入侵；但不能直接溶解或杀伤带有特异

4、抗原的靶细胞，要借助 C C 区的作用，才能清楚病原微生物或者导致病理损伤。 (2)(2)免疫球蛋白 C C 区的功能：1.1.激活补体 2 2 .与细胞 FcFc 受体结合发挥多种生物学作用： 调理作用 抗体依赖细胞介导的细胞毒作用 ADCCS)ADCCS)介导 I I 型超敏反应 3 3 .穿过胎盘和粘膜 3.13.1 IgGIgG 为单体分子，是血清和细胞外液中含量最高的 IgIg, ,约占血 清总 IgIg 的 75%75%- -80%80% IgMIgM 为五聚体，是血清中分子量最大的 Ig,Ig,又称巨球蛋白。也是个体发育过程中最早合成和分泌的 Ig,Ig,不能通过胎盘，若脐带血或

5、新生儿血清中其水平升高提示有胎儿有宫内感染，体液免疫应 答中，其水平升高提示有近期感染。天然的血型抗体为 IgMIgM；IgMIgM 也参与IIII、IIIIII 型超敏反应。一般不能通过血管壁，主要存在于血液中，IgMIgM 缺乏易导致败血症，其激活补体和免疫调理作用较 IgGIgG 强，在菌血症和败血症的抗感染中发挥重要作用。 IgEIgE 的临床意义：IgEIgE 主要由呼吸道和消化道黏膜固有层的浆细胞产生，对肥大细胞及嗜碱粒细胞具有高度亲和性，为亲细胞性抗 体；其 FcFc 段能与肥大细胞及嗜碱粒细胞上的高亲和力 IgEFIgEF 没体 结合。介导 I I 型超敏反应。止匕外，IgEI

6、gE 可能与机体抗寄生虫免疫有关。在特异性过敏反应和寄生虫早期感染患者血清中，特异性 IgEIgE 水平可升高。 .抗原抗体的结合力：（1 1）库伦引力；（2 2）范德华引力（引力最小）；氢键结合力；（4 4）疏水作用（提供的作用力最大）。 带现象：在等价带前后分别为抗体过剩或抗原过剩，形成的沉淀 物质少或无，这种现象称为带现象。出现抗体过剩是为前带，出现抗原过剩时为后带。 意义：只有当抗原抗体比例合适时，才易出现可见反映。 .影响抗原抗体反应的因素： 反应物自身因素 (1)(1)抗原：抗原的理化性状、抗原表位的种类和数目都可影响抗原抗体反应的结果。如颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象；可

7、溶性抗原与相应抗体结合后形成沉淀现象；粗糙型细菌在生理盐水中易出现自凝等现象。 (2)(2)抗体：抗体的来源；抗体的特异性和亲和力。 反应条件 (1)(1)电解质；(2)PH:(2)PH:抗原抗体反应一般以 6 68 8 为宜，过高或过低都会影响抗原抗体的理化性质，从而导致不发生发应或者出现非特异性凝集；(3)(3)温度：最适为 3737C C；(4)(4)抗原抗体比例：抗原抗体在比例最合适时才易出现可见反应。 .凝胶层析又称凝胶排阻层析、分子筛层析等。它是以各种多 孔凝胶为固定相，利用物质的相对分子量不同而达到分离的一种层析技术。 .亲和层析是通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶 性载

8、体上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子 进行分离纯化。纯化抗原先用盐析法，再用亲和层析法。 由于亲和吸附的特异性很高，亲和层析一次纯化即可得到很纯的物质。 .电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动。 产生原因：固体支持物为多孔物质，且带有可解离的化学基团， 因此常吸附溶液中的正或负离子，使溶液相对带负电或正电。如通常滤纸表面可有一些竣基， 琼脂可有一些硫酸基， 而玻璃表面可有 SiSi- -OHOH 基团等，这些基团电离后使支持介质表面带电，吸附一些带相反电荷的离子，在电场的作用下向电极方向移动，形成介质表面溶液的流动，这种现象就是电渗。由于电渗现象往往与电泳同事存在，所

