生化实验常用溶液的配制

1、生化实验常用溶液的配制一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻

2、轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶

3、液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解2

4、0.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15mi

5、n，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂

6、瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）100×Denhardt试剂（Denhardt's regent） 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）水 2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤

7、除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）水 5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小

8、份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液 成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度配制10ml溶液各

9、成分的用量质量浓度为20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20×SSC 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴

10、至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2P

11、O4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。 1mol/L 磷酸二氢钠（ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ml）最终pH值877850815775735685625565510450390330280 123150185225265315375435490550610670720 6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水

12、 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8ml Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2  二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/

13、L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 染料1溴酚蓝（bromophenol blue） 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xyle

14、ne cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补

15、足到10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400型）水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青FF15聚蔗糖（400型）水 2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青FF1.5g 补足到10ml 6×甘油凝胶上样液（4贮存） 成分及终浓度配制10ml

16、溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g 补足到10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2溴酚蓝0.2二甲苯

17、青FF200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油 水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml补足到10ml  三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后

18、，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为

19、100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。 四.常用抗生素氨苄青霉素（amp

20、icillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素（kan

21、amycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸（nalidixic

22、acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4  

23、0;                 9.465g蒸馏水                    加至1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04       

24、              9.07g蒸馏水                    加至1000m1分装在棕色瓶内，于4冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表: pH  甲液ml  乙液mI   

25、; pH  甲液ml  乙液mI    5.29    5.59    5.91    6.24    6.47    6.64    2.5    5.0    10.0    20.0    30.0    40.0

26、    97.5    95.0    90.0    80.0    70.0    60.0    6.81    6.98    7.17    7.38    7.73    8.04    50.0&

27、#160;   60.0    70.0    80.0    90.0    95.050.040.030.020.010.05.0 (二)0.3台盼兰染液    称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。    (三)0.5酚红指示剂    酚红  &

28、#160;                   0.5g 0.1N(0.4)NaOH           15ml    双蒸水             

29、60;      85ml    将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。    (四)5.6NaHCO3溶液    称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4冰箱保存)    (五)10gml秋水仙素    秋水仙

30、素                    lOmg生理盐水                    100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。   

31、; (六)0.4KCl-0.4柠檬酸钠低渗液    将0.4KCl和0.4柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。    (七)2柠檬酸钠    称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。   （八）0.2次甲基兰染液    称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。    (九)0.5醋酸洋红(Aceio Carmine)染液    洋红 

32、                   lg    醋酸                    90ml    蒸馏水    

33、60;             110ml    将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。    (十)1甲苯胺兰(Toluidine blue)    称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。 &

34、#160;  (十一)1/3000中性红染液    取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。    (十二)Giemsa染液    1贮备液Giemsa粉                    1g纯甘油      

35、           66ml 甲醇                      66ml    先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好

36、。    2工作液    临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。    (十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液    苏木精                    1.0g    乙醇    

37、60;                 50ml    醋酸                      5ml    甘油    

38、                  50ml    硫酸铝钾                    5g    蒸馏水     &

39、#160;                50ml    将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。    二、细胞化学和细胞组分分离溶液

40、    (一)M一缓冲液     眯唑(Imidazole)                    3.404g    KCI                 

41、               3.7g    MgCl2·6H2O                         101.65mg   

42、ECTA                               380.35mg    EDTA              

43、                 29.224mg    巯基乙醇          0.07ml     甘油              

44、                 297ml    蒸馏水                             加至1000m

45、l    用lNHCl调pH至7.2室温保存。    (二)2Triton X一100溶液    量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。   （三）0.2考马斯亮兰R-250染液    甲醇                  

46、0;            46.5ml    醋酸                               7.0ml   

47、 考马斯亮兰                         0.2g蒸馏水                        

48、60;    加至100ml(四)A0.1碱性固绿染液(pH8.08.5)    10.1固绿水溶液    固绿(Fast green)                    0.1g    蒸馏水       

49、;                       100ml    20.05Na2C03溶液    Na2C03                 &#

50、160;             50mg蒸馏水                              100ml用时按1:1体积混合即可。    B0.1

51、酸性固绿染液(pH2.2)    10.1固绿水溶液。    2molL×75盐酸液    盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml    用时按l:1混合。    (五)甲基绿一哌咯宁染液    1.1molL醋酸缓冲液(pH4.8)：        (1)醋酸     

52、                17ml         蒸馏水                          加至200ml

53、        (2)醋酸水                       13.5g    蒸馏水               &

54、#160;              加至lOOml用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。    2甲基绿一哌咯宁(methyl greenPyrcnln)        5哌咯宁水溶液               

55、  6ml        2甲基绿水溶液                 6ml        蒸馏水                

56、60;         16ml        lmol/L醋酸缓冲液               16ml    lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。    (六)Schiff试剂    将碱性品红0

57、.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50时过滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得 Schiff试剂。避光低温保存。    (七)联苯胺混合液    联苯胺(4.4 Diamino benzidine)       0.2g    95乙醇     

