第章氨基酸与蛋白质的一级结构ppt课件

1、第一节：氨基酸，第一节：氨基酸，2学时学时第二节：氨基酸的分别分析，第二节：氨基酸的分别分析，0.5学时学时第三节：肽及其性质，第三节：肽及其性质，0.5学时学时第四节：蛋白的分别，第四节：蛋白的分别，0.5学时学时第五节：一级构造测定，第五节：一级构造测定，1.5学时学时蛋白质种类与功能的多样性蛋白质种类与功能的多样性 1010-1012构造蛋白贮藏蛋白收缩蛋白转运蛋白l180180多种天然多种天然AAAA，大多数是不参与蛋白质组，大多数是不参与蛋白质组成的。这些成的。这些AAAA被称为非蛋白质被称为非蛋白质AAAA。l参与蛋白质组成的参与蛋白质组成的AAAA为蛋白质为蛋白质AAAA，常见的

2、，常见的只需只需2020种种 根本氨基酸，规范氨基酸根本氨基酸，规范氨基酸l 表达方式：三字母或单字母的简写符号表达方式：三字母或单字母的简写符号l除脯氨酸外，其他均具有如下构造通式。除脯氨酸外，其他均具有如下构造通式。各种氨基酸的区别在于侧链各种氨基酸的区别在于侧链R R基的不同。基的不同。 -氨基酸氨基酸可变部分可变部分不变部分不变部分COOHCHH2NR一、根本氨基酸1, 1, 按侧链按侧链R R基的化学构造，分为三类基的化学构造，分为三类脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸1515种种C2:1 C3:3 C4:3 C2:1 C3:3 C4:3 C5:4 C6:4C5:4 C6:4芳香族氨基酸芳香族

3、氨基酸3 3种种杂环族氨基酸杂环族氨基酸2 2种种GlyAlaValLeuIlePheTyrTrpCysMetSS氨基酸的氨基酸的R R基大小基大小l分为分为4 4类：类：l非极性氨基酸：非极性氨基酸：9 9l 极性不解离：极性不解离：6 6l极性氨基酸极性氨基酸 解离带负电荷：解离带负电荷：2 2酸性酸性l 极性解离极性解离l 解离带正电荷：解离带正电荷：3 3碱性碱性lPOLARNON-POLARTyrHisGly酸性酸性中性中性BasicAspGluGlnCysAsn SerThrLysArgAlaValIleLeuMetPheTrpPro氨基酸的极性分类氨基酸的极性分类极性或非极性，是

4、影响蛋白质构造与性质的关键。极性或非极性，是影响蛋白质构造与性质的关键。-+SS有大有小有正有负有极性非极性 形形色色的氨基酸側基 l含硫氨基酸含硫氨基酸l含羟基氨基酸含羟基氨基酸l-C-C带分支氨基酸带分支氨基酸l二羧基一氨基氨基酸二羧基一氨基氨基酸l二氨基一羧基氨基酸二氨基一羧基氨基酸l亚氨基酸亚氨基酸l在少数蛋白质中分别出一些不常见的氨在少数蛋白质中分别出一些不常见的氨基酸，通常称为非规范氨基酸。由相应基酸，通常称为非规范氨基酸。由相应的根本氨基酸衍生而来的。的根本氨基酸衍生而来的。NHHOCOOH4-羟基脯氨酸H2NCH2CHCH2CH2CHCOOHOHNH25-羟基赖氨酸NH2CH3

5、NHCH2CHCH2CH2CHCOOH6-N-甲基赖氨酸HOIICH2CHCOOHNH23,5-二碘酪氨酸 COOHCHH2NR手性手性C C；手性分子；手性分子；有两种不同的排布方式，对应有两种不同的排布方式，对应D D，L L两种构型。两种构型。旋光方向不同。左或右旋。旋光仪测定。旋光方向不同。左或右旋。旋光仪测定。 D-甘油醛甘油醛 (glycerose)OHCHOCH2OHHC123l 20 种天然氨基酸除甘氨酸外，都带一个不l对称碳原子碳原子，都有光学异构体镜映l体。l知 19 种天然氨基酸均为 L型氨基酸。l比旋光度D25(单位浓度、单位长度下的旋光度，/c*l)是氨基酸的重要物理

