上海第二医科大学教案

1、上海交通大学医学院教案教案课程名称生化技术1、光的基本性质2、光谱分析法的分类3、可见-紫外分光光度法的原理4、光吸收的基本定律5、比色法测定溶液浓度的方法占八、占八、分光光度法(spectrophotometry)光谱分析法(photometry)(20min)定义：根据物质吸收、发射或散射辐射能而建立起来的一类分析方法。高速传播的电磁辐射;具有波动性（=c/v）和微粒性（E=hv）；短波能量大，长波能量小能量转移-当光辐射通过某种物质时，组成该物质的分子与光子发生“碰 撞”光子的能量就转移至分子、原子上，使它们由基态（低能态）跃迁到激发态（高能态），这种跃迁称为激发。选择吸收-组成物质的分

2、子仅吸收与其内能变化（基态与激发态能量差）相对应的波长或频率的光， 所得到的光谱称为吸收光谱。能量释放-处于较高能态的分子(激发态分子)授课题目分光光度法原理授课日期2008年9月4日授课班级检验本科授课时数授课方式理论课I.1.2.光的基本性质:3.物质对光吸收的基本原理:不稳定，当其返回基态时， 以热或发射光谱的形式将能量释放出来。所发射出的相应光谱，称分子发 射光谱。4.分类(1)吸收光谱分析法：根据溶液能吸收由光源发出的某些波长的光后所形成的特征光谱来鉴定该物质的性质和含量的方法。(2)发射光谱分析法：根据物质受到热能或电能等的激发后所发射出的特征光谱来进行定性及定量分析的一种方法。(

3、3)比浊/散射光谱分析法：测定光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散 射程度的一类定量方法。比浊法(turbidimetry):在光源的光路方向上测定透射光强度(透 射光&散射光)与入射光强度的比值和胶体溶液中质点浓度间的关 系。散射测浊法(nephelometry):在光路的垂直方向上测量散射光强度 和胶体溶液中质点间的关系。5.特点：灵敏度高；测定简便、快速；试样不被破坏等。II.可见、紫外分光光度法(60min)1.定义：根据物质分子对于200nm 700nm光区电磁辐射的吸收特性进行分析 的方法。可见光：400700nm有色物质溶液紫外光：200400nm无色物质2.特点：灵敏度

4、高(10-410-7g/ml);选择性强；精确度和准确度高；仪器设备简单，操作易掌握3.吸收光谱(1)光谱的产生：化合物分子的价电子跃迁(2)吸收光谱曲线：电子跃迁的吸收波长和吸收强度可用仪器测定，在 可见、紫外光区内绘制或扫描得到一条以波长(，)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标的吸收曲线。4.光吸收的基本定律(Lamber- Beers Law)(1)定律：单色光通过吸光溶液后，吸光度与浓度或厚度之间呈正比关系。Lamber定律：说明吸收与厚度间的关系，Beer定律：说明吸收与浓度间的关系(2)表达式：-Iglt/lo=a b c *. It/Io为透光率(transmittanee, T)

5、(%)UA=-lgT= a b e* A为吸光度(aborbanee)*a为吸光系数(absorptivity),即吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度。b为液层厚度e为溶液浓度(coneentration)5.比色法(eolorimetry)(1)定义：用可见光作光源，比较溶液的颜色深浅度以测定所含有色物 质浓度的方法(2)所用仪器：分光光度计(spectrophotometer)(i)基本原理：溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效 应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，故当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能 量减弱的程度和物质的

6、浓度有一定的比例关系。(ii)结构组成(以722分光光度计为例)光源：可见光区的光源为钨灯，波长范围是3201000nm(紫外光区的光源为氢灯或氘灯，波长是200320nm)单色器：一种将光源产生的混合光分解为单一波长的光学系统。一般是根据通过 棱镜的折射或光栅的衍射而获得的。试样室：由比色皿座架及光门组成。可见光区用光学玻璃比色皿(紫外光区用石英比色皿)光电管暗盒：由光电管(可将光能转变为可以放大检测和记录的电能)和微电流放大器组成。显示器：由放大器和读数元件组成。(3)比色法的定量方法：(i)标准曲线法：将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程显色后，分别测吸光度(A)，以A为纵坐标，浓度为横坐标制标准曲线(至 少要5点)。在相同条件下处理待测物质并测定其吸光度，即可从标 准曲线找出相对应的浓度。(ii)对比法：将标准品与待测样品在相同条件下显色并测定各自的吸光度。由于测定体系温度、厚度及入射光波长一致，故标准与待测样品a&b值相等，可用下式比较计算待测样品浓度G=C A/Ax讲课内容采用powerpoint形式。小结 复习 思考题参 考书一、 小结：掌握：光吸收的基本疋律（Lamber-Beer疋律）及其表