细胞培养液渗透压之测量

1、細胞培養液滲透壓之測量第二組 鄭惠珊 92134001日期:11/17第十週目的 :滲透壓對細胞的形態及生理狀況有決定性的影響，本實驗利用Advanced 3D-II凝固點下降法滲透壓計，來測量溶液之滲透壓，再探討溶液滲透壓對細胞的影響。原理：使用急速降溫冷凍法測定凝固點溫度。1莫耳粒子可使1升液體之凝固點下降1.86 ，即定義為1 Osm（1000 mOsm ）Osmolarityosmolarity定義為每升溶液所含之溶質莫耳數，採用體積莫耳濃度; 然而osmolality指的是每公斤溶劑所含之溶質莫耳數，採用重量莫耳濃度。滲透壓計 (Osmometers)可用來測定osmolality的

2、值測量滲透壓測量只含單一溶質之溶液滲透壓，可利用下列公式Osmolarity = molarity × n × n: 一分子溶質解離後所產生之分子個數: 溶質之滲透壓係數(見講義p.32表格)滲透壓係數的值，取決於溶質的濃度和化學性質。其值可以小於1也可以大於1。電解溶液的係數值通常小於1。而隨著溶質在溶液的濃度愈來愈稀，溶質的滲透壓係數愈接1。溶質的滲透壓係數，可以藉由測量溶液的滲透壓，凝固點，熔點，或溶劑的蒸氣壓來決定。操作：此次配製三種濃度的NaCl溶液，分別是0.3%、0.9%、2.7%，先配2.7% NaCl溶液，再漸次稀釋。另外將人類血液置於三種濃度溶液中，10

3、L血液加入90LNaCl溶液，在顯微鏡下觀察紅血球的形態變化。 打開電源開關（在後面電源座右邊），“ Bath ”紅燈亮“ 8888 ”。 溫機約6090分鐘，待“ Bath ”紅燈明滅數分交替表示已達-7，即可開始使用。 校正：請先用100, 900 mOsm 標準查驗3次，將數值登記於流水記錄簿上（數值為100±2 ， 900±10 即為正常）若三次皆超出100±5，900±30請電請廠商來調，切勿自行謂整。 定量0.250.3之sample ，放入 tube ，按綠色鈕head 會自動降下。3 分鐘內讀數達 3000會有強 buzz 聲，之後約 3

4、0秒 head 會自動升起，此時讀數即為mOsmkg 值。 用畢洗淨Tip ，置入空 tube 並按下綠色鈕使 head 降下後再關閉電源。注意事項： 測 sample 時讀數若未達3000 即凝固，請檢查：A. Sample溫度要 15 以上。勿為有凝結核之懸浮液。B. 攪拌 probe之位置應如圖1。查證“Bath”溫度是否已達-7。 probe 價格非常昂貴，請小心勿碰壞，若顯示 “”即應更換probe。不用時應置入空 tube 並按下綠色鈕使 head 降下後再關閉電源結果:三個濃度溶液0.3%、0.9%、2.7%NaCl用公式所計算出之滲透壓理論值分別為95.38mOsm/

5、kg、286.15Osm/kg、858.46Osm/kg，此次實驗時儀器故障，只做出0.3% NaCl溶液之滲透壓，為67Osm/kg，百分誤差為(95.3867)/67=42.36%。另外紅血球於三種濃度中的形態觀察，一般動物細胞的等張溶液為305±10mOsm/kg，紅血球在3%低張溶液(滲透壓理論值95.38Osm/kg)中細胞破裂，顯微鏡下只觀察到細胞碎片（圖五），在0.9%溶液中則為一般正常的紅血球形態（圖三），在2.7%溶液中紅血球萎縮內凹（圖一）。討論:滲透壓測量值與理論值誤差的原因可能為連續稀釋時不夠準確造成人為誤差，或是配置時以量筒測量體積不夠準確。理論上紅血球等張溶液為0.9%NaCl，在0.420.46%NaCl開始漲破溶解，0.320.34%NaCl則全溶，實驗結果符合理論，0.3%NaCl溶液中看不到完整的紅血球。附圖:圖一:低倍觀察紅血球在2.7%NaCl溶液下呈現萎縮的形態圖二:高倍率觀察紅血球在2.7%NaCl溶液下呈現萎縮的形態圖三: