铁甲草抑制二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的实验研究

1、铁甲草抑制二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的实验研究         10-08-31 11:21:00     编辑：studa20                  作者：张纪达，温成平，范永升【摘要】  目的观察铁甲草醇提取物抑制二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的作用效果并探讨其作用机制。方法采用

2、二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型，用高、中、低剂量(12.6，4.2，1.4 g/kg)的铁甲草醇提液进行干预治疗，并与秋水仙碱进行对照，检测大鼠肝功能、血清透明质酸(HA)、层粘蛋白（LN）和型前胶原氨基端肽(PC)、 肝组织羟脯胺酸(Hyp)含量及肝脏病理组织学改变。 结果铁甲草高、中、低剂量组血清谷丙转氨酶(ALT)及铁甲草高剂量组血清谷草转氨酶(AST)水平与模型组比较有统计学意义(P <0.05)；铁甲草各剂量组大鼠肝组织Hyp含量均明显低于模型组(P <0.05)。铁甲草各剂量组大鼠血清HA 、LN、 PC含量明显低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。铁

3、甲草高、中、低剂量组肝组织纤维化病变明显减轻，与模型组比较，差异有统计学意义(P <0.05)。 结论铁甲草对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化形成具有明显的抑制作用，其机制可能与保护肝细胞和抑制胶原纤维合成有关。 【关键词】  铁甲草； 肝纤维化； 二甲基亚硝胺Abstract：ObjectiveThe aim of this study was to observe the inhibitive effects of the extract of Cassia mimosoides Linn. on dimethylnitrosamine-induced hepatic fib

4、rosis in rats and to explore the action mechanism. MethodsIntervention treatment with the extract of Cassia mimosoides Linn. was explored in the rats with dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis at the high, intermediate, and low doses of 12.6 g/kg，4.2 g/kg，and 1.4 g/kg respectively, compared w

5、ith the group treated with colchicine. Hepatic function, levels of serum hyaluronic acid (HA), serum laminin (LN), serum aminoterminal propeptide of type III procollagen (PIIINP), hepatic hydroxyproline (Hyp) in rats were assayed and histopathological alterations in rats were examined. ResultsThe re

6、sults indicated that, compared with those in the model group, alterations in the levels of serum alanine aminotransferase (ALT) in the groups treated with extract of Cassia mimosoides at low, intermediate, and high doses, and serum aspartate aminotransferase (AST) level in the group at the high dose

7、 were statistically significant (P<0.05); hepatic hydroxyproline (Hyp) levels in the rats treated with extract of Cassia mimosoides at various doses were significantly lower than those in the model group (P<0.05). Levels of serum hyaluronic acid (HA), serum laminin (LN), and serum aminotermina

8、l propeptide of type III procollagen (PIIINP) in the groups treated with extract of Cassia mimosoides were significantly lower than those in the model group, and the differences were statistically significant (P<0.05). Hepatic fibrosis of rats in the groups treated with extract of Cassia mimosoid

9、es at high, intermediate, and low doses alleviated significantly, and the differences compared with the pathological changes in the model group were statistically significant. ConclusionIt was concluded that, intragastric administration with extract of Cassia mimosoides showed significant inhibitive

10、 effects on the dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis in rats, and the inhibitive mechanisms might be related with the protective effects on hepatic cells and the inhibition on collagen fiber synthesis.      Key words：Cassia mimosoides Linn. (Leguminosae); &

11、#160; Hepatic fibrosis;   Dimethylnitrosamine    铁甲草Cassia mimosoides Linn.为豆科（Leguminosae）决明属植物，味甘、微苦，性凉，归肝、肾和肺经；具有清肝明目、利水通淋和解毒消痈功能；可用于治疗湿热黄疸、头昏眼花、水肿和痈肿疔疮等1。文献报道铁甲草含有大黄素、木犀草素-7-葡萄苷、大黄素甲醚、大黄酸2，3、1,8-dihydroxy-6-methoxy-2-methyl -anthraquinone4。铁甲草在广东梅州地区民间主要用于慢性乙型肝炎和肝纤维化的治疗，

12、为探讨铁甲草对实验性肝纤维化形成的抑制作用，我们以SD大鼠为实验对象，对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化模型进行干预治疗，观察药物的作用效果并探讨其作用机制。1   材料与仪器1.1  动物SPF级SD雄性大鼠，60只，体重160180g，由广东省医学实验动物中心提供，许可证号： 2007A003；在广州中医药大学实验动物中心SPF级实验室饲养，动物实验设施证明：0022793。大鼠饲料由广东省医学实验动物中心提供。1.2  药物铁甲草全草2007-10购于广东省梅州市蕉岭县，用85乙醇提取3次，混合后浓缩成含生药材1.26 g/ml，用时以蒸馏水配成所需浓度

13、。     秋水仙碱：西双版纳版纳药业有限责任公司，规格：0.5 mg/片，批号：20071108，用时以生理盐水溶解。1.3  试剂二甲基亚硝胺(DMN)：购于天津化学试剂研究所，批号：060523,使用前用生理盐水配成0.5%溶液备用；天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHOL）试剂盒，由中生北控生物科技股份有限公司生产；透明质酸(HA) 、层粘蛋白（LN）和型前胶原氨基端肽(PC)试剂盒,由北京北方生物技术研究所生产，批号：080220；总蛋白（TP）和白蛋白(AlB)测试试剂自配。1

14、.4  仪器AU5421全自动生化检测仪(奥林巴斯公司)；FJ-2008PS全自动免疫计数器(西安核仪器厂)；KDC02042 低温冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)；TU-1001型紫外可见分光光度计 (上海紧密仪器仪表有限公司)；OlympusCK40一F200倒置显微镜（日本 Olympusoptical公司）。2  方法2.1  动物分组及造模给药 60只SD雄性大鼠，随机分为6组，每组10只，分别为正常组，模型组，铁甲草醇提取高剂量组、中剂量组和低剂量组(12.6，4.2，1.4 g/kg)，秋水仙碱治疗组(0.2 mg/kg)。除正常组外，其

15、余各组动物均进行肝纤维化模型制备5，以0.5DMN溶液(1199生理盐水稀释)按体重10 mg/kg剂量腹腔注射，每周连续3 d，1次/d，第1周每次用2/3剂量，以后用全量，共4周，正常组用等体积的生理盐水。在制备模型的同时，铁甲草高、中、低剂量组和秋水仙碱治疗组均灌胃给药，1次/d，共4周，正常组和模型组均予等量生理盐水灌胃。第4周末处死动物，摘眼球取血，分离血清，待检；取肝左叶组织，一部分制成匀浆待检，一部分用10甲醛溶液固定，送检。2.2  血清肝功能及肝纤维化指标检测  采用全自动生化仪检测血清肝功能，放免法检测血清肝纤维化指标。2.3  肝组织Hyp测定 采用碱水解法检测肝组织Hyp，按试剂盒说明操作。2.4  病理组织学观察  10甲醛溶液固定肝组织，石蜡包埋切片，常规HE染色，光镜下观察拍照。肝组织纤维化病变按严重程度分为5期(S04)6：S0：无纤