9、以带电颗粒的移动同时受电泳和电渗的影响，如果电渗方向和待分离分子的电泳方向相同，则加快电泳速度；反之减缓。在选择支持物时应尽量避免选用高电渗作用的物质。 .多克隆抗体：是用免疫原免疫动物获得的抗体，又称抗血清或免疫血清。由于天然抗原分子中常含有多种不同的抗原决定簇，刺激机体免疫系统，可以使体内多个 B B 细胞克隆被激活，产生针对多种抗原决定簇的免疫球蛋白，获得的抗血清是含有多种抗体的混合物，因此称为多克隆抗体，也称为第一代抗体。 .免疫佐剂：同抗原一起或预先注射到机体内，能增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质，称为免疫佐剂。 目的:为了提高抗原的免疫原性，从而

10、增强体液免疫和细胞免疫的水平，获得高效价抗体。 弗氏完全佐剂：石蜡油+羊毛脂+卡介苗；弗氏不完全佐剂：石蜡油+羊毛脂 .单克隆抗体：是利用 B B 淋巴细胞杂交瘤技术获得的，由同一细胞（单个杂交瘤细胞）合成和分泌，在理化性质、分子结构、遗传标记和生物学特性均完全相同的抗体，也叫第二代抗体。优 点：结构均一，纯度高，特异性强，效价高，交叉反应少或无， 利于实验室标准化，可大量生产供应，制备成本低；缺点：其鼠 源性对人具有较强的免疫原性， 反复用于人体后可诱导产生人抗鼠的免疫应答，导致集体组织的免疫病理损伤，甚至导致机体组 织的免疫病理损伤。 .饲养细胞：在体外培养条件下，单个或少数分散的细胞不易

11、顺利生长繁殖。当加入一定量其他活细胞后，常可促进原有少数细胞的繁殖，这种加入的细胞称为饲养细胞。常用小鼠腹腔细胞或大鼠和豚鼠的腹腔细胞，其中的巨噬细胞还有清除死亡细胞的作用。此外，还可用小鼠的脾细胞或胸腺细胞或大鼠和豚鼠的腹腔细胞。在制备 McAbMcAb 的过程中，许多环节需要加饲养细胞，如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中。 .沉淀反应：指可溶性抗原与相应抗体特异性结合，在合适的条件下形成肉眼可见沉淀物的现象。 .凝胶沉淀实验可溶性抗原、抗体在含电解质的凝胶内自由扩散形成浓度梯度，扩散过程中二者相遇而发生特异性结合，在比 例适当处出现可见的沉淀线或沉淀环。常用的凝胶有琼脂、琼脂 糖、

12、聚丙烯酰胺等。 .对流免疫电泳：是将双向免疫扩散和电泳结合，在直流电场中加速定向扩散的双向免疫扩散技术。 原理：在 PH8.6PH8.6 的琼脂凝胶中，抗原蛋白等电点（4545）较低，带较多的负电荷，且分子较小，向正极的泳动速度大于向负极的电渗，抗原泳向正极；抗原蛋白等电点较高，带较少的负电荷， 且分子较大，向正极的泳动速度小于向负极的电渗，抗体泳向负 极。 .免疫电泳：是将蛋白质区带电泳和双向免疫扩散结合的免疫化学分析技术。 原理：由于不同的抗原蛋白质分子所带电荷、分子量及分子构型 有差异，在琼脂凝胶中进行电泳时，迁移速率和方向不同。先利用区带电泳将样品中不同的抗原蛋白质分子在琼脂凝胶内分离

13、成若干区带， 然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应抗血清，与已分离的抗原在琼脂凝胶内作双向免疫扩散，各种抗原与抗体 特异结合，在二者比例合适处形成弧形沉淀线。根据沉淀弧的数 量、形态和位置，与已知标准抗原抗体生成的沉淀弧比较，分析样品中所含抗原成分及性质。 .免疫浊度测定的基本原理：是抗原、抗体在特殊缓冲液中反应而又比例合适（抗体过量）时，形成的小分子可溶性免疫复合物（v19Sv19S）在增浊剂（破坏胶体的聚合剂和电解质）的作用下， 迅速形成免疫复合物微粒（19S19S）, ,使反应液出现浊度。在抗体过量且固定的条件下，形成的免疫复合物量随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增强，即待测抗原量