6、常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要根据 。l一氨基酸的兼性离子方式：一氨基酸的兼性离子方式：l 氨基酸的两个重要性质：氨基酸氨基酸的两个重要性质：氨基酸晶体的熔点高晶体的熔点高200200C C；氨基；氨基酸使水的介电常数增高。酸使水的介电常数增高。 AA是两性电解质COOHNH2 H+COO-R - C - HNH2 H+R - C - HCOO-NH2R - C - H酸性环境酸性环境中性环境中性环境碱性环境碱性环境+1-10pK1 2pK2 9.4等电点等电点6.0等电点等电点pIpI：所带净电荷为零。电场中不挪动。：所带净电荷为零。电场中不挪动。此氨基酸在此氨基酸在 pH 2 pH 2

7、或或 9 9 附近，有缓冲作用。附近，有缓冲作用。赖氨酸的解离及等电点计算赖氨酸的解离及等电点计算HA2+A+A0A-l等电点等电点(isoelectric point,pI)(isoelectric point,pI)：分子：分子呈电中性时溶液的呈电中性时溶液的pHpH值。为兼性离子两值。为兼性离子两侧解离基团的算术平均值。侧解离基团的算术平均值。l中性氨基酸：酸性和碱性基团的算术平中性氨基酸：酸性和碱性基团的算术平均值：均值： pI = (pK-COO- + pK- pI = (pK-COO- + pK-NH2 )/2NH2 )/2， pI pI6 6l l酸性氨基酸：两个酸性解离基团的算

8、术酸性氨基酸：两个酸性解离基团的算术平均值平均值pI = (pK-COO- + pKR-COO-pI = (pK-COO- + pKR-COO- )/2 )/2 ， pI pI2 2l碱性氨基酸：两个酸性解离基团的算术碱性氨基酸：两个酸性解离基团的算术平均值平均值pI = (pK-NH2+ pKR-pI = (pK-NH2+ pKR-NH2 )/2 NH2 )/2 ， pI7 pI7 COOHCHH2NR亚硝酸反响亚硝酸反响烃基化反响烃基化反响酰化反响酰化反响脱氨基反响脱氨基反响西佛碱反响西佛碱反响成盐成酯反响成盐成酯反响成酰氯反响成酰氯反响脱羧基反响脱羧基反响叠氮反响叠氮反响侧链反响侧链反响

9、茚三酮反响茚三酮反响成成 肽肽 反反 应应用途：常用于氨基酸的定性或定量分析。用途：常用于氨基酸的定性或定量分析。CCCOOO茚三酮茚三酮CCCOOOHOHH2OH2O水合茚三酮水合茚三酮CO2NH2RCHO+CCCOOHOHH2NCHCOOHRCCCOOOHOH+2NH3CCCOOCCCOO-NH4+NH2O2+CCCOOOCCCOOHHOl在近紫外区在近紫外区(200-(200-400nm)400nm)只需酪氨酸、只需酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的才干。吸收光的才干。l酪氨酸的酪氨酸的maxmax275nm275nm，l苯丙氨酸的苯丙氨酸的maxmax257nm257

10、nml色氨酸的色氨酸的maxmax280nm280nml氨基酸的构造通式为氨基酸的构造通式为氨基酸。蛋白质氨基酸。蛋白质除含除含C,H,OC,H,O外，还含有外，还含有N N。AAAA平均分子量平均分子量为为110110。l不同蛋白的含氮量皆在不同蛋白的含氮量皆在16%16%左右。只需测左右。只需测定定N N含量，含量， N N含量含量/16%/16%即为蛋白含量。即为蛋白含量。l l - -凯氏定氮法的实际根底凯氏定氮法的实际根底l根据根据R R基的极性。原理：分配层析。基的极性。原理：分配层析。l 滤纸层析：滤纸层析：l 薄层层析：薄层层析：l根据氨基酸的净电荷及根据氨基酸的净电荷及R R

11、基的极性：基的极性：l 离子交换层析：离子交换层析：l阴离子交换树脂阴离子交换树脂-N(CH3)3OH-N(CH3)3OH，阳离子交换树脂，阳离子交换树脂-SO3H-SO3Hl根据氨基酸的净电荷及质点大小：根据氨基酸的净电荷及质点大小：l 电泳：电泳：l层析法层析法色层分析法色谱色层分析法色谱系统的组成固定相静相系统的组成固定相静相流动相动相流动相动相l分配定律分配定律当溶质在两种给定的互不相溶的溶当溶质在两种给定的互不相溶的溶剂中分配时，在一定的温度下到达平衡后，溶质剂中分配时，在一定的温度下到达平衡后，溶质在两相中的浓度比值为一常数在两相中的浓度比值为一常数. .此比值即分配系数此比值即分

