细胞生物学研究方法ppt课件

1、METHODS AND TECHNIQUES本章内容提要本章内容提要 第一节第一节 显微技术显微技术 一、光学显微镜一、光学显微镜 二、电子显微镜二、电子显微镜 三、显微操作技术三、显微操作技术 第二节第二节 生物化学与分子生物学技术生物化学与分子生物学技术 第三节第三节 细胞分别技术细胞分别技术 第四节第四节 细胞培育与细胞杂交细胞培育与细胞杂交第一节第一节 显微技术显微技术 光学显微镜：以可见光或紫外线为光源。光学显微镜：以可见光或紫外线为光源。 电子显微镜：以电子束为光源。电子显微镜：以电子束为光源。、光学显微镜、光学显微镜 1. 1. 构成：构成： 照明系统照明系统 光学放大系统光学放

2、大系统 机械安装机械安装 2. 2. 原理：经物镜构成倒立实像，经目镜进一步放大原理：经物镜构成倒立实像，经目镜进一步放大成像。成像。一普通光学显微镜一普通光学显微镜 3. 分辨力：指分辨物体最小间隔的才干。分辨力：指分辨物体最小间隔的才干。 D=0.61/N*A 其中其中为入射光线波长；为入射光线波长；A为镜口率为镜口率 sin/2， N 介质折射率；介质折射率；=镜口角样品对物镜镜口的镜口角样品对物镜镜口的张角张角 思索：如何提高显微镜的分辨才干？思索：如何提高显微镜的分辨才干？表一、几种介质的折射率表一、几种介质的折射率 显微镜的几个光学特点：显微镜的几个光学特点： 制造光学镜头所用的玻

3、璃折射率为制造光学镜头所用的玻璃折射率为1.651.78，所，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。用介质的折射率越接近玻璃的越好。 sin /2的最大值必然小于的最大值必然小于1；介质为空气，镜口；介质为空气，镜口率普通为率普通为0.050.95；油镜头用香柏油为介质，镜；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近口率可接近1.5。 普通光线的波长为普通光线的波长为400700nm，分辨力数值不会，分辨力数值不会小于小于0.2m，人眼的分辨力为，人眼的分辨力为0.2mm，因此显微，因此显微镜的最大设计倍数为镜的最大设计倍数为1000X。二荧光显微镜二荧光显微镜 Fluorescence Fluoresc

4、ence microscope P53microscope P53特点：光源为紫外线，波特点：光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通长较短，分辨力高于普通显微镜；显微镜；有两个特殊的滤光片；有两个特殊的滤光片；照明方式通常为落射式。照明方式通常为落射式。Fluorescence image of epithelial cell, DNA in blue and Microtubules in green 用于察看能激发出荧光的构造。用途：免疫荧光用于察看能激发出荧光的构造。用途：免疫荧光察看、基因定位、疾病诊断。察看、基因定位、疾病诊断。三激光共聚焦扫描显微境三激光共聚焦扫描显微境 Laser

5、 confocal scanning microscope, LCSM P53 用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。 能显示细胞样品的立体构造。能显示细胞样品的立体构造。 分辨力是普通光学显微镜的分辨力是普通光学显微镜的3倍。倍。 用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，构成用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，构成立体图像。立体图像。laser confocal scanning microscope, LCSMLCSM Image of a Xenopus Melanophore microtubule cytoskeleton (green) a

6、nd the nucleus (blue) /四暗视野显微镜四暗视野显微镜 dark field microscopedark field microscope 聚光镜中央有挡光片，照明光聚光镜中央有挡光片，照明光线不直接进人物镜，只允许被线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物标本反射和衍射的光线进入物镜，因此视野的背景是黑的，镜，因此视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。物体的边缘是亮的。 可察看可察看 4200nm4200nm的微粒子，分的微粒子，分辨率比普通显微镜高辨率比普通显微镜高5050倍。倍。 把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种

7、构把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种构造间的对比度，使各种构造变得明晰可见。在构造上，相差显造间的对比度，使各种构造变得明晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处： 环形光阑环形光阑annular diaphragm：位于光源与聚光器之间。：位于光源与聚光器之间。 相位板相位板annular phaseplate：物镜中加了涂有氟化镁的相：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4。五相差显微镜五相差显微镜 P51原理原理用途：察看未经染色的玻片标本用途：察看