14、与反应后溶液的浊度呈正相关。 .伪浊度形成的原因： （1 1）标本：混浊、高血脂、长期保存或反复冻融、处理不当。 （2 2）试剂：抗体效价低于 1:201:20 会增加伪浊度；抗血清灭活 处理；抗血清含有交叉反应性抗体；试剂污染和变质 PEGPEG 浓度过高引起血清中杂蛋白的非特异性共沉。 （3 3）器材：不够清洁、尘埃污染等，尤其是比色杯。 （4 4）其他：缓冲液的离子类型与强度、PHPH 及反应温度等。 减少或消除伪浊度的方法标本新鲜，必要时离心或稀释标 本后测定；避免加热灭活抗血清和标本；容器清洁；设置试齐心样品和抗血清对照等。 .凝集现象的影响因素：电解质、PHPH、温度、抗体与抗原的

15、比 例。 1-6-1捱一反应和沉淀反应的驾各 不可点晓集反应航淀反应 一抗明性或粒性五俞白怕抗原致敬颗粒工曲血藤而桎*耳空透明皎灰的波 反应时间几分钟至十几分钟触小时至秋天 稀释对象稀释抗体稀样抗原 观察现象量集块液体变清沉淀物 .抗球蛋白试验又称 CoombsCoombs 试验，用于检测抗红细胞不完全抗体。 方法：直接 CoombssCoombss 实验：用于检测已粘附在红细胞标本的 不完全抗体 间接 CoombssCoombss 实验：用于检测在血清中游离的不完全抗 体 .协同凝集试验：金黄色葡萄球菌细胞壁中含有的 A A 蛋白（SPASPA 具有与IgGIgG（IgG3IgG3 除外）的

16、 FcFc 段结合而不影响 FabFab 段活性的特性， 利用金黄色葡萄球菌与 IgGIgG 抗体的连接作用制成致敏载体所进行的凝集试验即为协同凝集试验。 .免疫溶血反应：是红细胞-抗体复合物激活补体，导致红细胞溶解的反应。参与的成分有绵羊红细胞、抗红细胞抗体、补体。 .血清总补体活性（CH50CH50 陕验原理：绵羊红细胞与相应抗体结合成的复合物可活化补体经典途径，使补体 C1C1- -C9C9 相继在红细胞 表面发生级联反应而形成跨膜小孔，细胞外水分渗入，导致红细 胞胀裂而发生溶血。当红细胞和溶血素量一定时，溶血程度与补体活性呈正相关。以溶血百分率为纵坐标，血清量为横坐标绘制补体介导的溶血

17、反应曲线，曲线呈“SS形。以 50%50%溶血作为终点要比 100%100%更敏感，因此该方法称为补体 50%50%容血（CH50CH50）实验。 .补体结合试验分属三个系统：1 1、反应系统，包括已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原）；2 2、补体系统、3 3 指示系统，包括绵羊红细胞和相应抗体，试验时常将二者预先混合，结合成致敏绵羊红细胞。 直接补体结合试验的原理：若反应系统中抗原与抗体特异结合，形成的抗原-抗体复合物能将同时加入的补体激活，消耗掉补体。当再加入指示系统时，反应液中已无游离 ut,ut,不出现溶血，为补体结合试验阳性，待检标本中含有已知抗原（或抗体）相应抗体（或抗原）。反之

18、，为补体结合试验阴性。 .ELISA.ELISA 的基本原理是：抗原或抗体吸附固相载体的表面，并保持其免疫活性；抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗 体，任然保持其免疫活性和酶催化活性，测定时，待测的抗体 或抗原和酶标抗原或抗体按一定的步骤与固相抗原或抗体反应； 加入酶的底物，酶催化底物生成有色产物，有色产物的量与样品中待测抗体或抗原的量呈一定比例，通过定性或定量 测定有色产物量，即可确定样品中待测物质含量。 双抗体夹心法：是检测抗原最常见的方法，其步骤是：将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质；加入待测样品使之与固相抗体反应，样品中的抗原与 固相抗体结合，形成固相

19、抗原抗体复合物，洗涤除去未结合物质；加入酶标抗体，固相免疫复合物的抗原与酶标抗体结合，彻底 洗涤除去未结合的酶标抗体；加入底物，固相载体上的酶催化底物生成有色产物。根据颜色反应的程度，对待测抗原定性或定量。该法只适用于二价或二价以上的较大分子抗原，不能用于半 抗原等小分子的测定。 .捕获法测 IgMIgM 抗体：捕获法用于检测特异性的 IgMoIgMo 血清中针对抗体某种抗原的特异性 IgMIgM 和 IgGIgG 常同时存在，IgGIgG 的存在将干扰 IgMIgM 抗体的测定。因此，测定 IgMIgM 抗体需采用捕获法，先将血清中所有的 IgMIgM（特异性和非特异性 IgMIgM）捕获固