12、配系数kdkd。l 固定相：纤维素上吸附的水固定相：纤维素上吸附的水流动相：展层溶剂，有机相流动相：展层溶剂，有机相层析时，混合层析时，混合AAAA在两相中不断分配，疏水在两相中不断分配，疏水性强的性强的AAAA在固定相水中溶解度较小，与水在固定相水中溶解度较小，与水的作用力也较小，随展层剂的展层挪动的作用力也较小，随展层剂的展层挪动也挪动较远间隔迁移率也挪动较远间隔迁移率RfRf大。大。l极性强的极性强的RfRf值小，疏水性强的值小，疏水性强的RfRf大。大。l分别、鉴定分别、鉴定AAAA混合物的方法。混合物的方法。l将以下每组混合物分别用正丁醇将以下每组混合物分别用正丁醇- -醋酸醋酸-

13、-水进展纸层析，指出每组的相对迁移率。水进展纸层析，指出每组的相对迁移率。l(1) Val(1) Val和和Lys;Lys;l(2) Phe(2) Phe和和Ser;Ser;l(3) Leu(3) Leu、AlaAla、SerSerl一个氨基酸的羧基一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的与另一个氨基酸的氨基之间失水构成氨基之间失水构成的酰胺键称为肽键，的酰胺键称为肽键，所构成的化合物称所构成的化合物称为肽。为肽。由两个氨基酸组成的肽称为二肽，由几个到几十由两个氨基酸组成的肽称为二肽，由几个到几十个氨基酸组成的肽称为寡肽，由更多个氨基酸组个氨基酸组成的肽称为寡肽，由更多个氨基酸组成的肽那么称为多肽。组

14、成肽链的氨基酸单元称成的肽那么称为多肽。组成肽链的氨基酸单元称为氨基酸残基。为氨基酸残基。CCNCCNCCNCCNCCH2CHCH2CH2CH2COO-OHCO2HCH2CONH2OHCH3H3N+OOOOHHHHHHHHHSerValTyrAspGlnCH3N-端C-端肽键l在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序陈列，这种陈列顺序称为氨基酸顺序。l方向性：一条多肽链有两个末端，自在-氨基，称为氨基端或N-端；游离-羧基，称为羧基端或C-端。l氨基酸的顺序：N-端C-端l如上述五肽可表示为：Ser-Val-Tyr-Asp-Glul 丝氨酰缬氨酰酪氨酰天冬氨酰谷氨酸肽单位肽单位主链：侧链l熔点高。这

15、阐明它和氨基酸一样，是以熔点高。这阐明它和氨基酸一样，是以偶极离子方式构成离子晶格而存在的。偶极离子方式构成离子晶格而存在的。l2. 2. 具有酸碱两性性质和等电点。肽的具有酸碱两性性质和等电点。肽的酸碱性质主要来自游离末端酸碱性质主要来自游离末端-NH2-NH2和和游离末端游离末端-COOH-COOH以及侧链以及侧链R R上可解上可解离的基团。每一种肽都有其相应的等电离的基团。每一种肽都有其相应的等电点。末端点。末端-NH2,-NH2,- COOH- COOH比游离氨比游离氨基酸的酸碱度降低。基酸的酸碱度降低。 3. 3. 具有旋光性。这是由于肽中有不对称具有旋光性。这是由于肽中有不对称C

16、C原原子存在。子存在。4.4.具双缩脲颜色反响三肽以上。具双缩脲颜色反响三肽以上。 双缩脲双缩脲H2N-CO-NH-CO-NH2H2N-CO-NH-CO-NH2是两分子的尿是两分子的尿素经加热失去一分子素经加热失去一分子NH3NH3而得到的产物。而得到的产物。 肽和蛋白特有，氨基酸无。普通含有肽和蛋白特有，氨基酸无。普通含有两个或两个以上肽键的化合物与两个或两个以上肽键的化合物与CuSO4CuSO4碱性碱性溶液都能发生双缩脲反响，生成紫红色或溶液都能发生双缩脲反响，生成紫红色或蓝紫色的复合物。蓝紫色的复合物。 用途：测定肽或蛋白质含量。用途：测定肽或蛋白质含量。l在生物体中，多肽最重要的存在方