58、;                       lOOml    3过氧化氢                       

59、;  2滴    此液临用时配制。    (八)l番红水溶液    番红(Safranin)                      1.0g    蒸馏水        

60、60;                     100ml    (九)1SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)     SDS               &#

61、160;              10g     45乙醇                            100ml    (十)

62、1molLTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8    Tris                                 12.114g 

63、60;  蒸馏水                               lOOml    先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml  (十一)Ringer Solution氯化钠(冷血动物用065克) 

64、          0.9克氯化钾                               0.042克氯化钙        

65、                       0.025克蒸馏水                          &#

66、160;    100ml(十二)淀粉肉汤培养基蛋白                                 2g淀粉          &#

67、160;                      6g牛肉汤                           &#

68、160;   100ml用10NaHCO3调pH至7.07.2(十三)0.25molL蔗糖一0.003molL氯化钙溶液蔗糖                                 85.5g氯化钙    

69、60;                          0.33g蒸馏水                        

70、0;     1000ml (十四)1詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1刚果红染液刚果红                              1g蒸馏水   

71、                           100ml(十六)Gomori硝酸铅作用液0.05molL醋酸缓冲液(pH5)          lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其    

72、60;    42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml B-甘油磷酸钠                        2g醋酸铅               &

73、#160;              2g5氯化镁                           5ml以上作用液在临用时配制，最终在pH55.2，过滤使用。(王世藩  汇编)三、细胞培养和细胞

74、融合溶液(一)0.01molLPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)pH7.2。0.2molL磷酸氢二钠液(甲液)：  NaH2PO4·12H2O                       35.814g双蒸水         &

75、#160;                    加至500ml0.2molL磷酸二氢钠液(乙液):    NaH2PO4·12H2O                   

76、0;   15.601g    双蒸水                              加至500ml    取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于

77、4冰箱备用。    (二)50PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)    称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37予热的MEM培养液，混匀，保温在37水浴中待用。    (三)MEM培养液(含10小牛血清)    MEM培养液(日本制药株式会社)        9.4g    双蒸水   &

78、#160;                         1000ml      NaHCO3                  

79、0;           1.5g    谷氨酰胺(L-glutamin)               0.292g    56灭活30分钟的小牛血清110ml    MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.20.3)，然后加灭活的

80、小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4冰箱保存备用。    (四)0.25胰蛋白酶一0.02EDTA混合消化液    胰蛋白酶(Trypsin)粉                 0.25g    EDTA粉         

81、0;                   20.0mg    0.01molL PBS                      100ml    先

82、用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G5抽滤，分装置4冰箱中保存。    (五)Hanks液    1原液甲    NaCl                         

83、        160g    KCl                                  8g    MgSO4·

84、7H2O                           2g    MgCI2·6H2O                 &

85、#160;         2g    溶于800ml馏水中。    CaCl2(无水)                           2.8g    溶于100m

86、l蒸馏水中。    将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。    原液乙    Na2HPO4·12H2O                         3.04g    KH2PO4

87、                               1.2g     葡萄糖               &#

88、160;                20.0g    溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。    2使用液    甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4冰箱中保存。使用时用5.6NaHCO3调pH值到所需要求。 

89、60;  (六)1640培养液(含lO小牛血清)    RPMI-1640粉                           10.39g    双蒸水         

90、60;                       加至1000ml    通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO31.5克调pH值到7.2。    双抗1万u/ml          

91、                10ml    灭活小牛血清                           110ml  &

92、#160; 混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4冰箱备用。    (七)青、链霉素溶液    青霉素钠盐(40万u瓶)                 5瓶链霉素(100万u瓶)                &#

93、160;   2瓶将两者溶于200ml0.9的无菌生理盐水，分装小瓶，-30保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。    (八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4。    (九)BrdU溶液(200ug/m1)    用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。    (十)2×SSC溶液用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬

94、酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。  （十一）3琼脂：取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后(15磅20分钟)，冷藏备用，使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。四、制备电镜标本的溶液(一)2.5戊二醛溶液25戊二醛                    lOml    0.1molL二甲砷酸钠缓冲液   

95、; 装入茶色瓶中，保存于4冰箱备用。    (二)0.1molL二甲砷酸钠缓冲液    二甲砷酸钠               10.70g     蒸馏水                  

96、;       500ml    将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4冰箱保存。    (三)包埋剂环氧树脂Epon812                56.30g   DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic

97、    anhydride，DDSA)                14.60g    MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic)    anhydride，MNA               

98、;   29.00g    混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中(室温)备用。    (四)2单宁酸    单宁酸               

99、0;           2g    双蒸水                           100ml溶解后过滤装茶色瓶中，4冰箱保存。(五)高锰酸钾固定剂 柠檬酸三钠   

100、                    60mmol/L氯化钾                           25mmol/L氯化镁 

101、                          35mmol/L    高锰酸钾                   

102、0;     125mmol/LpH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4冰箱中保存，有效期2个月左右。(六)1OsO4溶液 OsO4                             0.5g 0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。      50ml     OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