8、未经染色的玻片标本六偏光显微镜六偏光显微镜polarizing microscope 用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等。原、染色体等。 光源前有偏振片起偏器，使进入显微镜的光线为偏光源前有偏振片起偏器，使进入显微镜的光线为偏振光，镜筒中有检偏器振光，镜筒中有检偏器 与起偏器方向垂直的偏振与起偏器方向垂直的偏振片。片。 载物台是可以旋转。载物台是可以旋转。淀粉七微分干涉差显微镜七微分干涉差显微镜 Differential interference contrast microscope DICP52 1952年，年，No

9、marski发明，利发明，利用两组平面偏振光的干涉，用两组平面偏振光的干涉，加强影像的明暗效果，能显加强影像的明暗效果，能显示构造的三维立体投影。标示构造的三维立体投影。标本可略厚一点，折射率差别本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。更大，故影像的立体感更强。八倒置显微镜八倒置显微镜 inverse microscope 物镜与照明系统颠倒，前物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在者在载物台之下，后者在载物台之上，用于察看培载物台之上，用于察看培育的活细胞，通常具有相育的活细胞，通常具有相差物镜，有的还具有荧光差物镜，有的还具有荧光安装。安装。 九当代显微镜的开展趋势九当代显

10、微镜的开展趋势 采用组合方式，集普采用组合方式，集普通光镜加相差、荧光、通光镜加相差、荧光、暗视野、暗视野、DIC、摄影、摄影安装于一体。安装于一体。 自动化与电子化。自动化与电子化。二、电子显微镜二、电子显微镜 P57一透射电子显微镜一透射电子显微镜transmission electron microscope, TEM 以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束的波长短，并且以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束的波长短，并且波长与加速电压波长与加速电压(通常通常50120KV)的平方根成反比。的平方根成反比。 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系由电子照明系统、电磁透镜成像系统、

11、真空系统、记录系统、电源系统等统、电源系统等5部分构成。部分构成。 分辨力分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。，放大倍数可达百万倍。 用于察看超微构造用于察看超微构造ultrastructure，即小于，即小于0.2m、光、光学 显 微 镜 下 无 法 看 清 的 构 造 ， 又 称 亚 显 微 构 造学 显 微 镜 下 无 法 看 清 的 构 造 ， 又 称 亚 显 微 构 造submicroscopic structures。1. 原理原理透射电子显微镜透射电子显微镜TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE，TEM表二、不同光线的波长表二、不同光线的波长2、制样技

12、术、制样技术 P57 1超薄切片超薄切片 电子束穿透力很弱，用于电镜察看的标本须制成厚度仅电子束穿透力很弱，用于电镜察看的标本须制成厚度仅50nm的超薄切片，用超薄切片机的超薄切片，用超薄切片机ultramicrotome制制造。造。 通常以锇酸和戊二醛固定样品，丙酮逐级脱水，环氧树脂通常以锇酸和戊二醛固定样品，丙酮逐级脱水，环氧树脂包埋，以热膨胀或螺旋推进的方式切片，重金属铀、铅包埋，以热膨胀或螺旋推进的方式切片，重金属铀、铅盐染色。盐染色。2负染技术负染技术 P60 用重金属盐(如磷钨酸)对铺展在载网上的样品染色；吸去染料，枯燥后，样品凹陷处铺了一层重金属盐，而凸出的地方没有染料堆积，从而

13、出现负染效果，分辨力可达1.5nm左右。Negative Stained Actin3冰冻蚀刻冰冻蚀刻 freeze-etching P60 亦称冰冻断裂。标本置于干冰或液氮中冰冻。然后断开，升温后，冰升华，暴显露了断面构造。向断裂面上喷涂一层蒸汽碳和铂。然后将组织溶掉，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜replica。A Yeast Cell 20世纪世纪60年代问世，用来察看标本外表构造。年代问世，用来察看标本外表构造。 分辨力为分辨力为610nm，由于人眼的分辨力区别荧光屏上间，由于人眼的分辨力区别荧光屏上间隔最近两个光点的才干为隔最近两个光点的才干为0.2mm，扫描电镜的有效放大，扫描电

