PCR技术及习题

1、PCR技术及习题PCR（polymerasechainreaction）:聚合酶链式反应1、PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核甘酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5端自3端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3端延伸DNA链。2、PCR反应过程是：变性-复性-延伸类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核甘酸引物。PCR由变性-退火（复性）-延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性：当温

2、度上升到90c以上时，双链DNA解聚为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引物的退火（复性）：温度下降到50c左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；引物的延伸：72c左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5端向3端延伸。PCRPCR以理示意图3、结果：上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的4、细胞被DNA复制与PCR技术的比较:细胞内DNA复制体外DNA扩增（PCR）不同点“旋在解旋酶作用下边解旋边复制80100c高温解旋，双链完全分开

3、bDNA解旋酶、DNA聚合酶TaqDNA聚合酶，物RNADNA、RNA，度体内温和条件高温翁有：DN%受成为单族第一引为与限板互扑焙介第三步；延伸.形成新口双世DMA相同点需提供DNA模板四种脱氧核甘酸为原料子链延伸的方向都是从5端到3端知识点拨:1、DNA分子复制的人工控制解开螺旋：在80100c时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。恢复螺旋：在5060c左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。复制条件：缓冲液，DNA模板、四种脱氧核甘酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。控制仪器：PCR仪（温度周期性自动调节仪）。2、PCR的含义是多聚酶链式反应。3、PCR技术反应的

4、条件：稳定的缓冲溶液环境（之间）；DNA模板；合成引物（2个）；四种脱氧核甘酸；DNA聚合酶；温控设备4、PCR技术最突出的优点是快速、高效、灵活、易于操作。5、TaqDNA聚合酶的特点是：耐高温。生物去买料 fiilwwwLbtao.cOrri弓 I 物 13一GAACTTT_55GGATCTAGCGTATGCTTGAAA-X樽板 DNA3、CCTAGATCGCA1ACGAACTTT53GGAICTA3引物 2图 1PCR 引物与模板结合示意图知识拓展：1、DNA聚合酶不能够从头合成DNA,只能从DNA的3端开始延伸DNA链,因此DNA复制需要引物。2、引物：引物是PCR特异性反应的关键，P

5、CR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核甘酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。(1)PCR引物通常长15-25碱基，其中G+C约占50%。(2)引物之间不能互配形成双链结构，引物内部也不能形成发夹结构。(3)引物的3末端必须与目的片段完全相配。(4)引物的5末端可以不与目的片段互补， 可以包含内切酶位点或启动子序列,但在下一轮反应中，这些序列会被同样合成习题训练1.聚合酶链式反应(PCR技术)是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量的4种

6、脱氧核甘酸及ATP等。反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如右图所示。(1)某个DNA样品有1000个脱氧核甘酸，已知它的一条单链上碱基A:G:T:C=1:2:3:4,则经过PCR仪五次循环后，将产生个DNA分子，其中需要提供胸腺喀咤脱氧核甘酸的数量至少是个。(2)分别以不同生物的DNA样品为模板合成的各个新DNA之间存在差异， 这些差异是。(3)请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处：。2 .通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一循环重复技术使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示了这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因

7、剪刀”能识别的序列和切点是一GGATCC一，请回答:(1)从羊染色体中剪下”羊蛋白质基因的酶是人体蛋白质基因插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶(2)请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图-GfGATCC(3)人体蛋白质基因之所以能插入”到羊的染色体内，原因是插入”时常用的工具3 .下面甲图中DNA决定某一多肽链中的酪氨酸和丙氨酸过程示意图，乙图示样品DNA经PCR技术(聚合酶链式反应)扩增，可以获取大量DNA克隆分子分析回答：小方下的折白膜基氏人滓,白质基因插入到羊染色体中羊蛋白咫呆黑案色体上的其他基因表达分泌的 K K%中含人体生臼瓜1 1I IDMADMA 拜师 2TUMAJTT2TU

