聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acr）和胶联剂甲叉双银杏叶提

1、    聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acr.）和胶联剂甲叉双银杏叶提取物对缺血再灌注大鼠血浆MDA、SOD、PAF、TXB2的影响*作者：高治平作者单位：（山西中医学院，山西 太原 030024）【摘要】  目的：研究银杏叶提取物（GBE）对心肌缺血再灌注（MIR）大鼠血浆MDA、SOD、PAF、TXB2的影响。方法：雄性Wister大鼠30只，随机分为3组: 假手术组、模型组、GBE组，每组10只。检测各组动物血浆中PAF、TXB2、MDA和SOD活性的变化。结果：与假手术组比较，模型组血中 PAF、TXB2和MDA含量显著升高（P<0

2、.01），SOD含量显著降低（P<0.01），GBE组血中 TXB2含量显著升高（P<0.05），PAF、SOD和MDA含量无显著性变化（P0.05）；与模型组比较，GBE组血中PAF、TXB2和MDA含量有显著性降低（P<0.05），SOD含量有显著性升高（P<0.01）。结论：GBE对MIR大鼠心肌有保护和治疗作用。 【关键词】  缺血再灌注损伤；银杏叶提取物；血小板活化因子；血栓素B2；丙二醛；超氧化物歧化酶  2丙烯酰胺（Bis.）在催化剂Effect of Ginkgo Biloba L. Extraction on MDA，SOD，PAF

3、 and TXB2    Levels in Plasma of Myocardial Ischemia Reperfusion Wister Rats    Gao Zhiping    （Shanxi College of TCM, Taiyuan Shanxi 030024）    Abstract   Objective：To study the effect of Ginkgo Biloba L. extraction （GBE）on MDA,

4、SOD, PAF and TXB2 levels in plasma of myocardial ischemia reperfusion （MIR） Wister rats. Methods: 30 male Wister rats were randomized into sham operation group, model group and GBE treatment group（n=10）. MDA, SOD, PAF and TXB2 levels in plasma of 3 groups were determined. Results: Compared with sham

5、 operation group, the contents of PAF, TXB2, MDA in plasma of model group rats were obviously increased（P0.01）, and SOD content was obviously decreased（P0.01）; TXB2 content in plasma of GBE treatment group rats was obviously increased（P0.05）, and MDA, SOD and PAF contents were not obviously changed（

6、P0.05）.Compared with model group, the content of PAF, TXB2 and MDA in plasma of GBE treatment group rats were obviously decreased（P0.05）, and SOD content was obviously increased（P0.01）.Conclusion: GBE can protect and treat MIR Wister rats.    Key words   ischemia reperfusion

7、; Ginkgo Biloba L. extraction （GBE）; PAF; TXB2; MDA;    SOD的作用下，聚合而成的具有三维网状结构的凝胶。通过改变Acr.单体的浓度和交联度，可以控制凝胶孔径的大小。在不连续电泳过程中，通过样品的浓缩效应、凝胶分子筛效应以及一般分离的电荷效应，把酶、蛋白质混合物浓缩成区带、分离。    银杏叶提取物（Ginkgo biloba L. extraction, GBE）是从银杏叶中提取的黄酮、内脂类物质。据报道银杏黄酮、银杏内脂类物质有清除自由基，抑制脂质过氧化的作用1；还有报道这类

8、物质有舒张血管平滑肌、增加局部血流量和防治心脑血管疾病的作用24。所以，近年来对缺血心肌再灌注（myocardial ischemia reperfusion, MIR）加GBE治疗的技术，挽救了大量心肌缺血患者的生命2，但GBE起作用的分子机制还不清楚。为此，作者特设计本实验，以研究GBE对MIR起作用的分子机制。现将实验结果报道如下，以指导临床用药。    1   材料与方法    1.1   实验材料    1.1.1   实验动物

9、0;  雄性Wister大鼠30只，体重220 g250 g，购自中国科学院上海药物所实验动物中心。    1.1.2   药品与试剂   银杏叶提取物（胶囊），规格0.2 g×20粒，购自上海信谊百路达药业有限公司，批号031204；GBE混悬液：1粒GBE（0.2 g）混悬于2 mL生理盐水（相当于100 mg/mL 的GBE混悬液）；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒，购自南京建成生物工程公司；血栓素B2（TXB2）放免试剂盒，购自北京东亚免疫技术研究所；血小板活化因子（PAF）试剂盒

10、，购自TPI公司。    1.1.3   实验仪器   XDH-3B心电图机，上海医用电子仪器厂生产；DH-150型动物人工呼吸机，浙江大学医学仪器厂生产；日立CR-22型超速冷冻离心机，日本日立株式会社生产。    1.2   实验方法    1.2.1   分组和给药   实验前先进行动物筛选，心电图检查无异常者进入实验。将30只大鼠随机分为3组：假手术组、模型组、GBE组，每组10只。在造模前，每日灌

