慢性束缚致大鼠慢性疲劳模型的肾上腺皮质超微结构的变化

1、    慢性束缚致大鼠慢性疲劳模型的肾上腺皮质超微结构的变化         摘要：探讨慢性疲劳模型动物的肾上腺指数和肾上腺皮质的超微结构的改变及中药调节作用。用慢性束缚的方法研制慢性疲劳动物模型，并在模型成功的基础上处死大鼠，摘取肾上腺称重并在电镜下观察其皮质的超微结构。结果发现慢性束缚法造模2周后，与正常组相比，模型组及中药复方组左侧肾上腺指数增加，而人参皂甙组有所降低。在此基础上观察到肾上腺皮质的超微结构的改变、功能的受损，是使动物HPA轴活动受影响，机体应激能力下降的

2、潜在因素，可能是产生疲劳的原因之一。关键词：慢性疲劳；慢性束缚；电镜；肾上腺皮质；大鼠分类号：Q95-33Changes of Ultrastructure of Adrenal Gland Cortex in CFS Rat Model by Astricting ChronicallyChen Yixin,Wang Tianfang,Ji Shaoliang,et al.(Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100029)ABSTRACT：On the basis of CFS (chronic fatigu

3、e syndrome) rat model,discuss the index and ultrastructure of adrenal gland and the modulating function of Chinese medicine.Method: After establishing rat model,excise the adrenal gland to calculate the index and observe its ultrastructure of cortex under electron microscope.Results: Compared with n

4、ormal rats,the index of adrenal gland in the group with Chinese medicine increased,but the rats with ginseng saponin decreased.Observe the ultrastructure of cortex under electron microscope,the structure of normal rats and the groups with Chinese medicine and ginseng saponin were almost the same.How

5、ever,a bigger change of ultrastructure occurred to rats model.Conclusion: On basis of the CFS rat model,we observed the changes of ultrastructure of cortex under electron microscope and the injuries of function.It indicated one of the causes of fatigue could be the decreasing of irritability.KEY WOR

6、DS：CFS; Astricting; Rat Model; Ultrastructure of Adrena Gland Cortex在目前有关慢性疲劳综合征（CFS）的研究中，建立较为理想的慢性疲劳动物模型是研究得以深入的关键1。为此我们在以前的实验中，结合CFS的发病及病理特点和我们对它的中医病机认识，使用慢性束缚法建立了较为理想的慢性疲劳动物模型2。该模型大鼠在行为学实验中表现出典型的疲劳征象并伴有一些与CFS相关的其他行为学改变2。在随后的研究中还发现该模型大鼠的一些中枢神经递质的分布与代谢发生了紊乱，这在一定程度上揭示了该模型大鼠的疲劳现象及其行为学改变的机制。本实验在运用慢性束缚

7、塑造慢性疲劳动物模型的基础上，着重探讨了模型动物的肾上腺指数和肾上腺皮质的超微结构的改变及中药的调节作用。1材料与方法1.1实验动物二级Wistar雄性大鼠，体重160180 g，由中国医学科学院流行病研究所实验动物中心提供。1.2实验药物消疲怡神口服液：由黄芪、枳壳、人参、柴胡、陈皮等药组成。委托北京永定制药厂加工，批号：960928。规格：10 mL/支，相当于每mL含生药1 g。人参皂甙片：中美合资吉林省亚威制药有限公司生产，吉卫药准字，批号：94032019。规格：0.1 g/片，含人参总皂甙25 mg/片。1.3试剂与器材实验试剂：俄酸（Osmic Acid,99.6%crystal

8、s,JMC LTD产品，批号：081101），低粘稠度包埋剂试剂盒（Spurr Resin,LOW Viscosity Kit,包括：V.C.D已烯环已烷、D.E.R736环氧树脂、NSD硬化剂、DMAE加速剂，SP1-CHEN,USA产品），醋酸双氧铀、乙醇等均为分析纯试剂。超薄切片机（ultrotome,NOVA,LKB公司），日本电子JEM-1200EX型透射电子显微镜。造模用具：用硬塑料特制的束缚筒。该筒为管状，长20 cm，筒口外径6 cm、内径5.3 cm，筒内前端置一直径略小于筒的内径、并可以前后调节的无底、圆嘴玻璃瓶，其瓶口为通气口(距离筒口5 cm左右)，后端为可开关闸门。大

9、鼠头向通气口置入后，关闭闸门，可通过调节玻璃瓶改变大鼠的活动空间。1.4动物分组与造模方法动物饲养于室温为(22±2)、正常光照的清洁级动物室中，5只/笼。适应2 d后，将45只大鼠随机分为正常对照组（A组，n=11）；模型组（B组，n=11）；模型加中药复方组（C组，n=12，简称中药复方组）；模型加人参皂甙组（D组，n=11，简称人参皂甙组）。第3天开始造模，持续2周。造模期间，每天将B、C、D组束缚1次，每次束缚过程3组同步进行。每天束缚开始时间不同，随机确定。每次束缚时，使动物钻进束缚筒内，并调节到其不产生强烈反抗的紧张程度，平架在木板上。3 h后，3组动物同步取出。在整个束