20、定在固相上，去除 IgGIgG 后，再测定特异性 IgMoIgMo具操作步骤：抗 H H 链（或抗- -IgMIgM 抗体）包被在固相上，形成固相抗- -以链（或抗- -IgMIgM 抗体），洗涤除去未结合的抗体。加入稀释待测样品，样品中所有的 IgMIgM 与抗-心连结合，洗涤除去未结合的物质。加入特异性抗 原，它只与固相上特异性的 IgMIgM 结合。洗涤除去未结合的抗原。 加入针对特异性抗原的酶标抗体，使之与之结合在固相上的 抗原结合，洗涤除去未结合的酶标抗体。加底物显色，若有 颜色显示，则表示待测样品中有特异性的 IgMIgM 抗体存在。 .荧光的猝灭：荧光的猝灭是指荧光物质的荧光辐射

21、能力在收到激发光较长时间的照射后会发生减弱的现象。 .间接染色法：以荧光色素标记抗球蛋白抗体鉴定未知抗原或抗体。染色分两步，首先是未标记抗体（即第一抗体）与抗原反应，然后是标记的抗球蛋白抗体（即第二抗体）与第一抗体反应。第一抗体是第二抗体的抗原。方法为第一步用已知第一抗体与未知抗原反应，或用未知第一抗体与已知抗原反应，一定时间后洗 脱掉未结合的第一抗体；第二步加上标记的第二抗体，如果第一抗体与抗原发生了特异性结合，第二抗体就会和抗原抗体复合物中抗体发生结合，从而达到检测未知抗原或抗体的目的。 又称双抗体法，用一种个荧光标记的抗球蛋白抗体，能检查多种 昂抗原抗体的复合物，敏感性较高，但非特异性干

22、扰因素也相对较多 .时间分辨荧光免疫测定基本原理：以镯系元素铺（EuEu）螯 合剂作荧光标记物，利用其长寿命的特点，荧光测量时间，待 短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定，所得信号完全为 长寿命镯系螯合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。 特点：TRFIATRFIA（时间分辨荧光免疫测定）具有较高的灵敏性和特异性：荧光衰变期长；激发光和发射光之间有很大的位移；激发光波范围较宽，发射光波范围较窄。荧光标记的相对比活性高。 *UM臾JftJtJRHtr与磔射完总分物的It帔 电座取射分析 独H盟吨5rM 标记劫 抗体 心 太记州用， 过汽 的量 反应力或 位维结合反应参数与特漏 竞争

23、性结合.反应霞敦与柞到 抗原让成正比 国向#克 斡怏 校情 B.F舟牌方法 国相尻体等 第二抗体等 特卸也 A 般岛 岗 牧高 .外周血的单个核细胞（PBMCPBMC 包括淋巴细胞和单核细胞。 密度梯度离心法：利用 PBMCPBMC 在比重上与外周血中其他细胞的差 异进行等密度梯度离心。细胞体积越大，细胞在一定的离心场中的离心速度越高。由于粒细胞和红细胞比重大于单个核细胞，同 事红细胞在高分子聚蔗糖的作用下发生凝聚而体积增大，因此红 细胞称将速度快鱼 PBMC,PBMC,使 PBMCPBMC 与其他细胞在液相中分层而达到分离的目的。 .淋巴细胞活力测定常用台盼蓝染色法，原理：台盼蓝是一种阴离子

24、染料，活细胞由于膜完整染料不能通过，故不着色，但死细胞细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使细胞着色呈蓝色。 计数 200200 个细胞，通常活性率应在 95%95%以上。 .T.T 淋巴细胞增殖试验就是利用特异性或非特异性的刺激因 子，刺激 T T 淋巴细胞使其分化，观察细胞增殖的程度，反映 T T 淋巴细胞群的免疫应答功能。 方法: :H H- -TdRTdR 掺入法 MTTMTT 比色法 .B.B 淋巴细胞功能的体内检测：（1 1）血清中免疫球蛋白含量测定； （2 2）特异性抗体产生能力的测定；血清中血型抗体测定 抗体生成细胞的测定：反向溶血空斑形成试验是体外检测抗体形 成细

