血清Cj抗体、GM1抗体和格林-巴利综合征的相关性研究

1、    血清Cj抗体、GM1抗体和格林-巴利综合征的相关性研究        摘要目的格林-巴利综合征(GBS)病因及发病机理探讨。方法采用ELISA法测定30例格林-巴利综合征(GBS)患者血清抗空肠弯曲菌抗体(Cj-Ab)及GM1抗体(GM1-Ab)，并与临床严重程度进行相关分析。结果GBS组血清Cj-IgG、IgM阳性率分别为60%、30%，较对照组30.8%和7.7%为高，两组差异有显著性，P值均小于0.05。GBS组GM1-IgG阳性率为38%，而对照组为2.1%，

2、经检验两者差异也有显著性，P值均小于0.05。结论Cj近期感染与GBS发病相关，而GBS的两种抗体与临床严重程度无明显关系。关键词格林-巴利综合征空肠弯曲菌肠炎GM1抗体中号R745.4 Study on Antibodies to Cj and GM1 in Guillain-Barre SyndromeXin QijunCheng Yuansheng(Department of Neurology,Ningbo Medical Centre Li Huili Hospital,Ningbo 315040)ObjectiveStudy on etiology and pathogenesis

3、 of Guillain-Barre syndrome. MethodsAnti-gangliosides GM1 and anti-Cj antibodies in serum were examined in GBS and controls with ELISA assay.Relative analysis was made between those antibodies with clinical severity of GBS. ResultsWe found anti-Cj IgG,IgM in 18 cases(60%) and 9 cases(30%) of GBS pat

4、ients,anti-GM1-IgG in 11 cases(36.7%).There was significant difference for the positive rate between GBS patients and controls group (P0.05). ConclusionOur findings suggested that recent infection of Cj was closely related with the development of GB syndrome.Key wordsGuillain-Barre syndrome;campylob

5、acter jejuni enteritis;anti-gangliosides GM1 antibody格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)是一种周围神经系统急性炎性脱髓鞘疾病，其病因及发病机理尚未定论，多数学者认为它是一种感染后自身免疫或变态反应性疾病，发病与空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,Cj)感染有关14，并在Cj感染后诱发的GBS患者血清中发现GM1抗体也增高57。推测其发病途径是：(1) Cj与人类GM1等周围神经成分存在有交叉抗原，感染Cj后产生抗体，通过交叉反应而导致了神经损害8；(2) Cj产生霍乱样肠毒素，与周围神

6、经的神经节苷脂紧密结合，从而产生神经毒性作用，神经膜上GM1脱落于外围血中诱导产生抗体9。Winer10和Yuki11等认为，Cj感染后诱发的GBS患者临床表现较重，不易缓解，且血清GM1抗体往往较高，故认为血清Cj抗体、GM1抗体测定可作为GBS严重程度、预后的指标，而Uwe Enders等则持反对意见12。本研究拟就血清Cj抗体、GM1抗体阳性与GBS的关系问题进行研究，对GBS病因及发病机理进行讨论。1材料和方法1.1材料1.1.1试剂：空肠弯曲菌菌株(浙江省防疫站)，马抗人IgG、IgM抗体(上海生物制品研究所)，辣根过氧化物酶(Sigma，美国)，GM1(Sigma，美国)，酶标仪(

7、上海三科仪器厂318-MC)。1.1.2临床标本：收集浙医二院神经内科19961997年住院患者血清1 mL，均新鲜分离，放入-20储存备用，共56例。GBS组30例(其中男21例，女9例)，年龄1468岁，平均年龄(35±17)岁。病前腹泻史或腹痛、呕吐者5例，上感史10例，不明原因发热5例，风疹病史1例，水痘病史1例，急性无黄疸型乙肝1例，病前无诱因者7例。发病后560天(d)收取血清，平均病程(18±12) d。Cj抗体对照组26例，性别、年龄均与实验组相匹配。均为病因明确，同期住院患者，包括急性脑血管意外、高血压病、颅内高压症、症状性癫痫、运动神经元病等。以上患者2

