Mic微生物感染的实验室诊断ppt课件

1、Peking University Health Science CenterLaboratory diagnosis of microorganism infection精品课程精品课程医学微生物学医学微生物学北京大学医学部病原生物学系邹清华P157实验室诊断的意义实验室诊断的意义n明确患者的临床诊断明确患者的临床诊断n选择有效的治疗措施选择有效的治疗措施n预防疾病继续传播与流行预防疾病继续传播与流行n判别患者预后判别患者预后实验室诊断方法分类实验室诊断方法分类n镜下直接察看镜下直接察看n病原微生物分别、培育和鉴定病原微生物分别、培育和鉴定n病原微生物的抗原检测病原微生物的抗原检测n特异性特

2、异性RNA或或DNA片段检测片段检测n抗体和细胞免疫指征的检测抗体和细胞免疫指征的检测n样本的采集、运输、样本前期处置样本的采集、运输、样本前期处置n形状学、免疫学、生物化学、分子生物形状学、免疫学、生物化学、分子生物学和生物学等方法检查出病原微生物及学和生物学等方法检查出病原微生物及其型别其型别n动物实验、细菌毒素检测和药物敏感性动物实验、细菌毒素检测和药物敏感性实验实验细菌感染的实验室诊断细菌感染的实验室诊断n采集操作：无菌操作采集操作：无菌操作 ，做好标志，做好标志n采集部位：组织、血、尿液、粪便、痰、采集部位：组织、血、尿液、粪便、痰、脑脊液、分泌物、呕吐物、胸腹穿刺物及脑脊液、分泌物

3、、呕吐物、胸腹穿刺物及解剖样品等解剖样品等 n采集时机：根据病程开展的不同阶段采集采集时机：根据病程开展的不同阶段采集不同部位的样品不同部位的样品 n运输：应遵照平安、快捷的原那么运输：应遵照平安、快捷的原那么 n前期处置：浓缩前期处置：浓缩 标本采集和运送标本采集和运送 形状学检查形状学检查n细菌的培育特征察看：细菌的培育特征察看：n颜色、气味、溶血性、菌落形状、细菌颜色、气味、溶血性、菌落形状、细菌动力及在液体、半固体、固体培育基中动力及在液体、半固体、固体培育基中的生长形状的生长形状 n显微镜检查法：形状、根本构造、染色显微镜检查法：形状、根本构造、染色性、陈列方式、数量性、陈列方式、数

4、量 n非染色检查法非染色检查法 n染色检查法染色检查法n负染色检查法负染色检查法 细菌分别培育法细菌分别培育法 临床标本临床标本细菌分别：分区划线细菌分别：分区划线细菌培育细菌培育挑取单菌落，纯培育挑取单菌落，纯培育鉴定鉴定细菌感染的实验室诊断程序细菌感染的实验室诊断程序 免疫学检查免疫学检查 n免疫沉淀反响免疫沉淀反响 n凝集反响凝集反响 n补体结合实验补体结合实验 n免疫标志技术免疫标志技术 生物化学检查生物化学检查 n糖代谢实验 n糖发酵实验 n甲基红实验 nV-P实验 n蛋白质代谢实验 n硫化氢产生实验n尿素分解实验n碳源和氮源利用实验 n枸橼酸盐利用实验 n呼吸酶类实验n过氧化氢酶实

5、验n氧化酶实验 分子生物学检查分子生物学检查 nG+C测定技术测定技术 n核酸杂交技术核酸杂交技术 n聚合酶链反响技术聚合酶链反响技术 n质粒指纹图谱技术质粒指纹图谱技术n蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术nDNA芯片技术芯片技术生物学检查生物学检查 n噬菌体裂解实验噬菌体裂解实验 n细菌素分型技术细菌素分型技术 n抗菌谱实验抗菌谱实验 动物实验及细菌毒素检测动物实验及细菌毒素检测 小鼠小鼠豚鼠豚鼠家兔家兔* LD50* ID50药物敏感性实验药物敏感性实验 n纸片分散法纸片分散法 n液体稀释法液体稀释法 nE测定法测定法(E test) n自动化药敏测定法自动化药敏测定法 n耐药基因测定法耐药基因

6、测定法 病毒感染的实验室诊断病毒感染的实验室诊断 标本的采集和送检标本的采集和送检n标本采集部位：标本采集部位：n鼻咽分泌液或痰液鼻咽分泌液或痰液 、脑脊液、脑脊液 、粪便、粪便 、血液、血液 n标本采集时间标本采集时间 n发病早期或急性期发病早期或急性期n标本运送标本运送n对热不稳定，装有冰块或干冰的容器内立刻送对热不稳定，装有冰块或干冰的容器内立刻送检检 n参与青霉素、链霉素等抗生素参与青霉素、链霉素等抗生素 ，抑制细菌和，抑制细菌和真菌生长真菌生长形状学检查形状学检查 n光学显微镜检查光学显微镜检查 n包涵体包涵体inclusion：某些病毒感染宿：某些病毒感染宿主细胞后主细胞后,可在细

7、胞核或浆内出现一个或可在细胞核或浆内出现一个或数个、呈圆形或不规那么、大小不一、数个、呈圆形或不规那么、大小不一、嗜酸性或嗜碱性的构造嗜酸性或嗜碱性的构造 n电镜检查电镜检查 n直接电镜法直接电镜法 n免疫电镜法免疫电镜法 病毒分别和培育病毒分别和培育 n动物接种动物接种n小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、鸡、猴，采用鼻腔、脑内、皮小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、鸡、猴，采用鼻腔、脑内、皮下、皮内、腹腔、静脉等方式下、皮内、腹腔、静脉等方式 n鸡胚培育鸡胚培育n组织培育组织培育n器官培育器官培育n组织培育组织培育n细胞培育细胞培育n原代细胞培育：原代细胞培育： 23代代 用于诊断和疫苗制备用于诊断和疫苗制备

8、 n二倍体细胞培育：二倍体细胞培育：40 10代代 n传代细胞培育：无限传代传代细胞培育：无限传代 用于分别多种病毒，但不能用于用于分别多种病毒，但不能用于制备疫苗制备疫苗 病毒生长繁衍的目的与鉴定病毒生长繁衍的目的与鉴定 n细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)n红细胞吸附红细胞吸附 n红细胞凝集红细胞凝集 n干扰作用干扰作用 n细胞代谢反响细胞代谢反响n空斑构成单位空斑构成单位PFU n细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)n 培育的单层细胞接种病毒后导致细培育的单层细胞接种病毒后导致细胞发生圆缩、溶解、零落等病变的景胞发

9、生圆缩、溶解、零落等病变的景象。象。 病变细胞正常细胞红细胞吸附红细胞吸附红细胞凝集红细胞凝集病毒干扰作用病毒干扰作用空空 斑斑 plaque由病毒感染细胞后在培育瓶的由病毒感染细胞后在培育瓶的琼脂层上构成的一个坏死病灶琼脂层上构成的一个坏死病灶空斑构成单位空斑构成单位 PFU (plaque formation unit)每毫升空斑构成单位每毫升空斑构成单位 病毒蛋白的检测病毒蛋白的检测 nSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 n免疫荧光技术免疫荧光技术 n酶免疫技术酶免疫技术 n固相放射免疫技术固相放射免疫技术 n蛋白印记分析蛋白印记分析 病毒核酸的检测病毒核酸的检测 n核酸分子杂交技术核