25、胞的方法。溶血空斑数代表抗体形成的细胞数。 .细胞因子：是由活化免疫细胞和某些基质细胞分泌的，能介导和调节免疫反应、炎症反应的小分子多肽。 细胞因子的检测方法分为三大类： 生物学测定法是检测细胞因子某种特定的生物学活性，而无生物活性的细胞因子前体分子、降解产物、聚合物以及与蛋白质或可溶性受体结合的细胞因子均不能用此法检出； 免疫学测定法是用免疫学检测技术，如酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、酶联免疫斑点试验和免疫印迹等，将细胞因子作为蛋白质抗原，用相应的特异性抗体进行测定；此法所测定的是细胞因子的蛋白含量，与其生物活 性并不一定成正比；分子生物学测定法是采用分子生物学技术，检测细胞因子相应的 D

26、NADNA、RNARNA 反映的是细胞因子基因及其表达情况。虽然这三种方法所反映的是细胞因子的不同方面，测定结果也不一定平行，但它们却是相互关联、互为补充的，在实际工作中常需要这些方法的综合分析。 .单克隆 IgIg 血症：也称 M M 蛋白，是由于单株浆细胞异常增生，产生大量的分子结构相同的 Ig,Ig,属同质性 Ig,Ig,这些 IgIg 的独特型完全相同。 其理化性质十分均一，常呈现某一类 IgIg 的显著 增高，大多在 30g/L,30g/L,此类异常增高的 IgIg 多无免疫活性。 .HLA.HLA 血清学分型法为微量淋巴细胞毒试验或称为补体依赖的 细胞毒试验。能够用此方法检测的抗原

27、有 HLAHLA- -A A、- -B B、- -C C、- -DRDR - -DQDQ。HLAHLA 血清分型法的原理及应用：（原理）该方法的原理是带 有特异 HLAHLA 抗原的淋巴细胞在体外与已知型别的一系列标准抗 HLAHLA 血清结合后，在补体参与下，引起淋巴细胞溶解死亡。死亡 细胞的胞膜失去屏障作用而使染料（台盼蓝或伊红）透入细胞内，在倒置显微镜下观察，死细胞呈蓝色或粉红色，未致敏的活细胞则不着色。（应用） 根据淋巴细胞的存活与否可以判定其表面是否有与标准分型血清中抗体相对应的抗原。 .超敏反应： 是指集体收到同一抗原再次刺激后产生的一种以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主要表现的异常

28、或病理性免疫应答。 变应原是指能够选择性诱导机体产生特异性 IgEIgE 抗体，引起速发 型变态反应的抗原物质。 引起 I I 型超敏反应的变应原：空气中的变应原： 花粉、 尘蜻、 动物皮屑、真菌抱子等食物变应原药物变应原异种动物免疫学清等 引起 n n 型超敏反应：输血反应、新生儿溶血病等。 新生儿溶血： 多由母子间 RhRh 血型不合引起， 母亲的血型为 RhRh- -, ,由于输血、流产、分娩等原因接受了 Rh+Rh+红细胞表面 RhRh 抗原刺 激后，可以产生 RhRh 抗体。此类血型为 IgGIgG 类，可通过胎盘。当体内产生有抗 RhRh 抗体的母亲再次妊娠时， 母体内的抗 RhR

29、h 抗体便可通过胎盘进入胎儿体内，如胎儿血型仍为 Rh+,Rh+,则抗 RhRh 抗体 与其红细胞结合，激活补体，导致胎儿红细胞溶解，引起流产或发生新生儿溶血症。母子间 ABOABO 血型不合引起的新生儿溶血症也不少见，但症状较轻。对 RhRh- -的产妇，可于产后 72h72h 内注射抗 RhRh（或抗 RhDRhD）免疫球蛋白，及时清除进入母体内的 Rh+Rh+红细胞， 可有效预防再次妊娠时发生新生儿溶血症。 .血清病：初次注射大量异种抗毒素 1 1- -2 2 周后，可出现发热皮症、淋巴结肿大、关节肿痛和一过性蛋白尿等症状。具发生机制：一次性注射大量异种抗毒素血清后，机体产生抗异种血清抗体，由于注入的异种血清尚未完全清除，两者在抗原量多于抗体