8、个月内均无腹泻病史。GM1抗体对照组为健康献血员，其中GM1-IgG组94例，GM1-IgM组76例，其年龄、性别与病例组相匹配。1.2方法1.2.1血清Cj-Ig测定：在改良Skirrow培养基上收获Cj菌，离心洗涤3次。用0.01 mol/L、pH4 PBS稀释成107108 mL超声粉碎(30 s×5，冰水浴)2000 r/min离心弃沉淀，上清液稀释，1400包被微孔，4过夜，次日取出洗涤3次；加入体积分数为10%小牛血清封闭37 30 min，洗涤2次；加入标准品用稀释待检样品37 30 min，洗涤3次；加入酶标抗体(酶标IgG 1400，酶标IgM 1200)37 30

9、 min，洗涤3次后用OPD显色，2 mol/L硫酸终止反应，用空白孔调零，测定各孔A值，根据标准曲线计算各样值。以上稀释剂为0.01 mol/L pH7.4 PBS，洗涤液为含0.05%(体积分数)的Tween-20。1.2.2抗GM1抗体测定：取GM1用无水乙醇溶解，包被于96孔酶标板，每孔各0.35 g/0.05 mL，冷风吹干，用质量浓度为20 g/L的BSA-pH7.4 PBS于4封闭过夜，洗液洗3次；加入1100稀释待检血清每孔0.1 mL,37 60 min，洗涤5次；加入13000稀释的HRP标记兔抗人IgG、IgM抗体(DOKA批号DP214，DP215)，每孔0.1 mL，

10、37 60 min，洗涤5次。另底物OPD每孔0.1 mL显色，避光置20 min，加终止液0.05 mL，选波长492 nm，在酶标仪器测定各孔的吸光度。1.3结果判断1.3.1Cj抗体阳性判断：被检血清Cj浓度高于阴性对照2.1倍以上者为阳性。1.3.2GM1抗体阳性判断：被检血清A值高于阴性对照2.1倍以上为阳性。1.3.3GBS临床严重程度判断：(1) 轻型：肌力在度以上，伴或不伴颅神经损害，无呼吸困难。(2) 重型：肌力在0-度伴呼吸困难或严重的呼吸肌麻痹，必须使用辅助呼吸者。1.4统计学处理采用两样本阳性率比较的x2检验，两样本均数比较的t检验。2结果2.1GBS组与对照组血清Cj

11、抗体阳性率及浓度测定结果GBS组血清Cj-IgG浓度平均值较对照组高，但在统计学上无明显差异，GBS组Cj-IgG阳性率为60%，和对照组(30.8%)比较，P0.05，差异有显著性；GBS组血清Cj-IgM浓度和阳性率与对照组比较皆存在显著差异，P0.05。提示Cj感染与GBS发病相关，感染以阳性率表示较合适(表1)。表1GBS组与对照组血清Cj抗体浓度及阳性率比较Table 1Analysis of concentration and positive rate of Cj antibodies of GBS and control groupGroupNumberCj-AbIgGIgMC

12、oncentration(±s,U/mL) Positive rateConcentration(±s,U/mL) Positive rateGBS307.547±7.53460%(18)*3.122±1.779*30%(9)*Control266.733±9.13730.8%(8)1.584±2.1927.7%(2)*P0.05 compared with control group 2.2GBS组与对照组血清GM1抗体A值及阳性率结果GBS组与对照组血清中GM1-IgG A值、阳性率比较皆存在显著差异，而GM1-IgM A值阳性率

13、在两组中差别不显著，甚至对照组A平均值大于GBS组(表2)。表2GBS组与对照组血清GM1抗体A值及阳性率比较Table 2Analysis of A value and positive rate of GM1 antibodies of GBS and control groupGroupNumberGM1-AbIgGIgMA valuePositive rateA valuePositive rateGBS300.258±0.100*36.7%(11)*0.112±0.1433.3%(1)Control94760.130±0.0802.1%(2)0.130&

14、#177;0.1102.6%(2)Patient number of IgG antibodies in control group is 94;Patient number of IgM antibodies in control group is 76;*P0.05 compared with control group 2.3Cj抗体、GM1抗体与GBS组临床严重程度关系分析统计结果提示，GBS组血清Cj-IgG、IgM、GM1-IgG、IgM与临床轻型、重型不相关联系(P0.05)(表3)。表3血清Cj抗体，GM1抗体与GBS组临床严重程度联系Table 3Clinical sever

