标准氨基酸混合样品的制备

1、标准氨基酸混合样品的制备(稀释后的标准样品放入冰箱可稳定大约1个月)方法一 从含有18种标准氨基酸组分（2.5mol/mL）的混合氨基酸校准混合液中的小玻璃瓶中（味之素株式会社生产，每瓶5.0mL）取出2mL,用0.02N-HCL稀释定容50mL，即为0.10mol/mL(100nmol/mL)的氨基酸标准液。方法二 取0.04mL,用0.02mol/L溶液稀释定容1mL。20l配制好的氨基酸校准混合液中各种氨基酸的浓度为2nmol。（100nmol/mL=100nmol/1000l=0.nmol/1l）蛋白质水解分析缓冲液的组成序号名称pH-1pH-2pH-3pH-4RH-RG1容器（缓冲液

2、）B1B2B3B4B52PH(公称值)3.33.24.04.9-3Na浓度（mol/L）0.160.20.21.20.24蒸馏水（大约）700mL700mL700mL700mL700mL5柠檬酸钠（2H2O）6.19g7.74g13.31g26.67g-6氢氧化钠-8.00g7氯化钠5.66g7.07g3.74g54.35g-8柠檬酸（H2O）19.80g22.00g12.80g6.10g-9乙醇130.0mL20.0mL40.0mL-100.0mL10苯甲醇*-5.0mL-11硫二甘醇*5.0mL5.0mL5.0mL-12聚氧乙烯十二烷基醚（Brij-35*）4.0mL4.0mL4.0mL4

3、.0mL4.0mL13全量（调节）1.0L1.0L1.0L1.0L1.0L14辛酸0.1mL0.1mL0.1mL0.1mL0.1mL注*取25g Brij-35溶于100mL蒸馏水中（需加热）注*苯甲醇可不加（易产生乳化现象）。注*硫二甘醇可不加。注*B1定容前加入1mol/LNaOH溶液9mL；乙醇25mL；B2定容前加入1mol/LNaOH溶液15mL；B3定容前加入1mol/LNaOH溶液4mL。R3加入5%色谱乙醇。注*C1：水R3：5%乙醇+水。注意：称量这些试剂时，按照组分表用天平或者玻璃量器称取。制备优良再现性的缓冲液，不需要调节pH值。缓冲液配好后用50mm,0.45m有机相滤

4、膜过滤（B5用50mm,0.45m水相滤膜）。茚三酮试剂的组成容器显示步骤试剂计量R2茚三酮缓冲液123456蒸馏水醋酸钠（三水）冰醋酸乙二醇甲醚TotalN2鼓泡（沸腾）336mL204g123mL401mL1000mL10分钟以上R1茚三酮12345乙二醇甲醚茚三酮N2鼓泡，溶解硼氢化钠N2鼓泡979mL39g最少5分钟81*（82.7）mg最少30分钟注* 硼氢化钠的纯度为98%。请不要使用以上指定以外的茚三酮试剂。R1和R2配好后分别用50mm,0.45m有机相滤膜过滤。N2气体鼓泡的方法（1）往专用容器R1和R2中加入试剂并充分溶解。（2）连接标注R1和R2的管路，将盖子牢牢拧紧。（

5、3）用调节器（参照图2-6）调节N2压力到3440KPa(0.350.4kgf/cm2 )。 将N2气转换开关置于BUBBLING位，鼓泡30分钟。（4）将N2气转换开关扳到ANALY位，确保N2压力为3440KPa(0.350.4kgf/cm2 )。 图7-1表明N2转换开关位置和N2流路系统之间的关系。BUBBLING 制备茚三酮试剂后，通N2鼓泡（N2混合置换）。 ANALYSIS 分析时，用N2加压到3440KPa(0.350.4kgf/cm2 )。OPEN 更换试剂时释放瓶内的N2。注意：1.鼓泡时，请不要开放N2钢瓶的总压力（气瓶的主压和次压）。2.鼓泡时，请不要进行泵送液，否则，由于N2气压力的降低，在泵送液过程中发生错误操作。柠檬酸三钠优级纯GR 500g国药集团化学试剂有限公司结晶乙酸钠分析纯AR 500g上海埃彼化学试剂有限公司硼氢化钠分析纯AR 100g上海埃彼化学试剂有限公司氯化钠优级纯GR 500g国药集团化学试剂有限公司冰乙酸优级纯GR 500ml国药集团化学试剂有限公司乙二醇甲醚分析纯AR 500ml天津市瑞金特化学品有限公司乙醇（无水乙醇）优级纯GR 500ml国药集团化学试剂有