8、MAJTT（1）甲图中含有种核甘酸；丙氨酸的遗传密码子是。该图表示了DNA中遗传信息的过程。（2）有一种贫血症是血红蛋白分子的一条多肽链上，一个酪氨酸被一个苯丙氨酸所替代造成的。此种贫血症的根本原因是,即发生了改变。（3）乙图的“PCR与人体内的DNA复制相比有何特殊之处?。（4）现在要通过“PCR得到甲图中DNA片段的1024个克隆片段，则至少要向试管中加入个腺喋吟脱氧核甘酸。PCR检测上岗证试题一、选择题（共20题，每题2分）1、PCRfc术扩增DNA需要的条件是（）目的基因引物四种脱氧核甘酸DN臊合酶等mRNA核糖体A、B、C、D、2、镁离子在DNMRNA#外扩增反应的浓度一般为（）3、

9、多重PCRB要的引物对为（）A、一对引物B、半对引物C、两对引物D、多对引物4、PCR在引物、模板和4种脱氧核糖核甘酸存在的条件下依赖于DNAIK合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（）A、模板B、引物C、dNTPD、镁离子5、在PCRK应中，下列哪项可以引起非靶序列的扩增的扩增（）A、TaqDNAK合酶加量过多B、引物加量过多GA、B都可D、缓冲液中镁离子含量过高A、MullisB、史蒂文.沙夫C、兰德尔.才木7、PCFT物短期存放可在（）保存。A4cB、常温C-80CD、高温8、PCFT物长期储存最好置于（）。A4cB、常温C、16CD、-20C9、PCR勺基本反应过程包括（）A、变性、

10、退火、延伸B、变性、延伸C、变性、退火10、在实际工作中，基因扩增实验室污染类型包括（）A、扩增产物的污染B、天然基因组DNA勺污染C、试剂污染和标本间交叉污染DA、B、C都可能11、PCRK术于哪一年发明（）A1983B、1971C、1987D、199312、TaqDNA合酶酶促反应最快最适温度为（）A37cB50-55CC、70-75CD、80-85C13、以下哪种物质在PCRK应中不需要（）ATaqDNA聚合酶B、dNTPsC、镁离子D、RNAS14、PCR佥测中，经过n个循环的扩增，拷贝数将增加（）AnB2nC2nDn215、PCFS因扩增仪最关键的部分是（）A、温度控制系统B、荧光检

11、测系统C、软件系统D、热盖16、以下哪项不是临床PCRK验室设计的一般原则（）A、各区合并B、注意风向C、因地制宜D、方便工作17、PC双验室一般包括（）A、试剂准备区B、标本制备区C、扩增区和产物分析区D、A、B、C都含18、PCRK术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（）。A白细胞DNAR病毒蛋白质C、血浆抗体D、病毒核酸19、 如果反应体系中加入模板DN的子100个， 则经过30个循环后，DNA子的数量将达到（）个。_230A、100X30B、100X30X2C、100X30D100X220、P

12、CFT增产物的分析方法主要有（）A、凝胶电泳分析法B、点杂交法C、荧光探针定量PCFRtD、ABC都是二、判断题（共20题，每题2分）1、PCF8I物设计的目的是在扩增特异性和扩增效率问问取得平衡。（）2、在PCFE应中，dATP在DNAT增中可以提供能量，同时作为DN给成的原料。（）3、DNAT增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋。（）4、PCR反应中，复性过程中引物与DNA真板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成。（）5、PCRt细月 fi 内DNAS制相比所需要酶的最适温度较高。（）6、PC敬术可用于基因诊断，判断亲缘关系等。（）7、PC敬术需在体内进行。（

13、）8、PCFK应体系中的缓冲液相当于细胞中的体液。（）9、核酸的复制是由5/3/方向进行的。（）10、配对的碱基总是A与T和G与C。（）11、HBsAg转阴性后一段时间才出现可检测的HBsAb,此段间隔期称之为“窗口期”。（）12、市面上多数试剂用淬灭基团Q基团和报告基团R基团来标记荧光定量PCR的探针。（）13、PC网应体系中Mg2+的作用是促进TaqDNA聚合酶活性。（）14、若标本中含有蛋白变性剂（如甲醛），PH、离子强度、Mg2+等有较大改变都会影响Taq酶活性。（）15、每个子代DNA分子中均保留一条亲代DNA链和一条新合成的DNA链，这种复制方式称之为半保留复制。（）16、发生溶血的标本对PCR结果没影响。（）17、“平台效应”是描述PCR后期循环产物对数累积趋于饱和。（）18、逆转录聚合酶链式反应（reversetransc