国家标准《谷物维生素B1的测定》编制说明

1、国家标准谷物维生素B1的测定编制说明一、任务来源 根据国家粮食局国粮办发2002 251号文下达谷物维生素B1的测定标准制定任务，国家粮食局武汉粮油饲料质量监督检验中心经过试验研究，该标准制定工作基本完成，现提出送审稿。二、制定该标准的目的和意义随着我国加入WTO，国际贸易有了长足发展。GB7628-1987于1987年开始实施，至今已近20年。为我国粮油工业的发展、产品质量的提高作出了应有的贡献。GB7208-1987系等效采用AACCMethod 86-70ThiamineThiochrome Method（1984年英文版），目前，AACCMethod 86-70ThiamineThio

2、chrome Method出版了2000年英文版，并对谷物中维生素B1的测定方法进行了修改。为适应我国加入WTO，国际贸易有了长足发展的需要，因此修订该标准很有必要且十分急迫。三、起草标准的依据本标准在技术上等同采用AACCMethod 86-70ThiamineThiochrome Method（2000年英文版）。为便于使用，按GB/T1.1-2000，GB/T20001.4-2001的要求本标准的编写格式进行了编辑性修改。 并根据GB6379-1986进行统计分析，以确定测定方法的重复性。四、方法的适用性我们用该方法测定小麦、大米、玉米渣、玉米、面粉、稻谷、麦麸等谷物中的维生素B1均得到

3、了满意的结果。五、精密度测定分别取不同的样品，每个样品测定5次， 计算其标准偏差及变异系数，结果见表1。表1 精密度测定试样测定值（mg/kg）平均值（mg/kg）标准差变异系数（%）玉米1#3.65, 3.64,3.48, 3.62,3.543.590.07332.0玉米2#2.78,2.69,2.81,2.64,2.682.720.06422.4玉米3#3.21,3.30,3.18,3.25,3.343.260.05821.8小麦1#4.85, 4.81,4.69,4.66, 4.734.750.08011.7小麦2#5.07,5.13,5.21,5.04,5.165.120.06111.

4、2稻谷1#3.85,3.91,3.62,3.93,3.793.820.11132.9稻谷2#3.20,3.25,3.33,3.27,3.193.250.05081.6糙米1#2.77,2.81, 2.89,2.92, 2.982.870.09183.2糙米2#2.41,2.30,2.38,2.43,2.492.400.06242.6麦麸16.5,16.8,17.5,18.1,17.217.220.55643.2六、回收率测定在不同的样品中，分别加入相应梯度的维生素B1，重新制备测试样品，按本标准方法进行测试，每个梯度重复测定五次，结果见表2表2 维生素B1回收率测定（n=5）试样VB1含量(m

5、g/kg)加入VB1量(mg/kg)测定VB1含量(mg/kg)回收量(mg/kg)回收率（%）平均回收率（%）3.592.005.445.425.405.375.481.851.831.811.781.8992.591.590.589.094.591.64.007.627.447.537.487.554.033.853.943.893.96100.896.298.597.299.098.36.009.609.649.509.459.326.016.05 5.915.865.73100.2100.898.597.795.598.55.122.007.076.997.087.046.941.95

6、1.871.961.921.8297.593.598.096.091.095.26.0010.6110.7610.7010.8410.965.495.645.585.725.8491.594.093.095.397.394.212.016.6816.4916.3316.4516.8711.5611.3711.2111.3311.7596.394.893.494.497.895.3七、实验数据统计分析 本中心及另外二个质量控制良好的实验室对相同的样品进行比对试验，测定结果见表3。各实验室测定数据根据GB6379-1986进行统计分析，以确定测定方法的精密度。 表3各实验室数据统计(mg/Kg)小

7、麦（A水平）玉米（B水平）糙米（C水平）原始数据平均值方差原始数据平均值方差原始数据平均值方差实验室14.854.814.830.00083.643.653.640.000052.812.772.790.0008实验室24.874.814.840.00183.603.593.600.000052.732.732.730 实验室34.834.874.850.00083.643.603.620.00082.832.812.820.0002(1) 检验单元方差小麦： 最大方差在实验室2，检验值4.84 科克伦检验统计量C=0.717；玉米： 最大方差在实验室3，检验值3.62 科克伦检验统计量C=0

8、.962；糙米：最大方差在实验室1，检验值2.79 科克伦检验统计量C=0.941； 根据GB6379-86可知，当p=3，n=2时，科克伦检验临界值为0.993（1%概率水平）和0.967（5%概率水平），因此在各水平的方差值中，科克伦检验均未发现异常值。 (2) 检验单元平均值格拉布斯检验小麦：Gn=1.088；玉米：Gn=1.150；糙米：Gn=1.153； 根据GB6379-1986可知，当n=3时，格拉布斯临界值为1.155 (5%概率水平和1%概率水平)，因此在各水平均值中用格拉布期检验未发现异常值。(3) 总平均值m，重视性r，再现性R的计算。依据GB6379-86的规定，分别计

