大豆异黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

1、大豆异黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用叶和杨, 张小玲1, 周 莉2, 汪秀荣2, 肖汉跃2, 何 蔚, 曾 靖(赣南医学院药理教研室; 1附属医院儿科; 2机能实验室, 赣州 341000摘 要 目的:观察大豆异黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:每次分别灌入10m g /ml 、5mg /ml 大豆异黄酮溶液1m l/100g或等体积生理盐水每天一次15天。结扎冠状动脉左前降支使心肌缺血、40m i n 后恢复血流并持续120m i n 复制缺血再灌注损伤模型。测定心肌组织丙二醛和超氧化物歧化酶、血清乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶, 心肌作红四氮唑染色测心肌梗死面积。结果:大豆异

2、黄酮能缩小心肌梗死范围, 使血清乳酸脱氢酶及磷酸肌酸激酶值降低, 心肌组织超氧化物歧化酶明显增高, 而丙二醛酶值降低。结论:大豆异黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。 关键词 大豆异黄酮; 心肌缺血再灌注损伤; 心肌保护 近年来国内外研究发现大豆异黄酮具有抗细胞增殖13、抗肿瘤4, 5、心血管疾病防护5、抗衰老68、抗疲劳9、缓解更年期综合症、骨质疏松症1012、糖尿病13等作用。美国FDA 把大豆列为能真正降低患心脏病危险的少数食品之一。本文研究了大豆异黄酮的抗心肌缺血再灌注损伤作用。1 材料和方法14161. 1 试验药物 大豆异黄酮由沈阳药科大学植化教研室邱峰博士提供, 实验

3、前用用双蒸水稀至所需浓度。1. 2 试剂 超氧化物歧化酶、丙二醛酶、乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶、考马斯亮蓝试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。红四氮唑(2, 3, 5-tr i pheny lterazo liu m chlor i de TTC , 中国医药集团上海化学试剂公司; 其他试剂均为国产分析纯。1. 3 动物 清洁级雄性W i star 大鼠56只, 体质量(220? 20 g , 由江西省实验动物中心提供(动物中心许可证号为021-9712, 动物合格证号为J XA 2004118, 清洁级 。1. 4 方法 32只雄性大鼠随机分为4组, 分别为假手术组、缺血再灌注组、大豆异黄酮1

4、00mg /kg 、大豆异黄酮50mg /kg。大豆异黄酮于结扎冠状动脉左前降支前15天经灌胃给药, 每天一次, 每次分别灌入1m l/100g大豆异黄酮溶液, 其余时间自由饮用同浓度的大豆异黄酮溶液。模型组及假手术组给生理盐水水合氯醛腹腔麻醉后, 气管插管, 行人工呼吸。左侧第34肋间开胸, 剪开心包, 暴露心脏, 于肺动脉园锥及左心房间找出冠状动脉左前降支, 并用圆形无创缝合针6/0丝线置于左冠状动脉前降支起始部下2mm 处备用。除假手术组仅穿线不结扎外, 其余各组均以0号线立即结扎, 结扎时用一细小塑料管(直径约0. 8mm 垫于血管与结扎线之间。结扎冠状动脉, 以心电图Ò导联

5、ST 段抬高0. 1mV 或T 波高耸、心肌颜色变暗红色为结扎成功的标志。结扎40m i n 后松开结扎线再灌注120m i n 。实验结束后, 左心室心内穿刺取血, 低速冷冻离心机分离血清置-20e 冰箱保存。测定血清乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶操作步骤按试剂盒说明书进行。然后迅速取出心脏, 用硫代巴比妥法测定心肌组织丙二醛含量, 用羟胺法测定超氧化物歧化酶值, 用考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量。另取24只大鼠, 分别为缺血再灌注组、大豆异黄酮100m g /kg 、大豆异黄酮50m g /kg。同上进行实验, 取心肌作红四氮唑染色测心肌梗死面积, 取出心脏, 用冰生理盐水洗净称重。将左心室

6、均匀横切成5份, 用滤纸吸去表面水份, 然后放入1. 25g /L红四氮唑37e 环境中染色15m i n , 非梗死区不变色, 梗死区呈灰白色。置于体积分数为0. 1的甲醛溶液中固定24h , 将梗死区心肌剪下, 用光电天平称重, 以梗死区心肌湿重占全心肌湿重的百分比表示心肌梗死的范围, 评价大豆异黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。2 结果2. 1 缺血再灌注损伤后心肌梗死范围比较 见表1, 大豆异黄酮能缩小心肌梗死范围。表1 各组缺血再灌注损伤后心肌梗死范围比较( x ? s 组别剂量(m g /kg 鼠数(只 心肌湿重(g 梗死区湿重(g 心肌梗死范围(%缺血再灌注80. 717?