14、镜的有效放大倍率为倍率为0.2mm/10nm=20000X。二扫描电子显微镜二扫描电子显微镜SEM P62Scanning electron microscope SEM 任务原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表任务原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表激发出次级电子，次级电子的多少与样品外表构造有关，激发出次级电子，次级电子的多少与样品外表构造有关，次级电子由探测器搜集，信号经放大用来调制荧光屏上电次级电子由探测器搜集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 为了使标本外表发射出次级电子，标本在固定、

15、脱水后，为了使标本外表发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。级电子信号。扫描电子显微镜原理扫描电子显微镜原理人类红细胞人类红细胞酵母酵母人类精子人类精子三扫描隧道显微镜三扫描隧道显微镜 P63scanning tunneling microscope，STM 原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压压2mV2V，针尖与样品之间

16、构成隧道电流。电流强，针尖与样品之间构成隧道电流。电流强度与针尖和样品间的间隔有函数关系，将扫描过程中电流度与针尖和样品间的间隔有函数关系，将扫描过程中电流的变化转换为图像，即可显示出原子程度的凹凸形状。的变化转换为图像，即可显示出原子程度的凹凸形状。 分辨率：横向为分辨率：横向为0.10.2nm，纵向可达，纵向可达0.001nm。 用途：三态固态、液态和气态物质均可进展察看。用途：三态固态、液态和气态物质均可进展察看。扫描隧道显微镜原理扫描隧道显微镜原理STM image, Benzene molecules accumulate at step edges on Cu三、显微操作技术三、显

17、微操作技术micromanipulation technique 在倒置显微镜下利用显微操作器进展细胞或早期胚胎操作在倒置显微镜下利用显微操作器进展细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内挪动的机械安装。视野内挪动的机械安装。 显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。胚胎移植以及显微切割等。 细胞核移植技术已有几十年的历史，细胞核移植技术已有几十年的历史，Gordon等人等人1962对非洲爪蟾进展核移植获得胜利。我国著名学者童第

18、周等对非洲爪蟾进展核移植获得胜利。我国著名学者童第周等上个世纪上个世纪70年代在鱼类细胞核移植方面进展了许多任务，年代在鱼类细胞核移植方面进展了许多任务，并获得了丰盛成果。并获得了丰盛成果。显微操作仪显微操作仪第二节第二节 生物化学与分子生物学技术生物化学与分子生物学技术一、细胞化学技术一、细胞化学技术组织化学和细胞化学染色方法组织化学和细胞化学染色方法histochemical and cytochemical staining method用于对用于对某些细胞成分进展定性和定位研讨。某些细胞成分进展定性和定位研讨。一固定一固定物理固定：血膜空气快速枯燥、冷冻枯燥。物理固定：血膜空气快速枯燥

19、、冷冻枯燥。化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和锇酸等试剂。显示多糖常用乙醇固定，显示酶和锇酸等试剂。显示多糖常用乙醇固定，显示酶类多用甲醛丙酮缓冲液固定。类多用甲醛丙酮缓冲液固定。二显示方法二显示方法金属沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反响产物最金属沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反响产物最终生成终生成CoS或或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。有色沉淀，而显示出酶活性。Schiff反响：细胞中的醛基可使反响：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品试剂中的无色品红变为红色。用于显示糖和脱氧核糖核酸红变为红色。用于显示糖和脱氧核糖核酸Fe

20、ulgen反反响。响。联苯胺反响：过氧化酶分解联苯胺反响：过氧化酶分解H202。产生新生氧，后者再。产生新生氧，后者再将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。茚三酮反响：显示蛋白质。茚三酮反响：显示蛋白质。二、免疫细胞化学二、免疫细胞化学 immunocytochemistry 根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专注结合，对抗原根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专注结合，对抗原进展定位测定的技术。常用的标志物有荧光素和酶。进展定位测定的技术。常用的标志

21、物有荧光素和酶。 免疫荧光法免疫荧光法immunofluorescent technique：常用的：常用的萤光素有异硫氰酸荧光素、罗丹明等。萤光素有异硫氰酸荧光素、罗丹明等。 酶标免疫法酶标免疫法enzyme-labeled antibody method：常：常用的酶有辣根过氧化物酶，酶与底物发生反响后构成不透用的酶有辣根过氧化物酶，酶与底物发生反响后构成不透明的堆积物，从而显示出抗原存在的部位。明的堆积物，从而显示出抗原存在的部位。三、显微光谱分析技术三、显微光谱分析技术 细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有本