10、缚过程中，A组动物在同一环境中，同样不予以进食水。造模结束后，立即开始行为学的测定。1.5给药方法每次开始造模前1 h给4组大鼠灌胃，连续两周。A、B组予以单蒸水，C组予以消疲怡神口服液（5 g/kg.d），D组予以人参皂甙片配制成水溶液70 mg/(kg.d)，各组灌胃容积均为3 mL。1.6肾上腺超微结构的测定方法取材及样品处理：10%水合氯醛将大鼠麻醉（400 mg/kg）取血后，断头处死。在放有冰块的玻皿中迅速打开腹腔，取右侧肾上腺，置于2.5%戊二醛固定备用。再取左侧肾上腺称重，并记录。组织包埋与染色：将肾上腺皮质切成数块，每块大小约为1 mm3，经俄酸处理，常规脱水，环氧树脂包埋，

11、超薄切片，醋酸双氧铀染色，电镜下观察肾上腺皮质超微结构。2结果2.1肾上腺指数变化经慢性束缚法造模2周后，模型组较正常组大鼠左侧肾上腺指数增加15.6%，中药复方组较正常组增加2.8%，人参皂甙组较正常组降低了0.1%（见表1）。表1各组大鼠左侧肾上腺指数（mg/g；<"115 (147 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324194529498" 42 16>)组别n 左侧肾上腺指数正常对照组 8 0.094±0.016 模型组 8 0.108±0.034 中药复方组 8 0.096&

12、#177;0.011 人参皂甙组 8 0.094±0.023      注：肾上腺指数=肾上腺重量（mg）/体重（g）2.2电镜观察（1） 正常对照组：大鼠肾上腺皮质束状带，其细胞核膜完整，核染色质分布均匀，核仁清晰，线粒体呈管状，不肿胀，嵴清楚，胞浆内脂质、脂滴清晰，丰富（见1）。    （2） 模型组：造模2周后，大鼠肾上腺皮质束状带，线粒体呈管状，疏松并有轻度肿胀，脂滴、脂质空泡较少（见2）。    （3） 中药复方组：服用消疲怡神口服液大鼠，肾上腺皮质束状带

13、，胞浆丰富，脂滴、脂质空泡较多，线粒体结构接近正常对照组（见3）。    （4） 人参皂甙组：服用人参皂甙组大鼠，肾上腺皮质束状带，脂质、脂滴少于中药复方组，线粒体接近正常对照组（见4）。     3讨论慢性疲劳是临床常见症状，也是CFS的主要特征。目前研究认为慢性疲劳的产生与长期精神刺激，脑、体力过度劳累等应激因素有关。因此，该动物模型的建立应排除体力运动、病毒感染及其他等诱导因素。本实验应用慢性束缚法建立了较为典型的具有慢性疲劳特点的大鼠模型，而且还伴有一些与 CFS相关的其他行为学表现2。并在此基础上对该模型

14、大鼠的肾上腺皮质束状带进行了观察。肾上腺皮质在应激过程中起着较为重要的作用，一般认为，其线粒体、滑面内质网与脂质是参与类固醇激素合成的主要细胞器3，4。故它们的体积、数量和形态的变化在一定程度上反映着肾上腺皮质的功能。有报道长期应激后肾上腺皮质细胞和细胞核的体积明显增大，脂滴的数量和体积下降5。     模型组动物造模2周后力竭游泳时间降低、悬尾实验挣扎时间缩短，水迷宫实验出离时间延长，充分说明躯体、精神疲劳已经产生。这时肾上腺皮质超微结构则显示脂质空泡较少，线粒体管形疏松、轻度肿胀、表明该模型动物处于应激衰竭阶段，即Selye 提出的全身性适应综合征的

15、23期。服用消疲怡神口服液及人参皂甙组动物行为学指标及单胺类物质的紊乱较模型动物有显著改善，而肾上腺皮质超微结构也显示：脂质较多，线粒体基本正常，表明该动物机体代谢能力良好，线粒体受到保护，其中消疲怡神口服液组的超微结构情况又好于人参皂甙组，这与我们在其他实验中的观察也相一致2。说明在慢性束缚方法中，肾上腺皮质超微结构改变、功能受损，进而使动物HPA轴活动受影响，机体应激能力下降，可能是产生疲劳的原因之一。基金项目：国家中医药管理局资助课题(No.95B109)作者简介：陈易新,女,26岁,在读医学博士生作者单位：陈易新(北京中医药大学中医诊断教研室北京100029)王天芳(北京中医药大学中医

16、诊断教研室北京100029)季绍良(北京中医药大学中医诊断教研室北京100029)康纯洁(北京中医药大学中医诊断教研室北京100029)刘晓兰(北京中医药大学中医诊断教研室北京100029)刘燕(北京中医药大学中医诊断教研室北京100029)参考文献：1Chao-cc.Immunologically mediated fatigue: a murine model.Clin-Immunol-Immnuopathol,1992,64(2):1611652王天芳，陈易新，季绍良，等慢性束缚致慢性疲劳动物模型的研制及其行为学观察中国中医基础医学杂志，1999，5(5)：25283Christopher E.Subcellular compartmentation of stereologenesis in the zona fasicula