11、胃1次，GBE组灌胃GBE混悬液1 mL（含GBE 100 mg），假手术组和模型组灌胃生理盐水1 mL，共灌胃14 d。    1.2.2   造模与标本采集   参照文献5方法造模，其中模型组和GBE组均行冠脉结扎，缺血30 min，再灌注50 min；假手术组只行冠脉穿线，但不结扎。最后一次灌胃后1 h，将大鼠腹腔麻醉，仰卧位固定，颈部去毛，切开皮肤，分离颈前肌，暴露气管，行气管插管。插管另端接于动物人工呼吸机行正压呼吸（呼吸时比11，呼吸频率60次/min，潮气量10 mL/kg），胸部去毛、消毒，纵行切开左侧胸廓皮

12、肤约2 cm，在第四、第五肋间钝性分离肌层，剪断左侧胸廓第4肋，用开胸器撑开胸腔，暴露心脏，小心剪开心包膜，以3/8不锈钢小圆针和6/0号丝线穿过肺动脉圆锥与左心耳交界稍下1 mm2 mm处，结扎左冠状动脉左前降支。结扎前后记录导联心电图，以结扎部位以下心肌变苍白、搏动减弱且心电图ST段弓背向上明显上移为造模成功。缺血30 min，再灌注50 min，处死动物，心脏采血，分别加入含2% EDTA-Na、0.109 mol/L枸橼酸钠的离心管内，离心（10 min，3 000 r/min）得上清液标本，放于-20冰箱贮存备用。    1.2.3  

13、; 指标观察和检测方法   TXB2用放射免疫分析法直接测定6； SOD、MDA按试剂盒说明书操作测定，PAF用ELISA法检测。测定工作在中科院上海药物研究所心血管研究室和徐汇区中心医院中心实验室完成。    1.2.4   统计学方法   所有数据采用均数±标准差（±s）表示。两组间比较用2检验。用SPSS10.0软件包进行统计学分析。    2   结   果    各组大鼠血浆中

14、PAF、TXB2、MDA、SOD含量比较结果见表1。    从表1可见，模型组PAF、TXB2、MDA、SOD各项指标与假手术组比较，均有极显著差异（P0.01）。GBE组各项指标与模型组相比，亦有极显著差异（P0.01）。GBE组PAF、MDA、SOD三项指标与假手术组相比无显著性差异（P0.05）。    3   讨   论    银杏叶提取物是从银杏叶中提取的黄酮、内脂类物质。有文献报道，缺血再灌注为自由基的产生提供了适宜条件，于是缺血再灌注时产生大量活性氧自

15、由基， 而活性氧自由基和细胞膜脂质发生反应，生成大量MDA，并使抗氧化酶（SOD） 含量降低，导致氧化与抗氧化系统失衡，清除自由基的能力降低，从而引起心血管组织严重损伤1，2，5。自由基对心血管组织造成损伤的程度主要与MDA含量及SOD活性变化有关。本研究中模型组大鼠在心肌缺血再灌注时血浆MDA含量显著升高，SOD活性显著降低；GBE组却能明显降低心肌缺血再灌注时血浆MDA含量，明显提高SOD含量。说明经GBE预处理的大鼠，能显著降低缺血再灌注引起的脂质过氧化，抑制MDA的生成，具有一定的抗氧化作用。提示GBE具有抗自由基，维持膜功能稳定的作用。    也有文献报

16、道，当冠状动脉阻断后，冠状动脉循环中的血小板、白细胞和血管内皮细胞受刺激后产生大量PAF，它能激活和趋化中性粒细胞、巨噬细胞引起花生四烯酸和前列腺素等产物的释放。血栓素A2 （TXA2）是花生四烯酸的重要代谢产物之一，性质极不稳定，半衰期仅30秒，很快水解为较稳定的代谢产物TXB2。PAF和TXB2具有收缩血管、诱导血小板聚集和形成血栓等作用3，4，7。本研究也观察到：模型组大鼠心肌缺血再灌注时血浆PAF和TXB2含量显著升高；GBE预处理组却能明显降低心肌缺血再灌注时血浆PAF和TXB2含量。说明经GBE预处理的大鼠，能显著降低血细胞和血管内皮释放PAF和TXB2的量，减少缺血再灌注时引起的

17、血管收缩、血小板聚集和血栓形成等。提示GBE具有降低血细胞和血管内皮释放PAF和TXB2、防止血管收缩、血小板聚集和血栓形成的作用。    综上所述，GBE既有明显降低MDA含量，提高SOD含量，清除自由基，维持膜功能稳定的作用；又有拮抗PAF和TXB2释放，防止血管收缩、血小板聚集和血栓形成的作用。这将为进一步利用银杏叶，开发一类用于预防和治疗心肌缺血再灌注损伤的有效制剂提供实验和理论依据。【参考文献】  1何正显，信玉琼. 银杏叶的化学成分及抗自由基作用探讨J. 山西中医， 2003，19（1）:46-47.2刘万福，耿涛，陈佑生，等. 银杏叶片治疗冠心病临床应用J. 中国心血管康复医学，1996，5（3-4）:69-70.3梁翌，杨为民，李绪兰，等. 银杏叶提取物对兔血