22、人特征性的蛋白质、细胞色素、维生素等都有本人特征性的吸收曲线。吸收曲线。 可利用显微分光光度计对某些成分进展定位、定可利用显微分光光度计对某些成分进展定位、定性和定量测定。性和定量测定。四、放射自显影术四、放射自显影术 用于研讨标志化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、用于研讨标志化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。 原理：将放射性同位素标志的化合物导入生物体内，经过原理：将放射性同位素标志的化合物导入生物体内，经过一段时间后，制取切片，涂上卤化银乳胶，经放射性曝光，一段时间后，制取切片，涂上卤化银乳

23、胶，经放射性曝光，使乳胶感光。使乳胶感光。 普通用普通用14C和和3H标志。常用标志。常用3H-TDR来显示来显示DNA，用，用3H-UDR显示显示RNA；用；用3H氨基酸研讨蛋白质，用氨基酸研讨蛋白质，用3H甘露糖、甘露糖、3H岩藻糖研讨多糖。岩藻糖研讨多糖。 14C半衰期为半衰期为5730年，年，3H为为12.5年。年。五、分子杂交技术五、分子杂交技术 具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当条件下，经过氢键结合，构成条件下，经过氢键结合，构成DNA-DNA，DNA-RNA或或RNA-RNA杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分

24、子杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间能否具有互补关系。核苷酸序列间能否具有互补关系。 一原位杂交一原位杂交in situ hybridization。 用于检测染色体上的特殊用于检测染色体上的特殊DNA序列。最初是运用带放射性序列。最初是运用带放射性的的DNA探针，后来又发明了免疫探针法。探针，后来又发明了免疫探针法。二二Southern杂交杂交 是体外分析特异是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核制性内切酶将核DNA或线粒体或线粒体DNA切成切成DNA片段，片段，经凝胶电泳分别后，转移到醋酸纤维薄膜上，再经凝胶电泳分别后，转移到

25、醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，经过放射自显影，即可识别出与探用探针杂交，经过放射自显影，即可识别出与探针互补的特殊核苷序列。针互补的特殊核苷序列。 将将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，那么称为转移到薄膜上，用探针杂交，那么称为Northern杂交。杂交。第三节第三节 细胞分别技术细胞分别技术一、离心技术一、离心技术 是分别细胞器如细胞核、线粒体、高尔基体及各是分别细胞器如细胞核、线粒体、高尔基体及各种大分子根本手段。种大分子根本手段。 转速为转速为1025kr/min的离心机称为高速离心机。的离心机称为高速离心机。 转速转速25kr/min，离心力，离心力89K者称为超速离心机。者称为超速离心

26、机。 目前超速离心机的最高转速可达目前超速离心机的最高转速可达100000r/min，离心，离心力超越力超越500Kg。 一差速离心一差速离心 Differential centrifugation 特点：特点： 介质密度均一；介质密度均一； 速度由低向高，逐级离心。速度由低向高，逐级离心。 用途：分别大小相差悬殊的细胞和细胞器。用途：分别大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序：核沉降顺序：核线粒体线粒体溶酶体与过氧化物酶体溶酶体与过氧化物酶体内质网与高基体内质网与高基体核蛋白体。核蛋白体。 可将细胞器初步分别，常需进一步经过密度梯离心再行分可将细胞器初步分别，常需进一步经过密度梯离心再行分别

27、纯化。别纯化。 Low speedHigh speedDifferential centrifugation二密度梯度离心二密度梯度离心 用介质在离心管内构成一延续或不延续的密度梯度，将细用介质在离心管内构成一延续或不延续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，经过离心力场的作用使胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，经过离心力场的作用使细胞分层、分别。细胞分层、分别。 类型：速度沉降、等密度沉降。类型：速度沉降、等密度沉降。 常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 分别活细胞的介质要求：分别活细胞的介质要求： 1能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；能产生密度梯度