17、式是在生物体中，多肽最重要的存在方式是作为蛋白质的亚单位。作为蛋白质的亚单位。l但是，也有许多分子量比较小的多肽以但是，也有许多分子量比较小的多肽以游离形状存在。这类多肽通常都具有特游离形状存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽。殊的生理功能，常称为活性肽。l如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多肽；谷胱甘肽；蛇毒多肽等。肽；谷胱甘肽；蛇毒多肽等。l部分肽中含有部分肽中含有D-D-氨基酸。氨基酸。l CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOHCH2CH2CH2CH2CHNH2CHNH2COOHCOOHCH2CH2SHSH 1.参与体内氧化复原反响

18、参与体内氧化复原反响 2.作为辅酶参与氧化复原反响作为辅酶参与氧化复原反响 维护巯基酶或含维护巯基酶或含Cys的蛋白质中的蛋白质中 SH的复原性的复原性 防止氧化物积累防止氧化物积累GSH+GSH-GSSG根据：所要提取的蛋白目的蛋白与其它根据：所要提取的蛋白目的蛋白与其它蛋白杂蛋白的不同进展分别。蛋白杂蛋白的不同进展分别。 溶解度不同溶解度不同: 反相柱层析；盐析反相柱层析；盐析 分子量不同分子量不同: 透析；凝胶过滤法透析；凝胶过滤法 所带电荷不同所带电荷不同: 电泳；离子交换层析电泳；离子交换层析 特有的亲和力：亲和层析特有的亲和力：亲和层析l不同的蛋白质溶解度不同。且溶解度随外不同的蛋

19、白质溶解度不同。且溶解度随外界条件如盐浓度，界条件如盐浓度，pHpH值，温度等而变。值，温度等而变。 盐对蛋白质浓度的影响 盐溶 Salting-in:加少量盐使蛋白质溶解度变大 盐析 Salting-out: 加大量盐使蛋白质由溶液中沉淀出來 蛋白质溶解度和蛋白质溶解度和pH值及盐浓度有关值及盐浓度有关0.0010.0050.01 0.02 NaCl(mol/L)pI4.8 5.0 5.2 5.4 5.6pH溶解度蛋白的稳定要素：蛋白的稳定要素：1 1带电层带电层2 2水化层水化层参与少量盐：添参与少量盐：添加带电层，促进加带电层，促进溶解。溶解。 -盐溶盐溶Aggregate蛋白质分子外表

20、的疏水性区域，聚集許多水分子，蛋白质分子外表的疏水性区域，聚集許多水分子，当参与盐时，這些水分子被抽出，暴显露來的疏水当参与盐时，這些水分子被抽出，暴显露來的疏水性区域相互结合，构成沉淀。性区域相互结合，构成沉淀。 盐析 Salting-out ：Ionic strength溶解度+-+-+AmmoniumsulfateSodiumsulfateA little salting-in effectNH4+SO42-= hydrophobic硫酸铵分级沉淀硫酸铵分级沉淀l又称为分子筛层析。依蛋白质分子量的差别，又称为分子筛层析。依蛋白质分子量的差别，经过具有分子筛性质的凝胶而分别。经过具有分子筛

21、性质的凝胶而分别。l葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G10-G200G10-G200l琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶2B,4B,6B2B,4B,6Bl聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶S100S100S600S600 凝胶颗粒小分子进入凝小分子进入凝胶分子内，被胶分子内，被滞留滞留大分子在凝大分子在凝胶颗粒间挪胶颗粒间挪动，较快流动，较快流出出溶剂流动方向溶剂流动方向按按分分子子量量从从大大到到小小依依次次流流出出l如两分子间有专注性亲和力特别的结合和如两分子间有专注性亲和力特别的结合和识别才干，具有针对性，以其中一种作为识别才干，具有针对性，以其中一种作为“鱼饵，可把另外一种鱼饵，可把另外一种“钓出来。其它钓出来。其它