7、 0. 0160. 283? 0. 02539. 48? 3. 52大豆异黄酮10080. 714? 0. 0140. 252? 0. 01435. 34? 2. 19*大豆异黄酮5080. 709? 0. 0130. 270? 0. 01738. 04? 2. 34与缺血再灌注组比较*P <0. 05(下同2. 2 各组血清乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的比较 结果见表2。与缺血再灌注组比较, 大豆异黄酮(100mg /kg 使血清乳酸脱氢酶降低, 并使血清磷酸肌酸激酶值降低。表2 各组血清乳酸脱氢酶的比较(u /L, x ? s 组别剂量(m g /kg 鼠数(只 乳酸脱氢酶值磷酸肌酸激酶

8、值假手术 82669. 27? 142. 8588. 86? 14. 11缺血再灌注83255. 21? 248. 72133. 98? 15. 92大豆异黄酮10083069. 27? 119. 78*115. 22? 13. 49*大豆异黄酮5083085. 26? 181. 95125. 72? 18. 742. 3 各组心肌组织超氧化物歧化酶和丙二醛含量比较 结果见表3。与缺血再灌注组比较大豆异黄酮100m g /kg组超氧化物歧化酶明显增高, 而丙二醛明显降低。表3 各组心肌组织超氧化物歧化酶比较( x ? s 组别剂量(m g /kg 鼠数(只 超氧化物歧化酶(NU /mgp 丙二

9、醛(n m o l/mgp假手术 843. 77? 3. 191. 594? 0. 197缺血再灌注833. 15? 4. 412. 274? 0. 267大豆异黄酮100837. 75? 3. 30*1. 936? 0. 202*大豆异黄酮50835. 89? 3. 381. 953? 0. 2533 讨论心肌缺血再灌注损伤目前认为与再灌注后细胞内C a 2+超载、氧自由基大量生成、微血管内皮细胞损伤及血管内皮细胞与白细胞/血小板之间相互作用等有关。本实验研究表明, 大豆异黄酮对缺血再灌注的心肌损伤有一定保护作用, 此作用与大豆异黄酮提高心肌组织的超氧化物歧化酶和降低丙二醛, 清除自21中药

10、药理与临床2005; 21(5由基, 防止脂质过氧化等有关。参考文献1 杨薇. 大豆植物性雌激素的构效关系及药理作用. 中国新药杂志, 2001; 10(12 B 8922 河福金, 王健, 等. 大豆异黄酮抑制裸鼠移植瘤生长及其血管生成的实验研究. 中国药理学通报, 2003; 19(1 B 73753 张帆, 朱翠凤, 戴雅丽, 等. 复合抗氧化剂对2型糖尿病患者糖负荷时炎性细胞因子表达的影响. 中国临床康复, 2004; 8(9 B 169316954 Ravi ndranath M H, M uthugounder S, P resser N, et a. l An tican cer

11、 thera -peu tic pot en tial of soy is ofl avone , gen i s t ein . Adv E xp M ed B i o, l 2004; 546B 1211655 W i se m an H. Role of d i etary phytoestrogen s in t he protecti on aga i nst canc -er and heart d i sease . B ioche m Soc Trans , 1996; 24(3 B 7958006 全吉淑, 尹学哲, 等. 大豆异黄酮和皂甙抗脂蛋白氧化作用的研究. 食品科学,

12、 2003; 24(11 B 1211237 M itchell J H, Gardn et PT, M cPha il DB , et a. l An ti oxi dan t efficacy ofphyt oestrogens i n che m i cal and b i ological model syste m s . A rch B iophys ,1998; 360(1 B 1421488 Flaherty J T , Z w eier J L . Role of oxygen rad icals i n m yocard i al reperf uw i on i n j

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14、松症的实验研究. 食品科学, 2003; 24(2 B 12012213 未翠凤, 张帆, 徐晓燕, 等. 大豆异黄酮等复合抗氧化剂对2型糖尿病患者血脂代谢的影响. 中国临床康复, 2004; 8(9 B 1674167614 李晶华, 王宗仁, 邵中军, 等. 芪丹通脉片对实验性急性心肌梗死大鼠心肌的保护作用及其分子机制. 中国临床康复, 2004; 8(9 B 1706170715 何飞, 党瑜华, 陈魁. 磷酸阿米酮对大鼠心肌损伤的保护作用. 中国临床康复, 2003; 7(27 B 3676367716 Kato R , Foex P . M yocard i al p rotecti

15、on by an esthetic agents agai ns t isc h-er m i a -reperfus i on i n j u ry :an update f or anesthes i ologists . C an J Anaest h, 2002; 49(8 B 777791The effect of soybean isoflavone on m yocardiu m against ische m ia reperfusion i n jury i n ratsY e H eyang , Zhang X i ao li ng , Zhuo L , i e t a.

16、l(D epart m ent of Phar m aco logy, G annan M edical Co llege , G anzhou 341000A i m :T o observ e the protecti v e effec t of Soybean Isoflavone (SI on m yocard i a l ischem ia /repe rf usion i nj u ry in rats . M ethods :Therew ere add up to 56rats se l ected i n the experi m ent . 32m ale rats we

17、 re rando m l y divided i nto 4groups :the sha m ope ra tion g roup , the m odel g roup and the S I 100mg /kg or 50mg /kggroups . T he t w o SI groups w ere respecti ve l y g i v en by 1m l/100gby w ay o f i g 15days be fore ischem ia reperfus i on . R ats ' i sche m i a /reperfusion inj ury m o

18、de lw as establi shed by ligati ng left anter i or descend i ng coronary artery f o r 40m i n f o ll ow ed by reperfus i on for 120m i n . The activ i ty o f creati ne pho sphok i nase (C K and lactate dehydrogenase (LDH i n se ru m, content o f m alond i a l de -hyde (MDA and supe rox i de dis muta

19、se (SOD i n heart and the area o f myocardial i nfarction we re observ ed to eva l uate the protec tive effect o f trea t m en t . R esults :(1 T he SI 100m g /kgcould reduce the area o fm yocard ial i nfarction . (2 The SI 100m g /kgcou l d reduce the LDH and CK of seru m. (3 T he SI 100m g /kgcou l d i ncrease the S OD and reduce the M DA o fm yocard i a l ti ssue . Conc l