9、算各试样的m、r、R，见表7、表8。表7 各试样的m、r、R水 平小麦玉米糙米Pi333mj4.843.622.78rj 0.09430.03430.0511Rj0.09430.03430.0511 (4) 结论本次试验重复性变异系数:小麦：0.34玉米：0.70糙米：0.66本次试验再现性变异系数：小麦：0.34玉米：0.70糙米：0.66 以上数据是在有不同实验室参加的非分割水平试验中得出的，未发现异常值。附件： 1.验证报告2.译文附件1： 验证报告应国家粮食局武汉粮油饲料监督检验中心的请求，我单位承担谷物中维生素B1的测定、谷物中维生素B2的测定、谷物水分的测定等国家标准的验证工作，结

10、果见附表1、表2、表3。附表1 谷物中维生素B1测定结果（mg/kg）样品名称测定结果平均值玉米3.643.603.62小麦4.834.874.85糙米2.832.812.82附表2 谷物中维生素B2测定结果（mg/kg）样品名称测定结果平均值玉米1.521.581.55小麦1.281.341.31糙米1.011.071.04附表3 谷物水分测定结果（%）样品名称测定结果平均值稻谷5.705.615.66小麦4.985.065.02小米5.425.345.38稻谷11.3511.4711.41小麦12.3212.3012.31小米10.3510.4610.40稻谷18.3618.3418.35

11、小麦19.3619.2119.28小米17.6417.5617.60湖北省粮油食品质量监测站2004-5-8验证报告应国家粮食局武汉粮油饲料监督检验中心的请求，我单位承担谷物中维生素B1的测定、谷物中维生素B2的测定、谷物水分的测定等国家标准的验证工作，结果见附表1、表2、表3。附表1 谷物中维生素B1测定结果（mg/kg）样品名称测定结果平均值玉米3.603.593.60小麦4.874.814.84糙米2.732.732.73附表2 谷物中维生素B2测定结果（mg/kg）样品名称测定结果平均值玉米1.481.591.54小麦1.321.271.30糙米1.011.061.04附表3 谷物水分

12、测定结果（%）样品名称测定结果平均值稻谷5.805.715.76小麦4.784.984.88小米5.535.715.62稻谷11.4811.6011.54小麦12.2112.1512.18小米10.5510.4310.49稻谷18.0518.2118.13小麦19.0118.9118.96小米17.6817.5017.59湖北省饲料质量监督检验站2004-5-8附件2：译文硫胺素一硫色素测定法 (1960年5月5日首次批准；1999年11月3日再次批准) 范围用淀粉酶和蛋白分解酶处理样品，样品中的硫胺素被铁氰化钾氧化成硫色素，具有荧光性的硫色素被异丁醇提取，再进行荧光测定。深色或含有干扰物质的

13、样品溶液氧化生成硫色素前需要提纯。本方法适用于面包和谷物类产品、玉米渣、玉米粉、爆裂谷物制品，淀粉、面粉。设备 1.荧光计，市场上任何型号仪器都适用。一般情况下，操作方法、滤色片的安装和附件装置按仪器制造者推荐的方法进行。 2.水浴或蒸气浴，1003.水浴或恒温箱，37404.吸收管。容器长约50毫米，直径25毫米，吸收管内径56毫米，长约140毫米，末端是10毫米长的毛细管，其孔径在通气时流速应控制在不大于1毫升/分钟。5.容量25毫升具塞玻璃量筒或离心分液漏斗。试剂1 氢氧化钠溶液，15%，15克氢氧化钠溶水中，冷却，稀释至100毫升。2 铁氰化钾溶液， 1克铁氰化钾溶于水中，稀释至100

14、毫升。如贮存在具塞棕色瓶中，放置于冷暗处，可以保持稳定不变质。3 1N硫酸溶液，2.8毫升浓硫酸向水中稀释至1升。4 乙酸钠溶液，2.5M，溶解205克无水乙酸钠或340克三水合乙酸钠于水中，稀释至1升。5 酶制品。每天现配现用2%酶溶液，或在2.5M乙酸钠的酶悬浮液。现在市场上出售的任何一种酶都可适用，包括淀粉酶，蛋白分解酶（含量分别为250KBS/mL和500血红蛋白单位/mL）。6 异丁醇。空白值应低于硫胺素标准（试剂10）的1%。如有必要，可在全玻璃仪器上蒸馏，或加入活性炭振摇除去荧光杂质。7 氯化钾溶液。溶解250克氯化钾于水中稀释至1升。8 硅酸盐离子交换剂a.活性沸石。称取100

15、克过5080目筛的浮石制品于布氏漏斗中，用3%热乙酸溶液洗涤15分钟，重复，真空抽去酸液，再用25%热氯化钾洗涤，让乙酸与浮石保持接触1015分钟，用减压抽出乙酸。再用乙酸洗涤，最后用热水洗涤至洗出液用硝酸银检查时不出现氯离子。在室温或低于100烘箱中干燥浮石，贮存于具塞的瓶中。 b.Bio-Rex70，50100目用以下方法转换为H型。加入300 mL2N盐酸于50克硅酸盐离子交换剂中，振摇1015分钟，将酸倒出,加300 mL水于Bio-Rex70中，振摇1分钟，将水倒去，重复,直至将树脂的pH洗到4.5-7.0,如不马上使用，可抽滤或离心除去多余的水分。冷藏储存。9 硫胺素贮备液，100