15、ity analysis between Cj-Ab,GM1-Ab and GBSSeverity typeNumberCj-AbGM1-AbIgGIgMA valuePositive rateConcentrationPositive rateConcentrationPositive rateLight237.907±8.49752.2%(12)2.959±1.31630.4%(7)0.203±0.07743.5%(10)Serious76.363±2.74271.4%(5)3.656±2.91728.6%(2)0.275±0.1

16、0228.6%(2)3讨论 Cj是一种革兰阴性菌，属于螺旋菌群弯曲菌属，是引起人类腹泻的常见致病菌之一，其传染途径多为摄入被Cj污染的水、食物或接触感染Cj的家禽。在我国Cj的主要传染源为鸡、猪。Cj感染后的GBS，通常在腹泻13周后发病，此时大便培养阳性率很低，常需血清学变化证实有无Cj感染。国外报道Cj感染率在15%64%不等1，13，14；国内李春岩4等检测血清Cj-IgG抗体明显高于对照组外，其滴度变化还与临床病程相吻合。本实验对30例GBS患者进行了血清Cj-Ab、GM1-Ab测定。结果发现，Cj-IgG阳性率达60%，IgM阳性率30%，均与对照组的30.8%和7.7%存在显著差别

17、(P0.05)。结合临床，大部分患者(73.3%)来自农村，其中63.7%患者有长期鸡、猪接触或病前喝生水等历史，皆提示本实验GBS病例发病与Cj近期感染有关，阳性率与国外Kaldor报道相近。我国北方地区GBS患者Cj近期感染率为64%，明显高于本实验组，可能与抽取血清样本时患者平均病程、实验条件的差异有关。本实验中GBS组Cj-IgG阳性率明显高于对照组，而Cj-IgG浓度与对照组比较无显著差异，分析其原因可能由于机体对Cj感染产生免疫反应的强或弱存在有个体差异性，这与本结论即Cj近期感染与GBS发病有关并不矛盾，同时也提示Cj抗体的阳性率这个检测指标更能反映GBS患者Cj的感染情况，而浓

18、度的比较容易掩盖其相关性。有学者57提出，GBS患者血清中GM1抗体浓度亦提高，与对照组存在显著差异，推测GBS与自身免疫反应有关。GM1是神经胞膜最丰富的神经节苷脂之一，它具有抗原性，故血清中GM1抗体检测是观察神经损害，推测其损害机制的一个比较理想的指标。本实验中GBS组GM1-IgG阳性率、A值均与对照组存在显著差异，提示GM1-Ab亦与GBS相关。且GBS组Cj-Ab和GM1-Ab都比对照组有明显升高，提示两者之间存在一定关联，推测Cj感染引起GBS可能通过自身免疫机制发病，导致神经损害，神经组织成分GM1脱落于周围血中，从而刺激机体产生GM1-Ab。其具体机制还有待进一步研究。GBS

19、组患者血清GM1-IgM无论阳性率还是A值与对照组相比都无差别。提示上述Cj感染致GBS这一机制发生在GBS临床症状出现以前或早期，故临床症状明显期往往看不到GM1-IgM的明显升高。本组中血清GM1-IgM阳性患者为1例较为严重的GBS，推测自身免疫不断作用导致临床症状不断出现并加重，故该患者血清中可检测到GM1-IgM。本研究亦对30例GBS患者Cj-Ab、GM1-Ab与临床严重程度作了相关比较。GBS患者中重型7例，其中Cj-Ab阳性5例，阳性率达71.4%；而轻型23例中Cj-Ab阳性占15例，阳性率为65.2%，统计结果二组无明显差别(P0.05)。Cj抗体与GBS临床严重程度无相关

20、性。GM1-Ab检测，GBS重型7例中GM1-Ab阳性2例，阳性率28.6%，轻型23例中抗体阳性10例，阳性率43.5%，统计学处理结果二组也无明显差别(P0.05)。因此本实验提示，Cj-Ab、GM1-Ab与临床严重程度无关。本实验研究表明，Cj感染是GBS发病的致病因素之一，它的致病机制可能与神经组织自身免疫有关，因此GBS血清中GM1-Ab往往有显著升高，但Cj感染及血清GM1-Ab的出现与临床病情轻重无明显联系，提示可能存在另外的作用机制导致疾病临床表现轻重不等。这有待进一步研究。作者单位：忻琪?宁波医疗中心 李惠利医院神经科，宁波 315040程源深浙江医科大学附属二院神经内科参考

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