22、蛋白不被吸引而结合不上。蛋白不被吸引而结合不上。 亲和层析法的作用机理：固相载体(1)(2)(3)ABSampleWashingElutionXB亲和基团的配体XBAAl在外电场的作用下，带电颗粒向着与其电性在外电场的作用下，带电颗粒向着与其电性相反的电极挪动，这种景象称为电泳。相反的电极挪动，这种景象称为电泳。l蛋白质有各自的等电点。在非等电点时，蛋蛋白质有各自的等电点。在非等电点时，蛋白质颗粒均带有不同的电荷。白质颗粒均带有不同的电荷。l蛋白质颗粒在电场中挪动的速度蛋白质颗粒在电场中挪动的速度v v取决于取决于电场强度电场强度(E)(E)，所带的净电荷，所带的净电荷(q)(q)以及与介质以

23、及与介质的摩擦系数的摩擦系数(f(f，即颗粒大小及外形，即颗粒大小及外形) )。lSDSSDS十二烷基磺酸钠是一种阴离子型外十二烷基磺酸钠是一种阴离子型外表活性剂，它可以与蛋白质中的氨基酸残表活性剂，它可以与蛋白质中的氨基酸残基按大约基按大约1 1 2 2比例结合，使蛋白以一条比例结合，使蛋白以一条无构型的长条分子存在，且分子外表均匀无构型的长条分子存在，且分子外表均匀结合一层负的结合一层负的SDSSDS的电荷，蛋白质分子原有的电荷，蛋白质分子原有电荷间的差别那么可以忽略。电荷间的差别那么可以忽略。l用知分子量的蛋白质作为规范，那么可以用知分子量的蛋白质作为规范，那么可以估算出不同蛋白质的分子

24、量。估算出不同蛋白质的分子量。l一、蛋白质构造概述一、蛋白质构造概述l二、一级构造测定方法二、一级构造测定方法l三、同源蛋白质及构造进化三、同源蛋白质及构造进化l四、镰刀型血红蛋白分子病四、镰刀型血红蛋白分子病一级构造一、蛋白质的构造层次一、蛋白质的构造层次四级构造二级构造三级构造氨基酸 定义定义 1969年，国年，国际纯化学与运用化际纯化学与运用化学委员会学委员会IUPAC 规定：蛋白质的规定：蛋白质的一级构造指蛋白质一级构造指蛋白质多肽连中多肽连中AA的陈列的陈列顺序，包括二硫键顺序，包括二硫键的位置。的位置。前提：样品均一、纯前提：样品均一、纯度度97%以上、知分以上、知分子量子量F.

25、Sanger (1953, Cambridge U) Insulin 胰岛素胰岛素 (A, B chains)以传统氨基酸定序法决议蛋白质序列S SSSS S+NH3NH3+-OOCQGIVEQCCTSI C SLYLENYCNCOO-FSFVNQHLCGHLVEALYLVCGERGFYTPKT B-chain A-chain 一级构造一级构造 (Primary structure)(1)直接测定氨基酸测序：Edman degradationF. Sanger (Cambridge U.) Insulin 胰島素 (A, B chains) (2) 由 cDNA 序列反推氨基酸序列：l1 测定

26、多肽链的数目，拆分多肽链，分析测定多肽链的数目，拆分多肽链，分析多肽链的多肽链的N末端和末端和C末端残基末端残基l2断裂多肽链内、间的二硫键断裂多肽链内、间的二硫键l3 测定每条多肽链的测定每条多肽链的AA组成组成l4 多肽链断裂成小肽段多肽链断裂成小肽段 5 测定各个肽段的测定各个肽段的AA顺序顺序 l6 确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序7 确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置lSangerSanger法。法。2,4-2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，可二硝基氟苯在碱性条件下，可以与肽链以与肽链N-N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯端的游离氨基作用，生成二硝基苯

27、衍生物衍生物DNP-DNP-肽。肽。l酸解，得黄色酸解，得黄色DNP-DNP-氨基酸，用乙醚抽提分别。氨基酸，用乙醚抽提分别。不同的不同的DNP-DNP-氨基酸可以用色谱法进展鉴定。氨基酸可以用色谱法进展鉴定。一一N N末端分析法末端分析法O2NFNO2+ H2NCHCROHNCHCROO2NNO2H+H2OO2NNO2HNCHCROOH+氨基酸DNFBN-端氨基酸DNP衍生物DNP-氨基酸是游离氨基酸、多肽及蛋白共有的一个反响是游离氨基酸、多肽及蛋白共有的一个反响用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基末端氨基酸酸.DNS +DNS + AA AA 多肽多肽