16、g/mL。将硫胺素盐酸盐放在放有五氧化二磷的干燥器至少干燥24小时，然后称取100毫克溶于25%乙醇，并用25%乙醇稀释至1升。硫胺素贮备液在冷藏条件下，可保存数月。10 硫胺素标准溶液，0.2g/mL。将5毫升硫胺素贮备液(放至室温)用水稀释至100毫升，再取4毫升上述中间溶液用0.1N硫酸稀释至100毫升(见注1)。每天临用时现配。11 硫酸奎宁溶液。溶解100毫克硫酸奎宁于0.1N硫酸中，用0.1N硫酸溶液稀释至1升。再取3毫升该溶液用0.1N硫酸稀释到1升，储存于棕色瓶内。操作步骤标准曲线 标准溶液与试样平行测定。 样品处理 1 小麦、大米或其它整粒谷物产品，用实验室磨粉碎。过20目筛

17、，用混样器或其他适当方法充分混匀磨碎好的样品。2 面包，取足以代表一个、半个或四分之一个面包，并经空气干操的已知重量面包片，置放在暖处，减弱光线并保持空气流通直至样品与空气湿度达到平衡。称取面包片重量，测定其在空气干燥中损失的水分。再用实验室磨粉碎该样品，过大约20目筛。用烘箱法测定该干燥样品的水分。计算硫胺素含量时可以“来样计算”或以校正水分含量的“干基计算”。3 玉米渣、玉米片、爆裂粮谷，谷物粉和面粉。取大量样品(200300克)：在适当容器或机械搅拌器中搅匀，用实验室粉碎较大颗粒样料，过20目筛或更细。粉碎后充分混匀。提取 1 取含有约20微克硫胺素或最终供氧化的试液(5毫升)中含约1微

18、克硫胺素(见注1)样品。 2 将称量好的样品置于100毫升容量瓶中。加50毫升0.1N硫酸在沸水浴中加热10分钟。3 冷却至40以下，加5毫升酶悬浮液(试剂5)在3740下恒温放置至少4小时，冷却至室温，用水稀释至100毫升。 4 充分混匀已消化好的样品浸出液，用华特曼1541号滤纸或S&S597号滤纸过滤。弃去最初过滤的几毫升(见附注2)。5 如不要求纯化，可移取适量试液直接进行氧化步骤(见附注2)。提纯1 本步骤仅限于提取液色泽很深或含有干扰物质时才采用。为确定有无干扰物质存在，可以测定两个采用与不采用提纯步骤的平行试验。2 取适量澄清试液(见注2)，送进吸收管柱，此时经过洗涤离子

19、交换树脂仍然是湿润的(见注4)。连续三次每次用5毫升的热水洗涤容具及管柱，以确保硫胺素在柱上分配完全。 3 用煮沸的25%氯化钾溶液，从离子交换树脂洗脱被吸收的硫胺素,收集洗脱液的体积见注2，此体积应包含所有的硫胺素。4 将洗脱液收集于25毫升具塞刻度玻璃试管中，以便准确测量体积。 氧化 1 将盛有洗出液的刻度试管倒转3或4次，使之充分混匀。移取5毫升于具塞离心分液漏斗中（硫色素反应管）。再移取同样的5毫升试液于第二只具塞玻 璃离心分液漏斗中进行空白试验。分别编号为1和2。2 于1号反应管中，加入3毫升碱性铁氰化钾(见注5)，另一反应管中加入15氢氧化钠溶液，振摇约30秒钟。在两只反应管中分别

20、加入15毫升异丁醇，剧烈振摇60秒钟。3 离心分离(见注6)，吸去水层，在异丁醇层中加入1毫升95%乙醇，混匀。4 将10毫升异丁醇层倒入比色杯中，读取硫色素的荧光值。测定 l 用电流偏转来表示约10毫升异丁醇溶液的荧光值，做为空白。根据制造厂的说明书调节荧光计(见附注1和7)。2 在相应的样品读数中扣去空白数值。计算 硫胺素，mg/磅=(Rx-Rxb) * V *E*C*0.454/(Rs-Rsb) *Z*X*S 其中： Rx 未知样品的荧光值xb空白的荧光值Rs VB1标准溶液的荧光值 Z通过离子交换管样品的体积，mlE洗脱时收集洗出液中的体积, mlS样品质量，gV提取液的体积(100毫升)C标准溶液的浓度（通常为0.2g/mL）X参与反应样品溶液体积与参与反应标准溶液体积的比值（通常5/5=1） 附注 1 使用硫酸奎宁溶液或玻璃标准块来校正荧光计。欲使仪器处于标准状态，就需定期的用硫酸奎宁或玻璃标准块进行校正。如果得不到初始读数，可用硫胺素标准液再重新校正电流计，标准硫胺素溶液浓度为每5毫升最终溶液中含1g