28、，且密度高时，粘度不高； 2pH中性或易调为中性；中性或易调为中性； 3浓度大时浸透压不大；浓度大时浸透压不大； 4对细胞无毒。对细胞无毒。1、速度沉降、速度沉降 velocity sedimentation 用途：分别密度相近而大小不等的细胞或细胞器。用途：分别密度相近而大小不等的细胞或细胞器。 特点：介质密度较低，介质的最大密度应小于被特点：介质密度较低，介质的最大密度应小于被分别生物颗粒的最小密度。分别生物颗粒的最小密度。 原理：介质密度梯度平缓，分别物按各自的沉降原理：介质密度梯度平缓，分别物按各自的沉降系数以不同的速度沉降而到达分别。系数以不同的速度沉降而到达分别。2.等密度沉降等密

29、度沉降 isopycnic sedimentation 用途：分别密度不等的颗粒。用途：分别密度不等的颗粒。 特点：特点： 介质密度较高，陡度大，介质的最高密度应大于被分介质密度较高，陡度大，介质的最高密度应大于被分别组分的最大密度。别组分的最大密度。 所需的力场通常比速率沉降法大所需的力场通常比速率沉降法大10100倍，往往需求倍，往往需求高速或超速离心。高速或超速离心。 原理：样品各成分在延续梯度的介质中经过一定时间原理：样品各成分在延续梯度的介质中经过一定时间的离心那么沉降到与本身密度相等的介质处，并停留的离心那么沉降到与本身密度相等的介质处，并停留在那里到达平衡，从而将不同密度的成分分

30、别。在那里到达平衡，从而将不同密度的成分分别。Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation二、流式细胞术二、流式细胞术 用途：对单个细胞进展快速定量分析与分选的一门技术。用途：对单个细胞进展快速定量分析与分选的一门技术。 原理：包在鞘液中的细胞经过高频振荡控制的喷嘴，构成原理：包在鞘液中的细胞经过高频振荡控制的喷嘴，构成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处置，输出统计结果，并可根据

31、这些性质分选出高纯度机处置，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，分别纯度可达的细胞亚群，分别纯度可达99%。包被细胞的液流称为鞘。包被细胞的液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计液，所用仪器称为流式细胞计flow cytometer。第四节第四节 细胞培育与细胞杂交细胞培育与细胞杂交一、细胞培育一、细胞培育一动物细胞培育一动物细胞培育 群体培育群体培育mass culture：将含有一定数量：将含有一定数量细胞的悬液置于培育瓶中，让细胞贴壁生长，细胞的悬液置于培育瓶中，让细胞贴壁生长，集合集合confluence后构成均匀的单细胞层；后构成均匀的单细胞层； 克隆培育克隆培育cl

32、onal culture：培育高度稀释：培育高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞构成的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞构成一个细胞集落，称为克隆。一个细胞集落，称为克隆。原代培育原代培育 primary culture即：培育直接来自动物机即：培育直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培育瓶转移到另外一个培育瓶体的细胞群，将细胞从一个培育瓶转移到另外一个培育瓶称为传代或传代培育称为传代或传代培育Passage。细胞株细胞株cell strain：从原代培育细胞群中挑选出的具：从原代培育细胞群中挑选出的具有特定性质或标志的细胞群。有特定性质或标志的细胞群。细胞系细胞系cell line

33、：从肿瘤组织培育建立的细胞群或培：从肿瘤组织培育建立的细胞群或培育过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁衍。育过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁衍。 克隆克隆clone：亦称无性系。指由同一个祖先细胞经过：亦称无性系。指由同一个祖先细胞经过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。实验室中常用的几种细胞系实验室中常用的几种细胞系细胞系名称细胞系名称细胞类型细胞类型来源来源3T3成纤维细胞成纤维细胞小鼠小鼠HeLa宫颈癌上皮细胞宫颈癌上皮细胞Henrietta Lacks BHK21成纤维细胞成纤维细胞叙利亚仓鼠叙利亚仓鼠PtKl上皮细胞上皮细胞袋鼠袋鼠L6成肌细胞成肌细胞大鼠大鼠PCI2嗜铬细胞嗜铬细胞大鼠大鼠SP2浆细胞浆细胞小鼠小鼠SP20骨髓瘤浆细胞骨髓瘤浆细胞小鼠小鼠CHO卵巢细胞卵巢细胞中国地鼠中国地鼠