28、 蛋白蛋白弱碱弱碱DNS-DNS-AA AA 多肽多肽 蛋白蛋白酸酸DNS-AA +DNS-AA +游离游离AAAA乙醚抽提，有荧光乙醚抽提，有荧光l在可用在可用8mol/L8mol/L尿素或尿素或6mol/L6mol/L盐酸胍使盐酸胍使蛋白变性，亚基分开存在下，运用过蛋白变性，亚基分开存在下，运用过量的量的- -巯基乙醇，使二硫键复原为巯基，巯基乙醇，使二硫键复原为巯基，然后用烷基化试剂维护生成的巯基，以然后用烷基化试剂维护生成的巯基，以防止它重新被氧化。防止它重新被氧化。(三三)氨基氨基酸组成的酸组成的分析：分析：酸，碱解酸，碱解后氨基酸后氨基酸分析仪测分析仪测定定l1 1、 酶裂解法酶裂

29、解法 胰蛋胰蛋白酶白酶蛋白水解酶蛋白酶：蛋白水解酶蛋白酶： 糜蛋糜蛋白酶肽链内切酶白酶肽链内切酶嗜热菌嗜热菌蛋白酶蛋白酶胃蛋白胃蛋白酶酶lTrypsin ：R1=赖氨赖氨酸酸Lys和精氨酸和精氨酸Arg侧链专注性较强，侧链专注性较强，水解速度快。水解速度快。NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1水解位点水解位点1)1)胰蛋白酶胰蛋白酶专注性胰蛋白酶断裂Phe,Trp,Tyr等芳香族AA的羧基所构成的肽键断裂键临近的基团 碱性：裂解才干 酸性：裂解才干NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1专注性糜蛋白酶专注性糜蛋白酶要求被断裂键两侧的残基都是疏

30、水性要求被断裂键两侧的残基都是疏水性AAAA如如phe-Phephe-Phe最适最适pH2pH2。可用来确定二硫键的位置。可用来确定二硫键的位置。NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1l溴化氰水解法，它能选择性地切割溴化氰水解法，它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所构成的肽键。由甲硫氨酸的羧基所构成的肽键。l1 1、EdmanEdman化学降解法化学降解法lEdmanEdman苯异硫氰酸酯法氨基酸顺苯异硫氰酸酯法氨基酸顺序分析法实践上也是一种序分析法实践上也是一种N-N-端分析端分析法。此法的特点是可以不断反复循法。此法的特点是可以不断反复循环，将肽链环，将肽链N-N-

31、端氨基酸残基逐一进端氨基酸残基逐一进展标志和解离。展标志和解离。 用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨末端氨基酸基酸.亦称亦称Edman反响反响弱碱弱碱 AA AAPITC+ PITC+ 多肽多肽 蛋白蛋白 AA AAPTCPTC多肽多肽 蛋白蛋白无水甲酸无水甲酸或或HFHFPTH-AA + PTH-AA + 少一个少一个AAAA的多肽或蛋白的多肽或蛋白乙酸乙酯抽提乙酸乙酯抽提此反响可循环进展此反响可循环进展 进展进展n n轮反响，可测出轮反响，可测出n n个残基顺序个残基顺序一次：一次：60607070个残基的肽段顺序个残基的肽段顺序 l采用两种或多种不同

32、的断裂方法将多肽采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其别分开来。并将其别分开来。l利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。基酸顺序。A A法水解得到四个小肽：法水解得到四个小肽： A1 Ala-Phe A1 Ala-Phe A2 Gly-Lys-Asn-Tyr A2 Gly-Lys-Asn-Tyr A3 Arg-Tyr A3 Arg-Tyr A4 His-Val A4 His-ValB B法水解得到三个小肽：法水解得到三个小肽： B1 Ala-Phe-Gly-Lys B1 Ala-Phe-Gly-Lys B2 Asn-Tyr-Arg B2 Asn-Tyr-Arg B3 Tyr- His-Val B3 Tyr- His-Val 一同源蛋白质的物种差别与生物进化一同源蛋白质的物种差别与生物进化 1 1、同源蛋白质、同源蛋白质在不同生物体中行使一样或在